《Cell Stem Cell》：EPCR expression marks CD150neg deeply dormant long-term hematopoietic stem cells
编辑推荐：
细胞表面SLAM家族成员CD150的表达长期被广泛应用于长期造血干（LT-HSC）的先验分选。研究人员发现，在CD150?多潜能祖细胞（MPP6）中存在一类表达内皮蛋白C受体（EPCR）的亚群，定义为LT-HSC2。该亚群可进行连续多系重建，其长期标签滞留能力
细胞表面SLAM家族成员CD150的表达长期被广泛应用于长期造血干（LT-HSC）的先验分选。研究人员发现，在CD150?多潜能祖细胞（MPP6）中存在一类表达内皮蛋白C受体（EPCR）的亚群，定义为LT-HSC2。该亚群可进行连续多系重建，其长期标签滞留能力表明其比经典EPCR+CD150+ LT-HSC1更为深沉地处于休眠状态；在炎症应激下，其细胞周期激活受限，并能在体内长期维持干性。将EPCR与CD34、CD150联合分析，可精细解析最早向巨核/红系偏倚CD150+与淋巴偏倚CD150?轨迹分化的阶段。研究表明，HSC与MPP中的EPCR表达与干性增强相关，而CD150并不能涵盖全部长期重建HSC。该发现确立EPCR+CD150? LT-HSC2为一类独特且极度休眠的干细胞亚群，并揭示出调控自我更新、降低应激敏感性及早期谱系启动的新的HSC异质层。
论文解读：EPCR界定CD150阴性深度休眠长期造血干细胞及其分类学重构
研究背景与立项依据
长期造血干细胞（LT-HSC）以自我更新、连续多系重建与多潜能维持为核心特征。小鼠HSC常规表型为Lin?Sca-1+c-Kit+（LSK）CD34?CD48?CD135?CD150+。CD150（Slamf1）作为SLAM家族标记，二十年来被视为HSC分选金标准，但既往研究已提示CD150?区室仍含长期重建活性，因缺乏稳定表面标志而长期被忽视。多潜能祖细胞（MPP）框架将MPP6定义为LSK CD34?CD48?CD135?CD150?，其中混有红系定向污染。内皮蛋白C受体（EPCR）是跨物种保守、体外与炎症条件下稳定的HSC标记，却未纳入现有MPP分类。研究人员据此提出假设：MPP6存在异质性，EPCR可分离出真正LT-HSC。
主要技术方法概述
研究人员构建基于流式细胞术的精细分选体系，利用UBC-GFP与SCL-tTA;H2B-GFP小鼠模型，结合体外多系OP9共培养、群体与单细胞水平连续及次级移植重建、Ki67/DAPI细胞周期与CellTrace Violet增殖分析、长期标签滞留（LRC）检测，并整合已发表scRNA-seq、mini-bulk RNA-seq及低输入ATAC-seq，对LT-HSC1与LT-HSC2进行转录组与染色质可及性比较。
研究结果
EPCR表达在表型MPP6中界定两类亚群
通过已发表单细胞转录组与索引排序匹配，研究人员发现表型MPP6可经EPCR拆分为EPCR+与EPCR?。EPCR+细胞高表达Hlf、Fgd5等干性基因，接近HSC；EPCR?细胞富集Epor、Gata1与细胞周期程序，表型近似巨核/红系祖细胞。体外培养与BFU-E/CFU-E门控证实，EPCR?MPP6主要为增殖性红系前体。由此获得两类真实LT-HSC：LT-HSC1（EPCR+CD150+）与LT-HSC2（EPCR+CD150?，原属MPP6）。
LT-HSC1与LT-HSC2的功能比较
体外多系培养显示二者均具多系输出，LT-HSC2后期呈B细胞偏倚。30个细胞级连续移植中，LT-HSC2在初级与次级受体中维持超过48周多系重建，自我更新与LSK重建能力与LT-HSC1相当，但红系输出减弱、淋巴偏倚增强。单细胞移植进一步显示两群均含高、中、低潜能连续谱，LT-HSC2亦可落入最potent长期集群。
LT-HSC1与LT-HSC2的单细胞功能异质性
对单细移植重建矩阵聚类，识别出LT-HSC、中间型、短期与类非HSC四类。LT-HSC2分布于全部HSC集群。索引排序显示LT-HSC1中c-Kit与CD150中间表达关联更高干性；LT-HSC2整体c-Kit偏低且缺CD150，表面标记不能简单预测其单细潜能。
LT-HSC1与LT-HSC2的转录差异
mini-bulk RNA-seq显示两群整体相近，仅73个差异基因。LT-HSC1上调Foxm1、Top2a等细胞周期与Vwf、Gfi1b等巨核/红系基因；LT-HSC2上调Flt3、H2-Ob等淋巴相关基因，GSEA显示其更静息、富集趋化与黏附程序，且不依赖视黄酸代谢与Netrin1-Neo1轴维持休眠。
深度休眠是LT-HSC2的功能特征
细胞周期与CTV实验显示LT-HSC2更久居G0、分裂更少。H2B-GFP标签滞留模型中，100天追标时LT-HSC2的LRC比例高于LT-HSC1；>200天后仍保留10%–15% LRC，而LT-HSC1仅约2%。移植表明LT-HSC1非LRC已耗竭，LT-HSC2非LRC仍具完整重建力，证明其干性保存优势。
LT-HSC2的炎症应答
体内poly I:C与IL-1刺激下，LT-HSC2细胞周期激活弱于LT-HSC1，呈应激屏蔽；但体外IL-1 priming可快速诱导CD11b上调与早期髓系应急输出，说明其具应激可塑性而非缺失应答。
综合表观组学重构HSC/MPP景观
ATAC-seq显示EPCR+对应原始染色质态，CD150表达轴反映谱系定向：PC1为谱系启动（巨核/红系vs淋巴），PC2为干性（EPCR）。EPCR?MPP6实属红系祖细胞；EPCR+MPP1与MPP5分别对应ST-HSC1/2。TF motif分析识别HSC、巨核/红系、髓系、淋巴调控分支，GATA族在红系支正富集、淋巴支负富集。
各HSC亚群的差异表观启动
LT-HSC1与LT-HSC2仅70个DAR，LT-HSC1开放细胞周期位点，LT-HSC2开放Cables1-p21、趋化与淋巴位点（Notch1、Flt3、Cd4），确认CD150+向Mk/E、CD150?向淋巴早期偏离。
讨论与结论翻译
讨论指出，研究以功能、转录与表观证据确立CD150?MPP6中EPCR+LT-HSC2为真正LT-HSC，使可定义功能HSC池扩展逾15%。LT-HSC2具更深休眠、淋巴偏倚与应激耐受，其微环境锚定可能不同于经典HSC。局限在于休眠微环境机制与年龄、炎症、恶性转化中作用待解。
研究结论：研究人员揭示EPCR+CD150?LT-HSC2是一类此前被遗漏的具长期多系重建能力的极深休眠HSC；EPCR联合CD34与CD150重新划分HSC/MPP层级，揭示自我更新、应激低敏与早期谱系定向的新异质维度。
这篇论文解读已完成，接下来可以选择一个方向继续深化：
