《Scientific Reports》：Salivary cortisol measurements for reliable numerical maximum concentration after the low dose 1 μg ACTH intravenously in healthy individuals
编辑推荐：
摘要专业翻译
本研究探讨了1 μg促肾上腺皮质激素（ACTH）激发试验在确定刺激后最大反应最佳测量时间方面的潜在应用价值，并评估了唾液皮质醇在该时间点是否可替代血清皮质醇。数据来源于一项探讨瑜伽作为压力管理干预措施的临床试验。研究人员招募了来自医疗保健行业、承
摘要专业翻译
本研究探讨了1 μg促肾上腺皮质激素（ACTH）激发试验在确定刺激后最大反应最佳测量时间方面的潜在应用价值，并评估了唾液皮质醇在该时间点是否可替代血清皮质醇。数据来源于一项探讨瑜伽作为压力管理干预措施的临床试验。研究人员招募了来自医疗保健行业、承受压力的健康在职受试者（n = 36，其中男性8人），年龄25–62岁。在静脉注射1 μg ACTH后60 min内，研究人员同步采集血清和唾液皮质醇样本共6次。采用Fisher-Pitman置换检验和广义估计方程（GEE）对数据进行分析。血清和唾液中的大多数峰值反应出现在30和40 min。此外，这些时间点的中位最大反应值与所有采样时间点的中位值相似（P = 0.1和P = 0.06）。血清和唾液皮质醇反应曲线在30–40 min时呈平行趋势（P = 0.83）。在1 μg ACTH激发试验中，唾液皮质醇可替代血清皮质醇来评估有应激相关疾病风险人群的最大应激反应能力，如本研究所显示，仅需在30和40 min两个时间点采样。
论文解读
一、研究背景与问题
慢性应激及应激相关疾病，包括疲劳衰竭、适应障碍和临床倦怠，给个体、家庭和社会带来巨大痛苦和长期问题，且代价高昂。这些诊断较为模糊且主要基于症状，从疾病前驱期到明确诊断往往经历漫长且波动的过程。早期识别这些人群有助于改善康复结局。然而，由于缺乏客观测量指标，诊断、康复评估和治疗评价均面临挑战。
皮质醇是机体应对各类应激（包括工作场所心理应激）的关键激素，测量皮质醇可作为感知身心应激的标志物。在应激反应中，下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴释放的激素——如促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质醇——在血清和唾液中迅速升高。目前评估HPA轴功能的常用检测方法包括高剂量或低剂量ACTH激发试验、CRH激发试验以及胰岛素诱导的低血糖试验。部分研究者认为1 μg ACTH试验比250 μg ACTH试验更充分、更具生理性且更敏感。系统综述表明两种试验准确性相似。
然而，现有ACTH激发试验在临床应用中主要关注血清皮质醇是否达到特定阈值（通常为500或550 nmol/L）以判断肾上腺功能是否正常，而非精确测量刺激后的最大反应值。但在应激诊断中，评估个体应激负荷时，刺激后皮质醇的最大增加值可能比单纯判断是否超过阈值更为重要，因为严重应激患者的皮质醇分泌可表现为高反应性或低反应性，取决于疾病阶段。此外，血清采样耗时、繁琐且常需医疗监督，而唾液采样可由受试者自行完成棉签采集，节省时间和人力。血清中约75%的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白（CBG）结合，约15%与白蛋白结合，妊娠、口服避孕药或某些药物可改变CBG水平，严重疾病时白蛋白水平可能下降，这些因素使血清皮质醇测量复杂化。唾液中皮质醇主要以游离形式存在，测量唾液皮质醇可准确反映具有生物活性的游离皮质醇，避免CBG和白蛋白水平变化的影响。
既往应激研究多采用地塞米松-CRH（DEX-CRH）联合试验并多次采集血清样本，尚未有研究采用ACTH激发试验结合血清样本或最大唾液皮质醇增加值来评估慢性应激及应激相关疾病中的HPA轴功能。因此，本研究提出假设：1 μg ACTH试验可在最大反应时间点采样并使用最高反应值进行评估，唾液皮质醇可作为评估经历慢性应激的健康个体应激反应能力的血清皮质醇替代方案。
二、研究目的
本研究的主要目的是确定1 μg ACTH试验后血清和唾液样本中皮质醇反应达到峰值的时间点。次要目的是评估在经历慢性应激的健康个体中，血清和唾液皮质醇曲线在这些采样时间点是否平行。
三、研究方法与关键技术
本研究为实验性研究，在瑞典斯德哥尔摩Liljeholmen初级保健中心开展。数据来源于一项探讨瑜伽作为医护人员压力管理方法的研究。研究人员通过自我推荐方式从斯德哥尔摩9个医疗机构（包括初级保健中心、医院和养老院）的全职工作人员中招募了36名健康个体（28名女性、8名男性），年龄25–62岁。所有参与者均经医生检查和访谈，排除患有慢性疾病或服用任何药物者，确保过去三个月内未使用任何形式的外源性糖皮质激素，且未出现自然升高的皮质醇水平。女性均未使用激素类避孕药或接受激素替代治疗，绝经前女性在月经周期第3–9天（卵泡期）完成ACTH激发试验。
1 μg ACTH激发试验于早晨07:00–09:15进行，参与者从午夜起禁食，避免酒精、尼古丁和含咖啡因饮料，测试前12 h避免任何可能导致呼吸急促的劳累。参与者全程保持仰卧位，静脉插管置入肘前静脉并以生理盐水保持通畅，插管后休息30 min以消除插管对皮质醇水平的影响。ACTH（Synacthen?，诺华医疗，哥本哈根，丹麦）新鲜配制为1 μg/mL浓度，采用全瓶使用且不接受瓶内死腔体积的稀释方法。基线唾液和血液样本于0 min采集，随后1 min内经静脉插管注射1 μg ACTH，并在注射后20、30、40、50和60 min同步采集唾液和血液样本。唾液样本采用Sarstedt Salivette?管收集，血液样本采用无添加剂真空采血管收集，样本离心后冷冻保存。血清皮质醇采用免疫荧光法（AutoDelfia）测定，唾液皮质醇采用包被管竞争性放射免疫分析法（RIA）（Spectria Cortisol RIA）测定，所有样本均在斯德哥尔摩Karolinska大学实验室分析。
统计方法包括：计算各时间点最大反应次数以确定最佳采样时间；采用Fisher-Pitman置换检验比较30和40 min中位最大浓度值与所有时间点中位值；采用广义估计方程（GEE）评估血清和唾液皮质醇浓度曲线是否平行，使用Huber-White三明治估计量计算标准误；计算唾液皮质醇截断值及参考范围。
四、研究结果
最大反应时间：1 μg ACTH后血清和唾液中评估最大皮质醇反应的最佳时间为30和40 min。将30和40 min测量合并后，血清中36次刺激中有30次、唾液中36次中有29次在这些时间点出现最高反应。另有2次血清和2次唾液刺激在30–40 min出现反应，差异极小（血清差异1.5和3.6 nmol/L，≤0.5%；唾液差异0.2和0.4 nmol/L，≤0.8%），在报告的批内和批间变异系数范围内，属于分析变异性而非真实差异。因此，血清中32次、唾液中31次刺激在30–40 min出现最大或接近最大反应。Fisher-Pitman置换检验显示，30和40 min采样与所有时间点采样在血清（P = 0.12）和唾液（P = 0.06）中均无显著差异，表明仅在刺激后30和40 min采集样本足以记录个体峰值反应。30 min与40 min的反应值在血清（P = 0.78）和唾液（P = 0.85）中均相同，中位差异分别为血清1.1 nmol/L和唾液0.1 nmol/L。
平行浓度曲线：采用GEE对全部36名参与者计算，血清和唾液皮质醇浓度曲线在30和40 min时近似平行。原始数据（β = 1.76；95% CI -13.8至17.27；SE 7.9；p = 0.82）和对数转换数据（β = 0.006；95% CI -0.08至0.09；SE 0.044；p = 0.90）均支持这一结论。分别分析女性和男性时观察到相同模式。女性（n = 28）原始数据（β = 0.66；95% CI -1.26至2.57；p = 0.502）和对数转换数据（β = 0.0023；95% CI -0.009至0.013；p = 0.67），男性（n = 8）原始数据（β = -1.5；95% CI -3.35至0.34；p = 0.11）和对数转换数据（β = 0.006；p = 0.085）。此外，所有参与者在30和40 min时血清和唾液的中位皮质醇浓度相似。这些发现提示在30和40 min采集唾液替代血清可能是评估个体刺激后最大反应的可靠选择。
唾液截断值：为与既往研究比较，研究人员建立了1 μg ACTH试验后正常反应的唾液截断值。与血清浓度500 nmol/L和550 nmol/L相对应的唾液阈值在第2.5百分位均为23 nmol/L。指数拟合中血清与唾液皮质醇相关性r2 = 0.83，图显示CBG饱和发生在500–550 nmol/L之后，表明CBG饱和未影响转换。两个血清截断值对应的唾液截断值均为23 nmol/L，进一步支持CBG饱和未影响唾液截断值转换的结论。
参考范围：未刺激状态下的参考范围仅用于与既往研究比较，基于研究人群数据计算（n = 36）。血清皮质醇参考范围为133–537 nmol/L，唾液皮质醇参考范围为5.5–42.6 nmol/L（下限调整为功能灵敏度）。在血清和唾液皮质醇中，本研究健康个体参考范围的下限均低于实验室参考范围。
五、讨论与结论
讨论部分总结：本研究使用低交叉反应性皮质酮（<1%）放射免疫分析法，证明在健康个体中，1 μg ACTH试验后30和40 min的唾液采样可能足以可靠测量峰值皮质醇。血清和唾液皮质醇浓度曲线在30和40 min的相似性（原始数据P = 0.82，对数转换数据P = 0.90）表明唾液采样可能替代1 μg ACTH试验中的血清采样。该试验主要用于临床和内分泌学环境中评估HPA轴功能，包括应激反应缺陷和躯体疾病诊断。由于HPA轴控制机体对应激的反应，且1 μg ACTH试验被广泛认为是评估个体应激反应能力的可靠指标，该试验可能为评估个体处理应激刺激的能力提供有价值的信息，并可能作为评估个体应激反应的工具。仅采集两份唾液样本提供了一种经济高效、更快且无创的替代方案。
研究局限性包括：研究人群为承受压力的医护人员，年龄范围广，以女性为主（28名女性对8名男性），难以推广至更广泛人群；参与者通过自我推荐招募，可能为活跃群体而影响结果；男性组样本量小，不足以进行独立统计分析；数据来源于瑜伽和应激研究，未进行专门功效分析；使用RIA分析皮质醇浓度，而目前多数实验室采用LC-MS/MS，后者在低浓度下精度更高，两种方法参考限不同。
既往研究表明应激可影响HPA轴功能，导致DEX-CRH试验、ACTH试验或标准化餐后皮质醇分泌改变，支持使用ACTH试验识别应激相关疾病风险人群。本研究提出的1 μg ACTH试验联合唾液采样且仅进行两次采样的方案，可能为临床实践和大规模研究提供有吸引力的替代选择。唾液与血清皮质醇浓度的相关性已有报道，但尚无其他研究证明ACTH刺激后最大反应发生时的30和40 min血清与唾液皮质醇浓度曲线平行。平行性并不证明唾液与血清皮质醇之间的可互换性，未来研究应予以解决。
关于1 μg ACTH试验的稀释方法，近期研究表明稀释方法对最终注射的ACTH剂量至关重要。本研究采用的稀释方法与产生相对较高剂量（0.78 μg ACTH）的方法相似，且使用全瓶并仔细确认稀释过程各步骤无死腔，这些操作应增加试验中较高ACTH浓度的可能性，但可能仍不足。如果注射剂量低于预期，可能影响结果，因此本研究中提供的浓度和参考区间应谨慎解读并在未来研究中仔细检验。
结论部分翻译：在本研究中，研究人员探讨了1 μg ACTH试验作为临床和应激研究工具评估健康但承受应激个体HPA轴反应性的潜力。研究考察了（1）捕获峰值反应的最佳采样时间，以及（2）血清和唾液皮质醇曲线在这些时间点是否平行。研究结果表明，1 μg ACTH试验仅在刺激后30和40 min采集两份唾液样本，可能是更便宜、更简单、侵入性更小且更省时的选择，适用于包括健康个体和潜在患者在内的大群体。此外，除在识别应激相关疾病风险人群和科研方面的临床应用外，采用30和40 min唾液采样的1 μg ACTH试验也可能作为临床内分泌学中确认或排除HPA轴疾病的更快、更安全、侵入性更小的替代方案。然而，该方案仍需要在性别分布均衡的更大群体中评估，并结合评估分析或其他可验证可互换性的分析方法。
