技术推荐 | 不用剥脱即可轻松检测磷酸化蛋白的方法，你知道吗？

磷酸化蛋白定量的难点

蛋白质的磷酸化和去磷酸化是可逆性调节蛋白质功能的重要方式，几乎涉及所有生理、病理过程。通过蛋白质的磷酸化与去磷酸化，细胞控制着信号的传递过程，进而影响细胞的生物学效应与功能，在生命活动中发挥着重要作用。

在进行蛋白质磷酸化Western Blot分析检测时，需要同时检测磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平。但两者分子量差距很小，使用化学发光方法进行检测时，需要先使用磷酸化蛋白抗体进行孵育、检测，之后进行剥离，再重新孵育该蛋白的抗体进行检测。

这种方法需要重复进行一抗孵育，且存在失败风险，那有没有什么方法可以实现磷酸化蛋白快速便捷的检测呢？

LICOR近红外荧光检测

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LI-COR公司的Odyssey 双色近红外荧光Western Blot检测方法使用不同荧光基团标记的二抗，即可同时检测磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平，因为无需进行剥离及再孵育，缩短了磷酸化蛋白检测的时间（如下图，缩短近4h），实现了高效便捷的磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平检测，同时蛋白定量更为准确。

化学发光和近红外荧光Western blot流程时间对比表

文献展示

《Quantitative Evaluation of Signaling Events in Drosophila S2 Cells》使用LI-COR Odyssey 双色近红外荧光Western Blot检测经LPS处理的S2细胞中总JNK蛋白和磷酸化JNK蛋白(p- JNK)的含量。

实验结果表明，果蝇的S2细胞经过LPS处理后，通过LMD途径导致瞬时性的JNK磷酸化，且在LPS处理5min时JNK磷酸化水平达到最高。

文献中还提到，定量WB检测依赖于LI-COR Odyssey 近红外成像系统，该系统在相对定量蛋白样品方面具有明显优势。

更多丰富应用

基因有限公司 & LICORbio

自1997年起，基因有限公司便成为LI-COR生物技术产品线（现LICORbio）在中国区的全国代理商。在这30年里，基因有限公司秉承着“ 专才为专家服务”的理念和初心，为客户提供先进的产品和优质的服务，与LICORbio共同见证了中国生命科学和生物医药产业的快速发展。

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