《Frontiers in Microbiology》：Preliminary evaluation of the TB-IGRA VIRCLIA? Monotest chemiluminescent interferon-gamma release assay: a comparative agreement study with QuantiFERON-TB Gold Plus
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目的： 研究人员评估了新型化学发光TB-IGRA VIRCLIA? Monotest与QuantiFERON?-TB Gold Plus（QFT-Plus）在检测结核感染方面的定性和定量一致性。
方法： 在这项前瞻性比较研究中，研究人员分析了226份连续送检用
目的： 研究人员评估了新型化学发光TB-IGRA VIRCLIA? Monotest与QuantiFERON?-TB Gold Plus（QFT-Plus）在检测结核感染方面的定性和定量一致性。
方法： 在这项前瞻性比较研究中，研究人员分析了226份连续送检用于常规结核感染检测的样本，同时使用了TB-IGRA VIRCLIA? Monotest和QFT-Plus化学发光免疫分析法（CLIA）。两种检测方法间的一致性通过计算总体一致率、阳性一致率（PPA）、阴性一致率（NPA）、Cohen's kappa系数（κ）、Deming回归和Bland-Altman分析进行评估。一个探索性的基于QFT-Plus的临界范围（0.20–0.70 IU/mL）被单独分析。此外，在排除达到QFT-Plus定量上限（10 IU/mL）的观测值后，进行了额外的定量分析。
结果： 总体定性一致率为92.9%（κ = 0.85；95%置信区间(CI)，0.79–0.92），PPA为90.1%（95% CI，83.8–94.1），NPA为96.8%（95% CI，91.1–98.9）。对于TB1，一致率为94.25%（κ = 0.885；95% CI，0.824–0.945）；对于TB2，一致率为89.82%（κ = 0.796；95% CI，0.718–0.875）。在临界范围内，TB1的一致率降至78.05%（κ = 0.529；95% CI，0.289–0.769），TB2降至69.05%（κ = 0.316；95% CI，0.067–0.564）；相比之下，在该范围之外，TB1和TB2的一致率分别为97.84%和94.57%。在排除达到QFT-Plus定量上限的观测值后，Deming回归斜率从TB1的3.085降至0.811，TB2的3.146降至0.926，同时Bland-Altman一致性界限显著变窄。
结论： TB-IGRA VIRCLIA? Monotest与QFT-Plus显示出较高的总体定性一致率，尤其是在临界范围之外。在接近阳性阈值处，特别是对于TB2，一致率有所下降，这支持对临界结果进行谨慎解读并进行重复或确认性检测。在高干扰素-γ（IFN-γ）浓度下的定量比较受到QFT-Plus定量上限的显著影响。
论文解读文章
研究背景与研究问题
结核病（TB）仍然是全球性的健康问题，据报告2025年有1070万病例和123万人死亡。更值得关注的是，估计全球四分之一的人口患有结核感染（TBI），即个体感染了结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）但无临床症状。治疗高风险个体的结核感染被认为是控制结核病的关键策略之一，而准确诊断结核感染对于有效实施预防性治疗至关重要。然而，目前尚无诊断结核感染的绝对金标准。
世界卫生组织（WHO）推荐使用结核菌素皮肤试验（TST）或干扰素-γ释放试验（IGRAs）来诊断结核感染。尽管TST应用广泛，但其存在与卡介苗（BCG）和非结核分枝杆菌交叉反应、观察者间差异等局限性。IGRAs作为更特异的替代方案应运而生，因为它们利用了结核分枝杆菌特异性抗原，这些抗原在大多数环境分枝杆菌和BCG疫苗株中不存在。然而，现有的IGRA检测在成本、技术要求和可及性方面存在挑战，限制了其在某些临床和流行病学环境中的常规应用。因此，开发维持足够诊断性能的同时更简单、标准化且适应不同使用场景的新型商业试剂盒成为研究热点。
近年来，多种基于不同技术平台的IGRA检测方法相继问世，包括全自动化学发光免疫分析法（CLIA）平台，如LIAISON? QFT-Plus CLIA。TB-IGRA VIRCLIA? Monotest（Vircell S. L., 西班牙格拉纳达）是一种新型化学发光检测方法，旨在量化QFT-Plus Nil、Mitogen、TB1和TB2管刺激后的IFN-γ反应。其Monotest格式允许自动化处理单个样本，无需积累标本进行批量检测，这对于IGRA工作量低或不规律的实验室可能特别有用。然而，关于该平台与既定IGRA方法比较的独立临床数据仍然有限。因此，本研究的目的是在西班牙南部低发病率环境中，评估TB-IGRA VIRCLIA? Monotest与QFT-Plus CLIA在连续送检用于常规结核感染检测的样本中的定性和定量一致性。
研究方法与关键技术
本研究是一项前瞻性比较研究，样本来源于2025年6月至10月期间西班牙Hospital Universitario Virgen de las Nieves微生物实验室送检进行结核感染检测的患者。最终纳入226份来自226位独立个体的QuantiFERON管样本。所有样本均同时使用LIAISON? QuantiFERON?-TB Gold Plus（QFT-Plus CLIA）和TB-IGRA VIRCLIA? Monotest进行检测。两种检测均使用相同的QuantiFERON?-TB Gold Plus采血管（Nil、Mitogen、TB1和TB2），因此比较的重点在于IFN-γ的检测和定量方法，而非抗原刺激系统的差异。检测由操作人员独立进行，并对另一检测的结果设盲。对于临界范围内的不一致样本，若有足够的剩余样本量，则进一步使用QuantiFERON?-TB Gold Plus ELISA试剂盒进行分析。
关键的分析方法包括：通过计算总体一致率、阳性一致率（PPA）和阴性一致率（NPA）评估定性一致性，并使用Cohen's kappa系数（κ）评估超出偶然因素的一致性；采用Deming回归和Bland-Altman分析评估定量一致性；进行敏感性分析，排除达到QFT-Plus定量上限（10 IU/mL）的观测值，以评估其对定量比较的影响；使用一个探索性的临界范围（0.20–0.70 IU/mL）分析接近阳性阈值的样本一致性。
研究结果
定性一致性分析
在226份配对样本中，两种检测方法均未观察到不确定结果。总体定性一致率为92.9%，Cohen's kappa系数为0.85（95% CI, 0.79–0.92）。阳性一致率为90.1%（95% CI, 83.8–94.1），阴性一致率为96.8%（95% CI, 91.1–98.9）。按TB1和TB2分别分析，TB1的一致率（94.25%；κ = 0.885）高于TB2（89.82%；κ = 0.796）。
临界范围分析
在探索性临界范围（0.20–0.70 IU/mL）内，TB1有41份样本，TB2有42份样本被归类为临界。在此范围内，TB1的一致率降至78.05%（κ = 0.529），TB2降至69.05%（κ = 0.316）。而在该范围之外，TB1的一致率高达97.84%（κ = 0.957），TB2为94.57%（κ = 0.891）。不一致的结果主要集中在临界范围内，共识别出17份独特的不一致样本。
定量一致性分析
包含所有226份样本的分析显示，Deming回归斜率远大于1（TB1: 3.085; TB2: 3.146），表明两个平台之间存在显著的定量差异。Bland-Altman分析也显示了较大的平均偏差和较宽的一致性界限。然而，在排除了达到QFT-Plus定量上限（10 IU/mL）的观测值后（TB1排除22份，TB2排除23份），Deming回归斜率显著降低至接近1（TB1: 0.811; TB2: 0.926），Bland-Altman分析的平均偏差和一致性界限也显著缩小。这表明在完整数据集中观察到的定量差异主要由QFT-Plus的定量上限所驱动。
不一致样本的ELISA分析
在17份临界范围内的不一致样本中，有10份可获得QFT-Plus ELISA结果。QFT-Plus和VIRCLIA各自与ELISA在7例（70%）中一致。由于样本量有限且QFT-Plus ELISA并非独立的临床参考标准，此探索性分析无法确定哪种检测提供了正确的分类。
讨论与结论总结
讨论部分指出，TB-IGRA VIRCLIA? Monotest与QFT-Plus表现出高水平的定性一致性，这与近期其他新型IGRA平台的方法比较研究结果相符。定量分析表明，完整数据集中的表观定量差异受到QFT-Plus定量上限的显著影响，因此在高浓度范围的定量差异应谨慎解读。一个关键的发现是在探索性临界范围内一致性的显著降低，尤其是对于TB2。这一模式与先前研究报告的在0.35 IU/mL阈值附近变异性和不一致性增加的现象一致。研究强调，在IGRA技术日益多样化的背景下，像VIRCLIA这样的自动化单样本检测格式可能提供操作灵活性，但其操作和经济影响仍需专门评估。研究还讨论了临界结果谨慎解读的重要性，并建议当分类可能影响临床管理时，进行重复或确认性检测。
研究结论部分总结如下：
在本队列中，TB-IGRA VIRCLIA? Monotest与QFT-Plus显示出较高的总体定性一致率，尤其是在探索性临界范围之外。在接近阳性阈值处，特别是对于TB2，一致率较低，这支持对该范围内的结果进行谨慎解读。在高IFN-γ浓度下的定量比较受到QFT-Plus定量上限的显著影响。此外，其自动化的单样本Monotest格式可能提供操作灵活性，允许在不需批量积累的情况下处理单个样本，这可能对IGRA工作量低或不规律的实验室特别有用。需要进一步开展包含独立临床参考标准、可重复性评估和临床特征明确的患者群体的研究，以确立TB-IGRA VIRCLIA? Monotest的诊断性能和临床效用。
