## 一、标题 **基于监测数据迭代更新的七价诺如病毒mRNA疫苗在小鼠与非洲绿猴中诱导强效体液免疫应答**

《Journal of Virology》：A seven-valent norovirus mRNA vaccine elicits robust humoral responses in preclinical models

　　

## 三、摘要翻译

诺如病毒（norovirus）是急性胃肠炎的主要病因，造成重大的全球疾病负担，尤其在5岁以下儿童和老年人中。尽管多种候选疫苗正处于临床前和临床开发阶段，但尚无靶向干预措施获批。研究人员此前报道，一种编码GI.1、GII.2、GII.3、GII.4和GII.6基因型VP1蛋白的五价mRNA候选疫苗可在小鼠和非人灵长类中诱导强效的体液和细胞免疫应答。由于近期监测数据显示GI.3和GII.17的流行率上升，研究人员设计了针对这些基因型的mRNA，并在临床前研究中评估了一种扩展的七价制剂。研究人员首先在小鼠中比较了候选的GI.3和GII.17毒株，并依据免疫原性和交叉反应性选择疫苗组分。由此获得的七价mRNA疫苗在小鼠和非洲绿猴中诱导了强效的体液应答，包括血清IgG与诺如病毒病毒样颗粒（VLPs）的结合，以及阻断VLP与组织血型抗原（HBGAs）结合的功能性抗体。重要的是，纳入GI.3和GII.17拓宽了功能覆盖范围，而多价制剂仅引入有限的免疫干扰证据。这些发现支持依据监测数据指导多价诺如病毒mRNA疫苗更新的可行性，并凸显了mRNA平台在应对新发病原变异方面的可适应性。

## 四、论文解读

**研究背景与问题**

诺如病毒（norovirus）属杯状病毒科（Caliciviridae），为无包膜单股正链RNA病毒，估计占全球腹泻病的约18%，每年导致约7亿例发病和21.9万例死亡，经济负担达645亿美元，但迄今尚无靶向药物或疫苗获批。其基因组含三个开放阅读框，ORF2编码主要衣壳蛋白VP1，VP1单体可自组装为模拟天然病毒粒子的病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs）。VP1的突出域（protruding domain，P域）中P2亚域直接与宿主组织血型抗原（histo-blood group antigens，HBGAs）结合，因而HBGA阻断试验被广泛用作中和活性的替代指标。VP1，尤其P2亚域，具有高度遗传与抗原多样性，诺如病毒分为10个基因群（GI–GX）和48个基因型，GI与GII占全球病例约90%。历史上GII.4为最重要的基因型，但近期监测显示GII.17在美国部分时段暴发占比由2022–2023年的35%升至2024–2025年的74%，GI.3亦成为最常见的GI基因型。研究人员此前已报道编码GI.1、GII.2、GII.3、GII.4和GII.6的五价mRNA疫苗，但缺乏GI.3与GII.17可能造成功能覆盖不足，因此需建立可随基因型流行变化而更新的疫苗设计策略。

**研究内容与结论**

研究人员设计针对2株GI.3和5株GII.17的mRNA，先在小鼠中基于免疫原性各选出一株代表株，再将其纳入既往五价疫苗构成七价制剂，并在小鼠和非洲绿猴中评价其结合抗体与HBGA阻断抗体应答及免疫干扰情况。结论为：七价mRNA疫苗在两种动物模型中均诱导强效同型体液应答，纳入GI.3和GII.17拓宽了功能性抗体覆盖，多价化仅显示有限的免疫干扰证据，支持以监测为导向迭代扩展多价诺如病毒mRNA疫苗的可行性，并体现mRNA平台应对新发变异株的可适应性。

**主要技术方法**

研究采用序列系统发生分析指导毒株初筛；以N1-甲基假尿苷修饰、CleanCap加帽的mRNA经脂质纳米颗粒（lipid nanoparticle，LNP）包封制成疫苗；在Expi293F细胞中表达并纯化VP1 VLPs作为检测抗原；以血清IgG ELISA测定VLP结合滴度；以HBGA阻断试验（除GII.3用人类唾液外均以猪胃黏蛋白PGM为糖源）测定BT50功能性滴度；动物模型为BALB/c小鼠（每组n=8，0、4周肌内免疫）及非洲绿猴（n=4/组，每基因型10 μg，0、4周免疫）。统计学采用Shapiro-Wilk检验、Welch t检验、Mann-Whitney U检验及Kruskal-Wallis检验联合Dunn校正。

**研究结果**

*Selection of a GI.3 vaccine strain*：依据NoroSurv数据（2016–2025年6岁以下儿童中GI.3病例数每年均超过GI.1及其他GI基因型），选取GI.3 Japan（AII73765）与GI.3 USA（QIC52023）两株，其VP1相差7个氨基酸，分布于S、P1和P2域；小鼠免疫比较显示GI.3 USA在低剂量下诱导更高的同型结合与阻断滴度，并具更强的对GI.1异型结合，被选为GI.3组分；两GI.3株与GI.1之间无跨基因型功能性交叉反应。

*Selection of a GII.17 vaccine strain*：依据CaliciNet数据（GII.17相关暴发占比2022–2023年35%升至2024–2025年74%，其后2025年9月至2026年8月GII.4 Sydney占47.7%、GII.17占17.7%），从84条序列系统发生树中选取5株GII.17；小鼠实验显示San Mateo与San Francisco交叉反应最弱，且因VLP与PGM结合信号过低无法建立HBGA阻断试验窗口，故功能性分析采用China、Boone和Oregon；GII.17 China（cluster D）兼具强同型免疫原性与对Boone、Oregon的异型阻断广度，被选为GII.17代表株。

*Expanded multivalent formulations retain immunogenicity and broaden functional coverage*：小鼠中比较单价、五价、五价+GII.17、GI.3替换GI.1并加GII.17、七价及空LNP七组，各mRNA组均诱导强结合与阻断滴度，空LNP组无特异性滴度；多价组滴度总体与单价及五价相当，提示有限免疫干扰；但多价诱导的异型结合应答未转化为可检测的异型HBGA阻断活性，说明须纳入相应基因型方能拓宽功能覆盖。

*七价疫苗在非洲绿猴中的评价*：七价疫苗在6周时诱导强同型ELISA结合与HBGA阻断应答，并检出异型结合应答，但异型阻断仅在疫苗含相应基因型时出现；不含GI.3与GII.17的五价疫苗未诱导针对二者的功能抗体；七价组对GI.3、GII.17的阻断滴度虽略低于相应单价组，但经Kruskal-Wallis与Dunn校正后差异无统计学意义，作者指出非人灵长类样本量有限，研究不足以检出中细微差异，无统计学显著性不应解读为等效。

**讨论与结论**

讨论指出：仅凭基因型流行率或序列代表性不足以指导抗原选择，功能性抗体广度评估可提供互补信息；GI.3 Japan与GI.3 USA同属Tohma分组A却存在可测免疫原性差异，支持结合系统发生、流行病学与功能免疫原性数据共同选株。GII.17方面，选株时认为C/IIIa型已被D/IIIb型 largely 取代，故选用China株；后续监测将Boone等归为与C簇更近、日益流行的New簇，而Boone在本研究中显示跨簇阻断广度，提示其可能更适合未来更新配方。作者还指出部分VLP与疫苗组分序列源自历史分离株；动物模型缺乏既往免疫背景，人体中交叉反应记忆可能带来更广应答；功能评价采用血清HBGA阻断而非人肠类器官真病毒中和；全身免疫评价未涵盖黏膜应答，参考HIL-214在婴儿中失败及近期攻毒研究提示血清功能阻断抗体与粪便IgA为保护相关指标；因每组分mRNA剂量恒定，总mRNA与LNP暴露随价数增加，而LNP具内在免疫刺激与佐剂活性，故未设剂量匹配对照组，未来需在总LNP与RNA暴露恒定条件下区分价数效应与总暴露效应。研究结论为：多价诺如病毒mRNA疫苗可依据基因型流行变迁迭代更新，同时保持各组分强免疫原性；在既往五价配方中加入GI.3和GII.17所形成的七价疫苗在小鼠和非洲绿猴中诱导强效结合与HBGA阻断抗体应答，仅见有限免疫干扰证据；这些发现支持mRNA平台作为以监测为导向更新诺如病毒疫苗的实用模块化策略。