《Journal of Experimental Zoology Part B: Molecular and Developmental Evolution》：GSK3 Inhibition During Annelid Head Regeneration Results in a Hyper-Proliferative Blastema and Impaired Differentiation
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再生生物学的一大目标是揭示使多种动物通过再生替换身体部位的分子机制。糖原合成酶激酶-3（GSK3）已知对多种动物类群中成功再生所必需的发育通路具有重要的调控影响。环节动物包含一些再生能力最强的动物，尽管GSK3已在多个物种的再生过程中被研究，其主要作用仍不清楚
再生生物学的一大目标是揭示使多种动物通过再生替换身体部位的分子机制。糖原合成酶激酶-3（GSK3）已知对多种动物类群中成功再生所必需的发育通路具有重要的调控影响。环节动物包含一些再生能力最强的动物，尽管GSK3已在多个物种的再生过程中被研究，其主要作用仍不清楚。在本研究中，研究人员利用形态学标记、细胞增殖检测以及干细胞和分化相关基因的RT-qPCR，表征了1-氮杂肯保隆酮（AZP，一种已知的GSK3抑制剂和Wnt信号激动剂）对高再生能力寡毛类环节动物Pristina leidyi前部和后部再生的影响。尽管后部再生仅受AZP轻微影响，前部再生受到强烈损伤，产生一个持续存在的"过度芽基"，至少在13天内未能分化出前部特异性结构，超过正常完全再生时间的两倍以上。在再生应已完成的 time point，该过度芽基仍表现出高水平的细胞增殖和干细胞相关基因表达，类似于早期芽基。这些结果表明GSK3抑制在再生后期抑制前部特异性分化通路，与GSK3在前部发育中的保守作用一致。结果还支持GSK3在促进神经分化中的保守作用。更广泛而言，本研究揭示GSK3在环节动物中拮抗芽基的促再生信号，拓宽了对动物再生分子机制的理解。
**研究背景**
再生是动物在创伤后替换身体部位的复杂生物学过程，广泛存在于多个动物门类中，被认为是后生动物乃至两侧对称动物的祖先特征。动物复杂结构的再生通常遵循四个主要步骤：伤口再上皮化、通过干细胞募集形成芽基（blastema）、芽基内干细胞快速增殖、以及增殖细胞的分化与模式化以重建缺失结构。从干细胞增殖到分化的最终转变对于恢复再生结构的功能至关重要。在分子层面，再生后期涉及大量细胞信号通路，其中许多可能在分类群之间具有保守功能。
糖原合成酶激酶3（GSK3）是这些信号通路的重要调控因子之一，已知可磷酸化调节代谢、细胞形状和生长等多种细胞功能的蛋白质。GSK3还是notch、hedgehog和Wnt等多个重要发育信号通路的负调控因子。其中Wnt信号在发育和再生中具有多样而重要的功能，包括在远缘动物中保守的轴向指定作用。由于GSK3是Wnt信号级联的负调控因子，实验性抑制GSK3已被用于研究Wnt信号过度激活的效应。GSK3通过Wnt及其他通路的表型效应已被充分描述，尤其在神经发生中，证据支持GSK3是通过失活这些促增殖发育通路来调控神经干细胞向有丝分裂后神经元转变的主调控因子。
药理学GSK3抑制剂已被用于干扰多种动物的再生或胚后发育。水螅和无肠目动物的研究提示GSK3在轴向极性中的作用，涡虫再生中GSK3涉及组织分化特别是头部和咽部的分化。在环节动物中，GSK3在再生中的作用也已在多个物种中研究，提示其在促进前部芽基形成、抑制前部形成和促进分化中的作用因物种而异。总体而言，尽管效应因物种和情境而异，多项研究提示GSK3活性对再生过程中正确的分化和模式化至关重要。
环节动物包含动物界最强的再生者，许多物种能再生身体的大部分包括头部和尾部。研究环节动物再生的优势在于增殖和干细胞反应似乎主要局限于伤口，且在伤口处形成视觉上明显的芽基。这种空间局限的反应便于仔细检查负责成功再生的细胞机制和基因。此外，环节动物具有熟悉的两侧对称复杂身体构型，包括一些已建立的无脊椎动物模型所缺失的特征。因此，理解环节动物强大的再生能力可为动物再生的发育和进化提供关键见解。
**研究开展与结论**
为阐明GSK3在环节动物轴向再生中的作用，研究人员调查了GSK3抑制对环节动物Pristina leidyi前部和后部再生的影响。研究人员选择1-氮杂肯保隆酮（AZP）干扰GSK3，该抑制剂已被证明对GSK3活性具有高度特异性效应而不影响其他激酶。在胚后阶段缺乏可靠基因特异性功能操作的情况下，药理学实验已被证明对研究环节动物再生的分子过程非常有价值。P. leidyi是便利的研究系统，能在短短5天内完成稳健的全身再生，身体大部分透明，适合整体荧光标记，并具有可用的转录组资源。本研究通过可视化多种组织的分化标记、检测细胞增殖以及通过RT-qPCR定量感兴趣标记的基因表达，表征了AZP处理下P. leidyi的前部和后部截肢反应。研究发现，尽管后部再生接近正常，但GSK3抑制下前部再生受到强烈损伤，多种前部特异性结构（吻部、咽部、头神经节）未能分化。此效应伴随过度活跃的增殖和干细胞相关基因表达。这些在环节动物中的发现支持GSK3在促进前部身份和/或拮抗芽基促增殖信号中的保守作用。
**关键技术方法**
本研究以高再生能力寡毛类环节动物Pristina leidyi为模型，采用1-氮杂肯保隆酮（AZP）进行药理学GSK3抑制，通过形态学观察和活体成像评估再生表型，利用乙酰化α-微管蛋白、血清素和鬼笔环肽荧光标记评估组织特异性分化，采用EdU标记检测细胞增殖，并通过RT-qPCR定量干细胞和分化相关基因表达。P. leidyi长期实验室培养品系来源于Bely和Wray（2001）。
**研究结果**
**1-氮杂肯保隆酮处理导致P. leidyi再生缺陷**
研究人员首先调查了AZP处理是否在P. leidyi前部和后部再生中引起表型效应。测试了1–20 μM的AZP浓度范围，发现4 μM浓度在前部再生中产生清晰、可重复的亚致死再生表型（n > 100）。在4 μM AZP下，前部芽基异常密集且分化微弱。较低浓度产生无表型或弱/不一致表型，较高浓度产生相似表型但芽基生长更少。在前后截肢条件下，蠕虫原始身体部分均未出现明显缺陷。这些发现表明GSK3参与P. leidyi的正常再生。由于GSK3抑制在其他动物类群中已被证明过度激活Wnt信号，研究人员考虑这些再生缺陷是否由正常Wnt信号紊乱驱动。对未处理的前部再生蠕虫进行RT-qPCR发现Wnt通路组分在P. leidyi再生各阶段的伤口处转录动态变化，PRIle-β-catenin和PRIle-APC从再生中期到后期转录本丰度下降。研究人员还测试了两种Wnt信号抑制剂XAV939和iCRT14以及另一种GSK3抑制剂CHIR 99021的效应，除XAV939和iCRT14导致轻微再生延迟外，这些额外抑制剂即使在其靶通路的最大可行浓度下也未能扰乱再生。选择4 μM AZP进一步表征。为描述AZP对前部再生随时间的影响，将去头蠕虫维持在4 μM AZP或0.02% DMSO中每日活体成像（AZP处理n = 24，DMSO对照n = 24，7天内无死亡）。总体而言，再生第一天对照和处理蠕虫相似。在截肢后2和3天（dpa），AZP处理蠕虫的芽基略小于对照。在4 dpa，对照蠕虫开始将芽基完全分化为功能性头部，而AZP处理蠕虫仍有 largely 未分化的芽基。到5 dpa，对照蠕虫再生出完整头部（n = 24/24）；相比之下，AZP处理蠕虫保留芽基样再生体（n = 24/24，22个无吻部，2个有轻微吻部隆起）。此表型持续，芽基继续生长而未能达到正常形态，至少持续到13 dpa，形成"过度芽基"表型。该过度芽基确 exhibit 一定水平的模式化，但整体组织水平类似于正常早中期前部芽基，但远更大且持续扩展。蠕虫其余部分表现正常，表明AZP效应局限于再生组织。正常与AZP处理前部再生体之间的差异显著：即使在晚期时间点，这些AZP处理的"头部"缺乏吻部、缺乏完整口和咽部、缺乏分节结构（刚毛），并具有增大的脑和腹神经节原基。再生体整体大小因AZP而减小，减小幅度呈剂量依赖性：在6 dpa，4 μM AZP显著减小再生体长度（p < 0.0005），20 μM AZP导致更大减小（与4 μM相比p < 0.005）。为测试AZP表型的稳定性，研究人员在不同时间点将前部截肢蠕虫从4 μM AZP转移至泉水以确定是否能恢复正常表型。在3 dpa从AZP移除时100%蠕虫（n = 6/6）恢复正常头部，但在6 dpa移除时仅33%蠕虫（n = 2/6）恢复（转移至ASpW后8天评分）。对于6天后转移的个体，未完全恢复正常表型的蠕虫（n = 4/6）仍形成分节特征和 largely 正常内部解剖，但从未形成吻部。这些结果表明AZP强烈损伤前部再生，导致持续芽基状态，且该效应可通过停止处理逆转。与AZP对前部再生的显著效应相反，AZP对后部再生仅有轻微影响。在6 dpa，活体成像显示4 μM AZP与对照处理之间无主要结构差异，AZP处理后部再生体仍具有延伸至肛门的肠上皮和表皮感觉突起，但4 μM AZP处理减小了再生体长度（p < 0.005）。
**1-氮杂肯保隆酮抑制多种前部组织分化**
为更好理解AZP对前部再生的影响包括对内部解剖的影响，研究人员可视化荧光标记以评估组织特异性分化。使用微管蛋白标记揭示肠纤毛、血清素标记揭示中枢神经系统组分、鬼笔环肽标记肌纤维。重点关注3和6 dpa，分别代表正常对应中期芽基阶段和完全再生阶段的时间点。为评估肠分化，使用抗乙酰化α-微管蛋白抗体。在3 dpa，AZP和对照蠕虫中微管蛋白在表皮感觉毛中明显，但在两者芽基内部区域均未检测到。在6 dpa，对照蠕虫再生的咽部和前肠微管蛋白标记良好（n = 12/12），然而AZP处理蠕虫的过度芽基内无可检测的内部微管蛋白信号（n = 12/12）。这些发现表明AZP损伤前部截肢后纤毛肠和咽部的分化。为可视化中枢神经系统再生，用血清素抗体标记再生蠕虫。在3 dpa，对照蠕虫在芽基中建立了新的咽周神经环（n = 6/6），尽管尚未检测到新的血清素能细胞体。在3 dpa，AZP处理蠕虫显示一些神经索延伸进入芽基，但未形成神经环（n = 5/6）。在6 dpa，对照蠕虫完全形成成体头部血清素能神经系统（n = 12/12）。在AZP处理蠕虫6 dpa，芽基内神经索与相邻旧组织相比仍高度变细，沿其形成很少或没有新的血清素能细胞体（n = 12/12），这些蠕虫也无建立神经环的迹象。这些结果提示AZP强烈抑制前部再生中中枢神经系统的模式化和分化。为评估肌肉再生，用鬼笔环肽标记蠕虫。在3 dpa，对照（n = 6/6）和AZP处理（n = 6/6）蠕虫芽基中均有新的薄环肌纤维，较厚纵肌束从相邻未损伤组织延伸进入芽基。在6 dpa，对照蠕虫再生出高度肌肉化的头部（n = 12/12）。AZP处理蠕虫6 dpa在再生组织中 exhibit 新的环肌和纵肌突起（尽管再生纤维明显较对照细），但在正常咽部位置仅显示极少的肌肉发育，深部内部肌肉组织由从发育不良的口内陷起源的无组织细丝组成（n = 12/12）。这些发现表明AZP对体壁肌肉再生有轻微影响，但大幅损伤咽部肌肉再生，此效应可能继发于咽部本身缺乏适当分化。
**1-氮杂肯保隆酮处理延长前部再生体中细胞增殖**
为确定AZP对前部再生中细胞增殖的影响，用EdU标记分裂细胞。在3 dpa，对照和AZP处理蠕虫均显示局限于芽基的典型高增殖。然而，AZP处理蠕虫中EdU标记细胞比例略高于对照（p < 0.05）。在6 dpa，对照蠕虫已完成头部形成，再生组织中细胞增殖大多消失，仅在吻部基部有少数细胞，为正常稳态细胞更新的标志。相比之下，AZP处理蠕虫6 dpa细胞增殖仍高度活跃并广泛分布于再生组织，尤其在新腹神经索形成的腹侧区域有高浓度分裂细胞。增殖活性的增加完全局限于再生组织，表明芽基外无异位增殖。即使有这种持续高增殖水平，再生体长度仍小于正常，至少部分由于AZP处理过度芽基中细胞核密度显著高于6 dpa分化头部。过度芽基具有高度紧密的细胞而非正常再生头部的较稀疏细胞排列。这些结果提示AZP阻止前部芽基中促增殖再生信号的停止。
**后部再生受1-氮杂肯保隆酮处理影响极小**
为测试后部再生是否同样受AZP影响，对后部截肢蠕虫使用相同检测，重点关注6 dpa。除再生体长度减小外，AZP处理后部截肢蠕虫总体与对照相似。微管蛋白在两者再生体肠纤毛和肛门处均明显，较弱微管蛋白信号也显示两组蠕虫腹神经索延伸进入后部再生体。血清素标记显示两组蠕虫神经索延伸进入后部再生体的弱信号。鬼笔环肽标记显示AZP处理与对照蠕虫肌肉组织无明显差异，所有蠕虫均再生出肌肉化肛环。AZP处理蠕虫后部再生组织中总细胞增殖（p < 0.05）和增殖率（p < 0.005）显著高于对照，但远比前部再生中相同比较更为相似。两组中后部增殖最集中于肛板前约10–20 μm的亚末端环，指示后部生长区的重建。总之，这些发现表明AZP对后部再生仅有细微影响，与其对前部再生的效应形成鲜明对比。
**干细胞标记转录在1-氮杂肯保隆酮处理下前部再生中被延长**
为更好理解AZP的分子效应，使用RT-qPCR定量前部再生中 select 基因的转录水平。AZP处理蠕虫前部再生体显示前部结构（如脑、口）原基的明确迹象，但由于GSK3活性紊乱可影响轴向极性，研究人员还用RT-qPCR评估前部芽基中后部轴向标记的存在。检测PRIle-cdx（cdx的P. leidyi同源物，环节动物后部身份标记）。尽管在全蠕虫RNA样本中能检测到PRIle-cdx，但在任何对照或AZP处理前部再生体样本中RT-qPCR均未检测到PRIle-cdx，与芽基维持前部身份一致。AZP诱导的过度芽基表型特别有趣，因为它提示AZP可能抑制前部再生从干细胞阶段向分化阶段的转变。为在分子水平检验此假设，使用RT-qPCR评估多个干细胞和分化标记，重点关注对照和AZP处理蠕虫3、4、5和6 dpa的伤口部位。评估了四个干细胞标记：生殖系多能性基因PRIle-nanos和PRIle-piwi-1；PRIle-c-myc（干细胞因子同源物及保守下游经典Wnt信号靶标）；以及PRIle-neurogenin（环节动物神经祖细胞标记同源物）。还评估了两个组织分化标记：PRIle-synaptotagmin（经验证的P. leidyi神经分化标记）和PRIle-rootletin（P. leidyi咽部特异性标记）。在3和4 dpa，对照和AZP处理蠕虫中干细胞和分化标记的表达水平 largely 相似，例外是AZP处理蠕虫中PRIle-nanos和PRIle-neurogenin略有增加以及PRIle-rootletin水平略有下降。然而，在从4到5 dpa的进展中（再生正常应完成的时期），AZP处理再生体与正常再生头部之间的转录差异变得显著。将3和4 dpa（合并）与5和6 dpa（合并）比较，干细胞相关标记PRIle-nanos、PRIle-c-myc、PRIle-piwi和PRIle-neurogenin在AZP处理蠕虫再生组织中相对正常头部显著上调（p < 0.005），而分化标记PRIle-synaptotagmin（p < 0.005）和PRIle-rootletin（p < 0.01）显著下调。总体而言，6 dpa AZP处理蠕虫再生体的平均转录谱更类似于正常3 dpa芽基而非正常6 dpa头部。这些发现支持GSK3通常在前部再生中为从干细胞阶段向最终分化阶段转变所必需的假设。
**讨论与结论**
本研究证明在GSK3抑制剂1-氮杂肯保隆酮作用下，环节动物P. leidyi在截肢后未能正确分化前部结构。前部截肢后，AZP处理蠕虫能建立和生长芽基、形成某些内部结构的原基并发育 fairly 正常的体壁肌肉组织。然而，AZP阻止了前口节（动物延伸的体节尖端）的形成、体节形成（由缺乏刚毛确定）以及内部结构的分化。特别显著的是缺乏分化的咽部及相关肌肉组织，以及大部分头神经系统的缺失。AZP处理蠕虫中咽部再生的失败是观察到的最显著效应之一。在AZP处理蠕虫中，似乎存在连接预先存在的肠与不完整口内陷的小通道，提示一定水平的前肠再生。然而，无可检测的咽部、无咽部纤毛、无组织的咽部肌肉组织，且咽部特异性标记PRIle-rootletin的表达显著低于对照。有趣的是，这些发现与AZP处理的再生涡虫中的发现高度相似，其中咽部原基发育但无类似功能性咽部的适当组织组织化。鉴于GSK3在微管组装中的已知作用，研究人员考虑P. leidyi中咽部再生失败至少部分可能由于直接抑制纤毛形成。然而，检查后部再生体中微管蛋白显示再生肠具有与对照相似的纤毛，包括肛门开口处的高纤毛化。研究人员将此解释为GSK3抑制扰乱了咽部发育的上游调控而非其结构组分。AZP诱导的P. leidyi前部再生表型的另一显著方面是中枢神经系统分化不良。血清素抗体标记显示虽然腹神经索投射进入芽基，但在整个再生过程中保持强烈变细且不组织成咽周环。减少的血清素能腹神经束伴很少或无细胞体是早期芽基的特征；然而正常情况下即使在3 dpa再生神经索也已组织成早期环。此结果也与涡虫中的报道高度相似，其中AZP处理导致再生组织中小脑神经节减少和轴突投射紊乱。鉴于环节动物和涡虫之间相当大的系统发育距离及其身体构型的显著差异，这些相似性引人注目并提示GSK3在动物前部再生中深度保守的作用。AZP诱导的前部表型还 exhibit 增大的脑和腹神经节原基，指示过度活跃的神经祖细胞。RT-qPCR结果进一步支持这一点，显示神经祖细胞标记PRIle-neurogenin在AZP处理组织中强烈上调而广泛分化神经元标记PRIle-synaptotagmin下调。增殖在过度芽基再生腹侧区域也特别高。GSK3在调控轴突生长和抑制神经祖细胞增殖中的作用在哺乳动物系统中已被充分描述。GSK3通过磷酸化微管相关蛋白调节轴突投射，但其增强或抑制轴突生长似乎依赖情境或不一致。有趣的是，P. leidyi中的数据提示神经再生的GSK3非依赖和GSK3依赖方面：从完整神经索向芽基的典型早期薄轴突投射延伸似乎不依赖GSK3，而增殖神经祖细胞 later 分化产生新头神经系统的过程依赖GSK3。此外，在后部再生中，腹神经索在对照和AZP处理蠕虫中均似适当延伸进入肛板作为微管蛋白阳性投射。这支持GSK3特异性区分预先存在轴突生长和新轴突形成的保守作用，此发现也在哺乳动物细胞中有报道。此轴突延伸可能为再生启动所需，因为先前研究指示环节动物芽基形成依赖神经。因此，研究人员的发现进一步凸显GSK3在调节两侧对称动物发育神经系统中深度保守的作用。
GSK3药理学抑制在P. leidyi再生中的效应显示强烈轴向偏向，后部再生仅轻微受影响而前部再生强烈损伤。尽管GSK3在发育中可涉及多个不同通路（如hedgehog、notch、Wnt），Wnt信号作为在远缘生物再生和胚胎发育中具有已建立显著轴向偏向的通路脱颖而出。因此，研究人员假设P. leidyi中GSK3抑制缺陷的前部偏向可能通过紊乱的Wnt信号介导，协调的Wnt抑制为P. leidyi前部身份所需如同其他系统。此推测情景得到其他系统发现的支持，这些报道GSK3抑制后Wnt信号过度激活，GSK3通常磷酸化β-catenin并标记其降解。然而，未来需要涉及P. leidyi经典Wnt信号活性更直接读数的研究以自信确定Wnt信号在此表型中的作用。虽然研究人员发现AZP处理蠕虫前部分化受损的证据，但未观察到前部再生体明显的"后部化"，如最近在另一环节动物中报道。AZP处理的P. leidyi前向芽基具有前部身份的明确标志（即使分化受损）。具体而言，AZP处理前向芽基具有类似发育中口的腹前内陷、具有发育中小脑神经节特征形状和位置的背侧细胞团、以及在受损较轻标本中类似咽部神经环早期迹象的腹神经索延伸。AZP处理前向芽基也缺乏肛门密集纤毛（后者在AZP处理下后部再生体中仍形成），且RT-qPCR未检测到后部标记PRIle-cdx。然而，在排除某些异位后部身份的可能性之前需要进一步研究。有趣的是，研究人员强烈抑制前部而非后部再生的结果再次与涡虫Schmidtea mediterranea暴露于AZP时观察到的 largely 相似，提示GSK3在前部再生中古老参与。未来采用GSK3基因特异性干扰的研究将对证实P. leidyi中的发现很重要。然而即使在S. mediterranea这样的主要模型系统中， pinpoint 负责再生紊乱的特定分子机制也可能具有挑战性。从比较AZP处理与APC RNAi在S. mediterranea轴向再生中可清楚看出，GSK3抑制与广泛Wnt过度激活并不等同。与AZP处理不同，APC RNAi在前部伤口产生分化的异位尾，指示Wnt过度激活足以获得后部身份。如果AZP介导的GSK3抑制在S. mediterranea中导致经典Wnt过度激活，同一生物中的这些不同发现提示GSK3抑制可能是比敲低APC更具选择性的Wnt过度激活形式，APC基因已被证明通过GSK3依赖和非依赖通路抑制Wnt信号。未来使用其他Wnt信号组分的抑制剂或RNA敲低实验需要更准确识别GSK3活性和过度活跃Wnt信号在动物轴向再生中的保守效应。研究人员发现多条证据表明在GSK3抑制下前部再生体不仅未能正常进展到分化阶段而且从未真正停止再生的芽基生长阶段。在3 dpa（中期芽基阶段），AZP处理与对照蠕虫之间增殖水平和基因表达 largely 相似。然而到6 dpa当对照中再生完成时，AZP处理蠕虫 exhibit 类似增大芽基的再生组织。研究人员显示相对于对照，此过度芽基具有显著增加的细胞增殖和芽基富集干细胞标记如PRIle-nanos和PRIle-piwi的表达。此过度芽基持续并随时间继续生长至少至13 dpa。因此结果提示GSK3活性为从芽基增殖向分化的转变所必需，可能通过停止增殖性干细胞程序和/或启动分化级联。通过多条证据，研究人员显示在环节动物P. leidyi中前部再生期间GSK3抑制导致弱分化的过度芽基。在远缘环节动物多毛类Syllis malaquini中观察到 somewhat 相似的总体形态表型，其中AZP处理蠕虫截肢后分节和眼点分化减少。值得注意的是，最近在非前部再生的环节动物Capitella teleta中的研究证明AZP处理GSK3抑制可引起异位前部芽基形成。尽管C. teleta中GSK3抑制表型的具体细节与P. leidyi不同（如C. teleta中芽基 exhibit 后部身份标志），前部截肢后对GSK3抑制的反应提示环节动物中的共性。总体而言，研究数据与这些研究共同提示GSK3抑制导致环节动物中异位或延长的芽基进展，表现为通常惰性组织中的增殖性干细胞反应。未来在额外环节动物物种及更广泛其他动物门中轴向再生期间抑制GSK3的研究将是阐明GSK3作为胚后发育中从增殖性芽基向前部形成转变的主"开关"潜在保守作用的关键。
**研究结论翻译**
研究人员证明在GSK3抑制剂1-氮杂肯保隆酮作用下，环节动物P. leidyi在截肢后未能正确分化前部结构。前部截肢后，AZP处理蠕虫能建立和生长芽基、形成某些内部结构的原基并发育 fairly 正常的体壁肌肉组织。然而，AZP阻止了前口节的形成、体节形成以及内部结构的分化。特别显著的是缺乏分化的咽部及相关肌肉组织，以及大部分头神经系统的缺失。这些结果提示GSK3抑制在再生后期抑制前部特异性分化通路，与GSK3在前部发育中的保守作用一致。结果还支持GSK3在促进神经分化中的保守作用。更广泛而言，本研究揭示GSK3在环节动物中拮抗芽基的促再生信号，拓宽了对动物再生分子机制的理解。
