PRT1通过RING1招募UBC35-UEV1A产生K63连接的泛素链，并利用CBP标签和纳米抗体实现Arg/N-degron通路的化学控制与重定向

《Nature Communications》：Synthetic tools to redirect the ubiquitin E3 ligase activity of a plant-specific N-recognin

　　

摘要

Arg/N-degron通路调控重要的农艺性状。在植物中，PROTEOLYSIS 1（PRT1）蛋白与芳香族氨基末端残基结合，并招募泛素（Ub）结合酶对底物蛋白进行泛素化。在这里，我们证明PRT1通过其RING1结构域招募UBC35-UEV1A复合物，从而刺激UBC35产生K63连接的泛素链。为了实现对泛素信号传导的化学控制，我们构建了一种带有N端钙调蛋白结合肽（CBP）的PRT1合成底物。在底物上添加CBP序列为PRT1依赖性泛素化创造了一个由钙和钙调蛋白调控的开关。最后，我们产生了一组被PRT1识别并诱导报告蛋白泛素化的纳米抗体。总的来说，我们引入并生化验证了多种工具，既可重定向又可化学控制Arg/N-degron通路。