CXCL13 rs355687变异增加墨西哥人群系统性红斑狼疮易感性：TT基因型与血清CXCL13升高相关

《Autoimmunity》：CXCL13 rs355687 variant confers increased susceptibility to systemic lupus erythematosus in a Mexican population

　　

C-X-C基序趋化因子配体13（CXCL13）调控B细胞运输、淋巴组织新生和适应性免疫应答，其失调参与系统性红斑狼疮（SLE）发病。然而，CXCL13遗传变异如何影响SLE易感性仍不清楚。本研究探讨CXCL13单核苷酸变异（SNV）rs355687与SLE易感性的关联。研究纳入SLE患者和健康献血者。采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）对rs355687 SNV进行基因分型，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量血清CXCL13水平。比较组间基因型和等位基因频率，并在不同遗传模型下评估其与SLE风险的关联。共研究149例SLE患者和98名健康对照。SLE患者中rs355687次要等位基因频率显著低于对照。TT基因型在加性模型（比值比[OR]=1.77，95%置信区间[CI]：1.13–2.76；p=0.01）和隐性模型（OR=2.03，95%CI：1.16–3.56；p=0.01）下均与SLE风险增加相关。此外，携带TT基因型的患者中位血清CXCL13浓度显著高于对照（71.51[四分位距（IQR）：51.36–149.50] vs. 57.38[IQR：49.52–64.97] pg/mL；p=0.02）。CXCL13 rs355687 SNV与SLE易感性增加相关，TT基因型尤其与CXCL13水平升高相关。这些发现支持该变异作为SLE疾病易感性生物标志物的潜力。

研究背景与意义：系统性红斑狼疮（SLE，一种慢性自身免疫性疾病）具有临床和发病机制异质性，异常免疫激活导致多器官炎症和组织损伤，T、B淋巴细胞功能异常在其中起重要作用，遗传和环境因素共同影响易感性。C-X-C基序趋化因子配体13（CXCL13，调节B细胞迁移和淋巴组织新生的趋化因子）通过其受体C-X-C趋化因子受体5（CXCR5，CXCL13的受体）调控B细胞、T细胞和巨噬细胞向炎症部位迁移，并促进炎症介质表达。既往研究显示血清CXCL13水平与SLE疾病活动相关，抗dsDNA抗体阳性、高疾病活动或狼疮肾炎患者CXCL13浓度升高；狼疮鼠模型也显示CXCL13表达增加，并通过招募CXCR5⁺ T细胞至肾脏促进肾炎发生。人CXCL13基因位于染色体4q21，rs355687单核苷酸变异（SNV，单个碱基改变导致的遗传变异）位于该位点，既往与乙型肝炎病毒（HBV）感染易感性及HBV疫苗接种后免疫应答调节相关。尽管CXCL13参与SLE发病的证据较多，但CXCL13遗传变异尤其是rs355687是否贡献SLE易感性仍不清楚，因此研究人员开展本项病例对照关联研究。研究结果提示rs355687 SNV与墨西哥人群SLE易感性增加相关，TT基因型与血清CXCL13升高相关，支持该变异作为SLE疾病易感性生物标志物的潜力，但因样本量和功能验证不足需谨慎解释。

关键技术方法：研究人员纳入149例SLE患者（墨西哥城Instituto Nacional de Cardiología Ignacio Chávez风湿科门诊，2017年1—12月）和98名无自身免疫病或活动性感染的健康献血者；SLE符合2012年系统性红斑狼疮国际协作组（SLICC）分类标准。采集外周血提取基因组DNA，采用TaqMan探针实时PCR对CXCL13 rs355687进行基因分型；对77例SLE患者和6名健康对照用ELISA检测血清CXCL13。统计采用直接计数、哈迪-温伯格平衡（HWE，群体遗传学平衡检验）、校正年龄和性别的逻辑回归估算OR及95%CI，并进行组间比较和相关性分析。

研究结果：
临床特征（Clinical characteristics）：通过临床资料和实验室数据描述，149例SLE患者中位年龄37（29–47）岁，98名健康对照中位年龄33（30–36）岁；患者呈轻至中度疾病活动，中位系统性红斑狼疮疾病活动指数2000（SLEDAI-2K，疾病活动评分）为3（0–6）。泼尼松中位剂量为7.5（5–15）mg/day，泼尼松剂量与补体C3水平显著负相关（rho –0.28；95% CI：–0.48至–0.06），与C4水平或血液学参数无显著相关；未发现其他与治疗相关的显著临床关联。

CXCL13 rs355687 SNV与SLE易感性关联（Association of the CXCL13 rs355687 SNV with SLE susceptibility）：通过病例对照基因分型和遗传模型分析，rs355687基因型分布在SLE患者和健康对照中均符合HWE（p=0.64和p=0.80）。原文报告SLE患者TT基因型频率与对照相比差异有统计学意义（p=0.04；原文同时报告TT在加性和隐性模型下与风险增加相关）。在加性模型下，TT基因型与SLE风险增加显著相关（OR=1.77，95% CI：1.30–2.76；p=0.01）；在隐性模型下，TT基因型同样与SLE风险增加相关（OR=2.03，95% CI：1.16–3.56；p=0.01）；显性模型未见显著关联（OR=2.16，95% CI：0.75–6.26；p=0.15）。SLE患者有无主要临床表现亚组间基因型频率无显著差异，不同遗传模型下基因型与特定临床表现亦无显著关联（p≥0.05）。结论为rs355687与SLE易感性相关，TT基因型在加性和隐性模型下与风险增加相关。

CXCL13 355687基因型与SLE实验室特征关联（Association of CXCL13 355687 genotypes and laboratory features in SLE）：通过按基因型分层比较实验室指标，TT、CT、CC基因型患者中位高敏C反应蛋白（hsCRP，炎症标志物）分别为2.47（1.14–6.24）、2.45（1.10–4.05）和0.80（0.54–2.36）mg/L（p=0.03）；CC基因型患者补体C3中位水平较低（72.00[55.05–89.73] mg/dL），CT和TT携带者分别为94.82（81.00–116.80）和91.38（72.50–110.99）mg/dL（p=0.004）；C4中位水平分别为CC 11.49（5.54–15.10）、CT 16.85（11.95–22.27）、TT 14.28（8.88–20.52）mg/dL（p=0.009）；其他临床和实验室参数在三组间相当（p≥0.05）。在显性模型（TT/CT vs. CC）下，TT/CT组白细胞计数较高（6.20×10⁹/L[4.80–7.90] vs. 4.30×10⁹/L[3.30–8.15]；p=0.03），hsCRP较高（2.46[1.15–4.96] vs. 0.80[0.54–2.36] mg/L；p=0.01），C3较高（92.83[78.69–113.59] vs. 72.00[55.95–89.73] mg/dL；p=0.002），C4较高（15.03[11.26–21.28] vs. 11.49[5.54–15.10] mg/dL；p=0.01）；隐性模型（TT vs. CT/CC）下临床或实验室特征无显著差异（p≥0.05）。不同rs355687基因型间SLEDAI-2K值无统计学显著差异（p=0.40）。结论为rs355687与hsCRP、C3、C4及白细胞计数相关，尤其显性模型，但该基因型分层分析在讨论中被作者强调为探索性。

CXCL13 rs355687 SNV与SLE患者血清CXCL13水平关联（Association of the CXCL13 rs355687 SNV with serum CXCL13 levels in SLE patients）：通过ELISA检测，SLE患者中位血清CXCL13为66.80 pg/mL（49.00–131.70），健康对照为57.38 pg/mL（49.52–64.97）。携带TT基因型的SLE患者血清CXCL13显著高于健康对照（71.51 pg/mL[51.36–149.50] vs. 57.38 pg/mL[49.52–64.97]；p=0.02）。在SLE患者内部，TT与CT携带者间无显著差异（71.51[51.36–149.50] vs. 58.43[37.48–113.4] pg/mL；p=0.20），TT与CC携带者间无显著差异（71.51[51.36–149.50] vs. 70.99[57.12–119.4] pg/mL；p=0.99），CC与CT携带者间亦无显著差异（p=0.59）；CC和CT基因型患者血清CXCL13与健康对照相比无显著差异（CC vs. 对照：p=0.28；CT vs. 对照：p=0.99）。有和无肾脏受累患者中位CXCL13分别为58.43 pg/mL（43.77–130.68）和69.94 pg/mL（53.19–139.31），差异无统计学意义（p=0.39）。结论为TT基因型SLE患者血清CXCL13高于健康对照，但SLE患者内部基因型间及肾受累与否间无显著差异。

讨论部分总结：SLE以异常免疫激活、广泛炎症和多器官组织损伤为特征，T、B淋巴细胞功能障碍参与疾病发生发展，遗传和环境因素共同影响易感性，多种细胞因子和趋化因子基因SNV与SLE风险相关。本研究发现CXCL13 rs355687 SNV与墨西哥人群SLE风险增加相关；此前未见rs355687与SLE易感性关联的报道。该变异影响SLE风险的确切机制尚不清楚；已知编码区SNV可改变蛋白结构和功能，非编码调控区变异可以等位基因特异性方式影响转录活性和基因表达。rs355687位于CXCL13基因内含子区，既往与HBV疫苗无应答及宫内HBV感染风险降低相关。多种SNV与SLE易感性相关，包括IRF5、TLR9、PXK等基因变异；IL-1β的rs16944、rs1143627和rs1143634可调节汉族人群SLE风险及狼疮肾炎、血小板减少等临床特征；IL7RA变异rs6897932（C>T）则对SLE具有保护作用。趋化因子相关基因SNV与SLE易感性的关联仍有争议：有研究报告MCP-1位点?2518 A/G多态性、NCF2的rs13306575和rs17849502、DNASE1L3的rs35677470及IKBKE附近rs2297550与SLE风险相关；而RANTES（rs2107538、rs2306630）、IL-8（rs4073、rs2227306）和MCP-1（rs1024611）等SNV与SLE易感性或疾病严重程度无显著关联。本研究中rs355687与SLE患者血清hsCRP、C3和C4水平相关，尤其在显性模型下；但该基因型分层分析样本量有限，应视为探索性并谨慎解释。既往研究显示特定SNV可调节SLE生化参数，如rs11725913影响γ-谷氨酰转肽酶（GGT）水平，风险T等位基因携带者GGT浓度较高；血清CXCL13水平与SLE患者C3和C4水平呈负相关，可能支持CXCL13多态性与补体激活之间的免疫学关系。尽管rs355687与血清C3、C4和hsCRP相关，但该关系未反映为临床受累；一种解释是这些标志物与疾病临床表现之间存在时间错配，横断面设计无法捕捉动态波动或时间关系；另一种可能是样本量有限降低检测细微临床效应的统计效能。与本研究一致，多项利用SLE易感位点基因分型面板的研究报告，一些SNV虽与疾病易感性相关，却不与慢性损伤累积、特定器官受累或临床亚表型相关，例如CCR5基因rs333缺失与SLE患者临床症状无关。趋化因子通过协调免疫细胞招募、活化和组织浸润在SLE发病中起关键作用；病程中可见IL-8、IP-10、MIG、MCP-1、MIP-1α和CXCL13血清水平升高。CXCL13尤其是炎症组织中B细胞运输和异位淋巴结构形成的中心介质，促进狼疮肾炎肾内B细胞浸润；它还可通过招募和激活生发中心内CXCR5⁺滤泡辅助T细胞和B细胞，增强浆母细胞分化和自身抗体产生，从而强化CXCL13信号与SLE自身反应性B细胞应答放大之间的联系。本研究发现携带rs355687 TT基因型的患者血清CXCL13浓度高于健康供者；既往研究显示CXCL13基因内SNV可调节该趋化因子循环水平，例如携带rs355689和rs17002733主要等位基因者血清CXCL13浓度较高，CXCR5位点rs630923变异也与CXCL13水平升高相关。rs355687影响CXCL13浓度的机制尚不清楚；该变异位于内含子区，尚不知其是否与CXCL13内或邻近基因的其他SNV存在连锁不平衡。一种可能性是rs355687标记CXCL13内尚未识别的功能变异，或影响增强子、启动子等调控元件，从而改变转录活性或蛋白周转，最终导致CXCL13产生增加或降解减少，但尚需更多研究证实。研究局限性包括样本量相对较小，可能降低统计效能并限制结果外推；未进行功能实验以确定rs355687是否影响CXCL13转录或蛋白表达；ELISA检测血清CXCL13时健康对照数量有限，进一步降低统计效能并可能妨碍检测真实组间差异，因此结果应谨慎解释并在更大队列中验证。

研究结论翻译：总之，CXCL13 rs355687 SNV与SLE易感性显著相关，尤其在加性和隐性遗传模型下。这些发现提示CXCL13位点的遗传变异可能促进该人群的疾病易感性。然而，鉴于样本量相对较小且缺乏功能验证，该关联应谨慎解释。