《International Journal of Molecular Sciences》：Wide-Field Fundus Autofluorescence Patterns in a Polish Cohort of Genotyped Patients with Phenotype of Retinitis Pigmentosa, Usher Syndrome and Cone–Rod Dystrophy
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## 三、摘要翻译
目的：在波兰大型队列中，对不同基因型遗传性视网膜营养不良（inherited retinal dystrophies, IRDs）患者按每组至少5例进行分组，探讨其广角眼底自发荧光（fundus autofluorescence, FAF
## 三、摘要翻译
目的：在波兰大型队列中，对不同基因型遗传性视网膜营养不良（inherited retinal dystrophies, IRDs）患者按每组至少5例进行分组，探讨其广角眼底自发荧光（fundus autofluorescence, FAF）模式的差异。方法：共纳入103例具有视网膜色素变性（retinitis pigmentosa, RP）、Usher综合征及视锥-视杆细胞营养不良（cone–rod dystrophy, CRD）表型的IRDs患者，依据基因分析结果分为每组至少5例的组别。回顾性分析超广角FAF（ultra-wide field FAF, UWF-FAF）影像以确定FAF模式。结果：共区分出10组相同基因型及3种FAF模式。在例数最多的USH2A组（26例）中，黄斑高自发荧光（hyperautofluorescence, hyper-AF）环合并周边斑驳状低自发荧光（hypoautofluorescence, hypo-AF）者19例，单纯hyper-AF环（含1例双环）5例，视盘周围保留（peripapillary sparing）2例。在ABCA4组（22例）中，后极部及中周部斑驳状hypo-AF模式最为多见（13例），合并视盘周围保留4例，中心hyper-AF环3例，特征性斑点（flecks）2例。在RPGR组（15例）中，最常见模式为hyper-AF环合并周边斑驳状hypo-AF（13例），其余2例仅见hypo-AF斑驳状改变。在PROM1基因变异组（7例）中，后极部斑驳状hypo-AF同样为优势模式（6例），另有1例为hyper-AF环合并周边hypo-AF。NR2E3（5例）、RP1（5例）、RHO（7例）、CDHR1（5例）、PRPF31（5例）及EYS（6例）基因致病变异患者亦均表现为中心hyper-AF环伴周边斑片状hypo-AF灶，其中仅1例NR2E3患者呈现双环。除ABCA4与PROM1组外，全部组别中最常见的模式为中央hyper-AF环伴周边斑片状hypo-AF（72例，70%）。ABCA4与PROM1相关RP组以后极部及周边斑驳状hypo-AF模式为主，未见hyper-AF环。结论：FAF模式具有高度异质性，但不同基因型IRDs存在某些可资鉴别的特征。
## 四、论文主体解读
**研究背景与问题**
遗传性视网膜营养不良（inherited retinal dystrophies, IRDs）是一组遗传介导的异质性疾病，因光感受器（视杆和/或视锥细胞）、视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）乃至内层视网膜或脉络膜功能障碍与变性，导致进行性（偶或静止性）视力损害，遗传方式涵盖常染色体显性、常染色体隐性、X连锁及线粒体遗传，涉及基因逾300个。眼底自发荧光（fundus autofluorescence, FAF）成像基于脂褐素（lipofuscin）等双维甲酸类（bisretinoids，如A2E）荧光团在约600 nm处的发射光谱，可在532 nm（绿光）激发下获取约200°视网膜图像，作为RPE/光感受器复合体代谢与结构状态的“代谢图谱”，其异常常早于或优于彩色眼底镜所见。Optos超广角系统为共聚焦扫描激光检眼镜（confocal scanning laser ophthalmoscope, cSLO），可覆盖后极部以外的病变区域。然而，波兰虽有约3700万人口，IRDs的基因型与临床特征研究甚少，仅有若干小样本报道，且既往关于FAF模式的研究多集中于中心区域、并非全部患者均经基因分型。为此，研究人员对103例经基因分型的波兰RP、Usher综合征及视锥-视杆细胞营养不良（cone–rod dystrophy, CRD）患者按基因型分组，系统描述其广角FAF模式，以明确不同基因型是否具有可识别的FAF特征。
**主要关键技术方法**
研究为回顾性研究，患者来源于波兰卢布林医科大学（Medical University of Lublin）普通与小儿眼科开展的Lublin Digital Union项目队列。纳入标准为临床诊断为RP、Usher综合征或CRD，全部患者接受家族史与病史采集、眼底镜检查、裂隙灯检查、视力、视野及视网膜电图（electroretinography, ERG）等功能检查。所有患者散瞳后行Optos广角眼底照相与FAF成像，由两名阅片者对临床资料与基因诊断设盲独立判读，分歧时经共识复核并由第三位资深专家裁定。基因检测由德国图宾根CeGaT实验室完成，采用全外显子组测序（whole-exome sequencing, WES），于Illumina NovaSeq6000平台经定制外显子面板（CeGaT Exome Xtra? v.5）溶液杂交富集后测序，读段比对至hg19参考基因组，分析单核苷酸变异、小插入缺失及拷贝数变异（copy number variations, CNVs），变异按ACMG/ACGS 2020指南（v4.01）分类。“分子诊断明确”定义为足以解释表型且符合遗传模式的致病/可能致病变异（常染色体隐性需同基因两个变异、常染色体显性需一个变异、X连锁需一个半合子变异）。最终在132例分子诊断明确者中选取同一基因≥5例者，形成10组共103例（平均年龄42岁，男性45例）。
**研究结果**
**USH2A基因**：26例，为最大且最均一组，错义变异约占60%，c.11864 G>A为主要复发性等位基因（6例，约23%），外显子21–23缺失为最重要的复发性CNV（5例），双等位基因变异13例，无重复的复合杂合基因型。FAF示单一完整黄斑hyper-AF环（5例）或合并hypo-AF斑片（19例），双环1例；周边以中周部及视盘周围点状hypo-AF为主，视盘周围保留2例。
**ABCA4基因**：22例（RP 19例、CRD 3例），以错义变异为主，未见致病性CNV或明确截短变异，复发性等位基因为c.1622 T>C（12例）、c.3113 C>T（11例）、c.454 C>T（4例），c.1622 T>C/c.3113 C>T为主要致病组合，提示可能存在奠基者效应；少数患者仅携带单个致病等位基因。黄斑及中周部灶性hypo-AF 14例，视盘周围保留4例，黄斑受累伴中心hypo-AF及hyper-AF环或萎缩伴交界区3例，典型Stargardt样斑点2例。
**RPGR基因**：15例，等位基因异质性显著，仅c.194G>A见于2例，以移码与剪接位点变异为主。13例示中心融合或斑片状黄斑萎缩（hypo-AF）被hyper-AF环包绕，并伴周边hypo-AF；2例仅见周边斑驳状hypo-AF。
**PROM1基因**：7例，c.1301+2 T>C（4例，57%）与c.1902 C>G（3例，42%）为最常见等位基因。优势模式为中周部及周边斑驳状hypo-AF，1例合并中心hyper-AF环。
**NR2E3基因**：5例，c.481delA为主要等位基因（4例），以移码变异为主；2例为双等位基因变异，3例仅单一致病等位基因。FAF示傍中心凹双hyper-AF环，内环位于黄斑周围、外环沿血管弓分布，中心视网膜相对保留，中心凹周围及中周部受累呈斑片状hypo-AF，双环1例。
**RP1基因**：5例，c.2029C>T与c.2173_2174delinsG各见于2例无关个体，变异谱异质（错义、截短及剪接位点），3例另携带其他视网膜疾病相关基因变异。FAF示黄斑萎缩被完整黄斑周围hyper-AF环包绕，周边hypo-AF自斑驳状至融合地图状。
**RHO基因**：7例，c.1040C>T见于4例，全部为错义变异，符合显性RHO相关视网膜病变谱，分子诊断率100%。全部患者均见中心凹周围hyper-AF环，环外hypo-AF呈斑驳状扩展至地图状，反映RPE/光感受器进行性丧失；1例环不完整呈弧形。
**EYS基因**：6例，截短与结构变异比例高，含多个复发性外显子缺失，75%患者检出双等位基因变异。FAF示黄斑内斑片状hyper-AF灶及完整hyper-AF环，双侧弥漫颗粒状hypo-AF自中周部延伸至远周边，伴多灶点状低AF区。
**PRPF31基因**：5例，最常见的改变为外显子缺失，3例（60%）为外显子4缺失、1例为外显子8缺失。FAF示围绕中心凹的边界清晰完整中心凹周围hyper-AF环，伴广泛周边hypo-AF及斑片状斑驳AF。
**CDHR1基因**：5例均检出c.783G>A，其中1例另携ABCA4致病变异c.5882 G>A，2例为CRD表型。全部患者双眼对称性中心凹周围异常，边界清晰的中心hypo-AF（RPE萎缩）被hyper-AF移行带（hyper-AF环）环绕，并伴程度不一的周边斑片状hypo-AF。
**讨论与结论**
讨论指出，FAF已成为IRDs诊疗的重要检查，但特异性有限、依赖采集与处理、缺乏多模式检查时结构-功能对应欠佳，同一模式可见于不同基因及不同病期；波兰既往FAF资料稀缺，最相关者为Wi?cek等对73例RP的中心FAF研究，但未全部基因分型。本研究最常见的模式为中央hyper-AF环伴周边斑片状hypo-AF（70%），该环在眼底检查中不可见，与结构和功能指标高度相关，常作为疾病进展标志，本组多为完整环；RPE脂褐素负荷升高被认为是其成因。结果与Trichonas等的观察一致，后者报道RHO与USH2A患者可见清晰hyper-AF环、USH2A患者可见第二环及周边弥漫均匀hypo-AF。双环曾见于RHO、RPGR、USH2A及NR2E3相关病变，也一度被视为NR2E3相关RP的可能特征性标志，但Dowd-Schoeman等未能证实；Escher等所述双环与本队列所见相符；Fakin等报道USH2A相关RP中双环仅3例而单环24例，本队列USH2A组仅1例双环。ABCA4相关视网膜病变表现为黄斑受累、视盘周围保留及斑点三类表型，斑点系未被吞噬的外节细胞外堆积，视盘周围保留机制未明。PROM1组所见与既往报道一致。RHO组c.1040C>T高复发提示复发性或奠基者变异，弧形而非完整环主要与视锥细胞分布不对称有关。RPGR组所见与Padhy等一致，RP1组所见与文献一致。EYS相关RP以周边弥漫低AF加黄斑hyper-AF环为特征，Kominami等2025年描述了“无限符号”征，但本组6例均未见。CDHR1组所见与Charbel报道一致，而Ba-Abbad等强调需结合OCT与ERG评估。研究还指出FAF存在“天花板/地板效应”及出血、渗出、色素、纤维化所致信号遮挡、生理性中心凹低AF、眼睑睫毛伪影与周边投影畸变等干扰，故重复且标准化的图像采集至关重要；表型变异（如RPGR可表现为RP、Leber先天性黑矇、黄斑营养不良及CRD）限制基因型-表型关联解读。本研究的局限为缺乏定量FAF分析、部分基因样本量小且缺乏纵向数据。作者认为，随着分子诊断进步与对IRDs认识深化，FAF仍将是临床实践与研究的基石。
研究结论译文：FAF模式具有高度异质性，但不同基因型IRDs存在某些可资鉴别的特征。
