《Veterinary Research Communications》：Sarcocystis sp. infection associated to encephalomyelitis and myositis in a Brazilian dog
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由萨科齐虫（Sarcocystis sp.）引发的疾病在馬匹中尤为常见，其中S. neurona是美洲马原虫性脊髓脑炎（EPM）的主要致病因子。马虽为异常宿主，但易感物种范围包括海洋哺乳动物、浣熊和猫。犬类临床病例报道罕见，在南美洲尚无报道。本研究描述了一例巴
由萨科齐虫（Sarcocystis sp.）引发的疾病在馬匹中尤为常见，其中S. neurona是美洲马原虫性脊髓脑炎（EPM）的主要致病因子。马虽为异常宿主，但易感物种范围包括海洋哺乳动物、浣熊和猫。犬类临床病例报道罕见，在南美洲尚无报道。本研究描述了一例巴西犬自然发生的、致命的萨科齐虫（Sarcocystis sp.）所致脑膜脑脊髓炎和肌炎的临床、病理学及免疫组化（IHC）表现。一只5岁混种雌犬表现为急性非行走性四肢轻瘫、全身性肌肉萎缩及失明。尽管给予支持性治疗，患犬病情仍持续恶化，最终实施安乐死。大体剖检发现淋巴结肿大、中度脾肿大和肝肿大，肝被膜多灶性轻度纤维素沉积，胰腺伴多灶性轻度出血。组织病理学显示严重的多灶性坏死性脑膜脑脊髓炎、肌炎、脾炎、淋巴结炎及间质性肺炎，病变内可见原虫性裂殖体。免疫组化（IHC）支持萨科齐虫（Sarcocystis sp.）阳性标记，同时排除刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）和犬新孢子虫（Neospora caninum）。据作者所知，这是南美洲首例经组织病理学和免疫组化（IHC）证实的、具有此严重程度的犬临床肉孢子虫病报道。上述发现支持萨科齐虫（Sarcocystis sp.）应被纳入犬进行性神经系统疾病的鉴别诊断，并突显了野生动物储存宿主在疾病流行病学中的潜在作用。
**研究背景与问题提出**
萨科齐虫（Sarcocystis）属是一类顶复门（Apicomplexa）寄生虫，其中S. neurona是美洲马原虫性脊髓脑炎（EPM）的主要病原。负鼠（Didelphis spp.）为其终末宿主，但该寄生虫可感染广泛的中间宿主和异常宿主，包括海獭、浣熊、猫，犬类感染较为罕见。在犬中，萨科齐虫相关疾病的报道极少，临床表现可表现为严重的多灶性神经功能缺损、全身性炎症或二者兼有。由于有文献记录的临床病例稀缺，对该病在犬中的致病性和流行病学意义的认识十分有限，在南美洲这一终末宿主普遍存在的地区尤为如此。本研究旨在描述一例巴西犬自然获得性、致命性萨科齐虫（Sarcocystis sp.）感染的临床、解剖病理学及免疫组化（IHC）特征，重点关注原虫性脑炎的诊断挑战、多器官系统播散以及将该病原与其他嗜神经原虫相鉴别的重要性。
**研究内容与结论**
研究人员报道了一只5岁未绝育雌性混种犬的病例，该犬来自有牲畜和其他健康犬只的乡村环境，疫苗接种和驱虫程序未及时更新。患犬表现为急性非行走性四肢轻瘫、全身性肌肉萎缩和失明，神经解剖学定位为多灶性，涉及前脑、脑干及脊髓节段（C6-T2和L4-S3），并伴有周围神经系统成分。尽管给予支持性治疗，患犬神经状态进行性恶化，最终实施安乐死并进行了完整剖检。组织病理学检查显示严重的多灶性液化性坏死性脑膜脑脊髓炎、肌炎、脾炎、淋巴结炎和间质性肺炎，病变内可见薄壁裂殖体（直径达20 μm），内含大量椭圆形嗜碱性裂殖子（2×3 μm）。免疫组化（IHC）显示病变内原虫对萨科齐虫（Sarcocystis sp.）呈强阳性免疫反应，而对刚地弓形虫（T. gondii）和犬新孢子虫（N. caninum） consistently阴性，支持诊断。研究人员得出结论，这是南美洲首例经组织病理学和免疫组化（IHC）证实的、具有此严重程度的犬临床肉孢子虫病报道，萨科齐虫（Sarcocystis sp.）应被考虑为犬进行性神经系统疾病的鉴别诊断之一，并强调了野生动物储存宿主在疾病流行病学中的潜在作用。
**关键技术方法**
本研究采用的关键技术方法包括：完整的大体剖检与组织病理学检查（苏木精-伊红染色，HE），对脑（额叶、顶叶、枕叶皮质、脑桥、小脑及颈、胸、腰、骶段脊髓）、骨骼肌、舌、脾、淋巴结、肺、肝、肾等组织进行系统评估；免疫组化（IHC）检测，使用非商业性兔多克隆抗S. neurona一抗（由JP Dubey提供，按Hamir et al. 1993方案制备），以AEC为显色剂，同时进行刚地弓形虫（T. gondii）和犬新孢子虫（N. caninum）的免疫组化（IHC）鉴别检测。样本来源为一例巴西兽医教学医院神经内科和神经外科服务中心接诊的5岁混种雌犬，患犬来自有牲畜和野生动物存在的乡村农场。由于患犬临床状态不稳定及经济限制，未进行MRI和脑脊液（CSF）分析；因无冷冻或新鲜组织样本，PCR检测未能从石蜡包埋组织中成功扩增。
**研究结果**
组织病理学检查结果：脑和脊髓随机分布的多灶性液化性坏死区，脑桥中坏死可累及高达50%的实质，皮质和脊髓亦有显著受累。坏死区内混有严重的巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞和中性粒细胞浸润，伴多灶性中度胶质增生和水肿。血管周围间隙和脑膜亦见相似炎症浸润。坏死灶内可见大量原虫结构，特征为薄壁裂殖体，直径达20 μm，内含大量椭圆形嗜碱性裂殖子，大小为2×3 μm，裂殖子亦可见游离于坏死区内。骨骼肌和舌表现为淋巴浆细胞性和组织细胞性肌炎，伴肌纤维坏死和病变内原虫。
免疫组化（IHC）检测结果：脑和脊髓切片的免疫组化（IHC）显示病变内寄生虫对萨科齐虫（Sarcocystis sp.）呈强阳性免疫反应，而对刚地弓形虫（T. gondii）和犬新孢子虫（N. caninum） consistently阴性，支持诊断。
多器官受累结果：原虫结构亦见于脾、淋巴结和肺，伴随多灶性严重组织细胞性脾炎和淋巴结炎，以及多灶性中度间质性肺炎。此外，肝脏表现为多灶性中度小叶中央性大泡性变性和多灶性轻度出血，肾脏表现为多灶性中度膜增生性肾小球肾炎。
**讨论与结论**
本报告描述了一例罕见的致命性犬脑膜脑脊髓炎和肌炎，与萨科齐虫（Sarcocystis sp.）感染相关。据作者所知，这是拉丁美洲首例经组织病理学和免疫组化（IHC）证实的、具有如此严重全身性和神经系统肉孢子虫病的犬类报道。患犬的临床表现——非行走性四肢轻瘫和多灶性神经功能缺损——与犬的其他常见传染病（如犬瘟热、利什曼病、新孢子虫病和弓形虫病）存在显著重叠。本病例中病变的快速进展和严重程度，以广泛液化性坏死为特征，值得关注。类似的病理模式在马原虫性脊髓脑炎（EPM）中已有充分记录，但在犬中以如此强度报道甚少。
在犬中，脑膜脑脊髓炎病例主要报道于美国，而肌肉或内脏表现则报道于南美洲。在巴西，此前唯一一例与S. neurona感染相关的小型家养动物脑膜脑炎报道涉及一只猫，另一项使用犬冷冻脑样本的研究在11份样本中仅检出1例PCR阳性。这种病例的明显稀少可能归因于该地区的诊断不足，因为大多数诊断实验室并未常规开展萨科齐虫（Sarcocystis sp.）的确认性辅助检测。由于形态学相似，使用常规H&E染色难以将萨科齐虫（Sarcocystis sp.）与犬新孢子虫（N. caninum）和刚地弓形虫（T. gondii）相鉴别，联合使用免疫组化（IHC）标记物与裂殖体形态学有助于完成这一鉴别任务。
南美洲与萨科齐虫（Sarcocystis sp.）相关的主要临床表现是由S. neurona引起的马原虫性脊髓脑炎（EPM），其流行病学与终末宿主Didelphis albiventris密切相关。巴西负鼠中已报道较高的感染率。本报告中的犬生活在确认有野生动物存在的农场，提示环境污染或捕食感染中间宿主为可能的传播途径。尽管萨科齐虫（Sarcocystis sp.）感染最常见的临床表现与胃肠道或肌肉系统相关，但本病例的临床症状、组织病理学发现、免疫组化（IHC）结果和流行病学特征综合支持S. neurona感染的怀疑。
本报告的限制包括：由于患犬临床不稳定和经济限制，无法进行MRI和脑脊液（CSF）分析等晚期产前诊断；由于无冷冻或新鲜组织样本，且石蜡包埋组织PCR检测为阴性（可能归因于DNA降解），分子特征鉴定（PCR）未能完成；尽管免疫印迹或免疫荧光试验等额外确认方法可进一步加强诊断，但因无额外样本可用而未能实施。然而，诊断通过特征性组织病理学发现与免疫组化（IHC）检测的结合得以实现。裂殖体的独特形态学，加上萨科齐虫（Sarcocystis sp.）阳性免疫反应性和刚地弓形虫（T. gondii）及犬新孢子虫（N. caninum）阴性结果——后两者为犬原虫性脑膜脑脊髓炎的主要鉴别诊断——支持该诊断。
据研究人员所知，这是犬中报道的少数自然发生的萨科齐虫（Sarcocystis sp.）神经系统和全身性肉孢子虫病病例之一，为兽医文献贡献了宝贵的临床和病理学信息。本病例强调拉丁美洲的兽医临床医生需要将萨科齐虫（Sarcocystis sp.）纳入具有多灶性神经体征的犬的鉴别诊断，尤其是在乡村环境中。
