基于 LAMP 技术的恶性疟原虫氯喹耐药标志物（K76T）检测优化与应用研究

《Parasitology Research》：Real-Time LAMP: a reliable tool for the surveillance of SNPs in chloroquine resistance Pfcrt gene

摘要

与恶性疟原虫（Plasmodium vivax）相比，印度恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）对氯喹的耐药性非常普遍。恶性疟原虫中氯喹耐药性的主要标志是Pfcrt基因上的K76T突变。虽然有多种传统方法可以检测这些标志物，但它们在实地应用时存在一定的局限性，因为需要经过专业培训的人员和设备齐全的实验室，并且耗时较长。为了克服这些挑战，我们设计了环介导等温扩增技术（Loop Mediated Isothermal Amplification Assay，简称LAMP），这是一种正在野外研究中得到广泛应用的新工具。本研究优化了LAMP技术，用于检测Pfcrt基因中的单核苷酸多态性（SNPs）。我们为K76T突变体设计了LAMP引物，并优化了实时LAMP检测的条件。该检测方法的临床灵敏度为100%，特异性为80%，检测限为1拷贝/微升（1copy/μl），且未观察到与其他寄生虫株之间的交叉反应。研究证明，LAMP是一种可靠的工具，可用于实地监测目前仍在使用和已停用的抗药物耐药性标志物。这些监测研究有助于提供数据，从而判断已停用药物敏感性是否恢复，以及当前使用药物的耐药性情况，最终协助政府相应地调整药物政策。

与恶性疟原虫（Plasmodium vivax）相比，印度恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）对氯喹的耐药性非常普遍。恶性疟原虫中氯喹耐药性的主要标志是Pfcrt基因上的K76T突变。尽管有多种传统方法可以检测这些标志物，但它们在实地应用时存在一定的局限性，因为需要经过专业培训的人员和设备齐全的实验室，并且耗时较长。为了克服这些挑战，我们设计了环介导等温扩增技术（Loop Mediated Isothermal Amplification Assay，简称LAMP），这是一种正在野外研究中得到广泛应用的新工具。本研究优化了LAMP技术，用于检测Pfcrt基因中的单核苷酸多态性（SNPs）。我们为K76T突变体设计了LAMP引物，并优化了实时LAMP检测的条件。该检测方法的临床灵敏度为100%，特异性为80%，检测限为1拷贝/微升（1copy/μl），且未观察到与其他寄生虫株之间的交叉反应。研究证明，LAMP是一种可靠的工具，可用于实地监测目前仍在使用和已停用的抗药物耐药性标志物。这些监测研究有助于提供数据，从而判断已停用药物敏感性是否恢复，以及当前使用药物的耐药性情况，最终协助政府相应地调整药物政策。