盐酸阿比多尔通过下调CD163和MYH9并调控TLR4/NF-κB炎症通路抑制PRRSV感染

《Transboundary and Emerging Diseases》：Arbidol HCl Inhibits PRRSV Infection by Downregulating CD163 and MYH9 Expression and Modulating Inflammatory Responses

　　

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）对全球养猪生产构成重大挑战，但有效的治疗干预仍然缺乏。研究人员通过易感细胞和体内途径的综合研究，探究了盐酸阿比多尔（Arbidol HCl）对抗PRRSV感染的抗病毒效力。观察结果表明，在MARC-145细胞和原代猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中，Arbidol HCl对多种PRRSV分离株具有明显的抗病毒活性。机制研究揭示，Arbidol HCl通过显著下调关键病毒受体富含半胱氨酸的清道夫受体（CD163）和肌球蛋白重链9（MYH9）的表达，从而破坏病毒附着和内化，抑制PRRSV感染的早期阶段。后续验证研究表明，Arbidol HCl通过抑制Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路，减弱PRRSV引起的促炎反应。使用PRRSV感染仔猪的体内实验表明，Arbidol HCl治疗显著降低血清病毒载量，减轻肺部病理损伤，并缓解全身炎症反应。这些结果共同确立Arbidol HCl作为一种有前景的双重作用治疗剂，兼具直接抗病毒作用和抗炎特性。研究人员的研究为开发一种可显著影响全球猪健康和食品安全的实用治疗干预措施带来了希望。它将为养猪生产中的PRRS预防和治疗提供新途径。

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是影响全球养猪业的重要跨境传染病，以发热、厌食、严重呼吸道症状、繁殖障碍和免疫抑制为特征。PRRSV为有囊膜的正链单股RNA病毒，属尼多病毒目动脉炎病毒科。自20世纪80年代末发现以来，已鉴定PRRSV-1和PRRSV-2两种基因型；我国近年存在PRRSV-2的1、3、5、8谱系及PRRSV-1。由于PRRSV传播性强、遗传异质性高，且宿主先天与适应性免疫应答造成损伤，现有疫苗对异源毒株交叉保护有限，尚无批准用于猪临床的特异性抗病毒药物。这一治疗空白促使研究人员评估盐酸阿比多尔（Arbidol HCl）抗PRRSV的效力及机制。Arbidol HCl具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗癌和抗氧化等生物活性，并已被报道抑制流感病毒、SARS-CoV-2、HSV-1、HSV-2和RSV等，但其抗PRRSV效果和确切机制尚不明确。研究人员在细胞培养和仔猪体内系统评价Arbidol HCl，发现其在MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中抑制PRRSV复制，作用于吸附和内化阶段，与下调CD163和MYH9有关；同时通过干扰TLR4/NF-κB信号抑制感染诱发的过度促炎反应；在攻毒仔猪中降低循环病毒载量并减轻肺部病变。该研究将直接抗病毒与抗炎双重作用集于同一分子，为PRRS治疗提供候选起点，对猪健康和食品安全具有重要意义。

为开展研究，研究人员使用PRRSV易感的MARC-145细胞和原代PAMs；PAMs经肺灌洗取自无PRRSV的8周龄仔猪。病毒包括PRRSV-1 GZ11-G1、P073-3和PRRSV-2 SD16、VR-2332、CH-1a、NADC30-like、JXA1。主要技术包括实时定量PCR（qPCR）、蛋白免疫印迹（western blot）、免疫荧光试验（IFA）、50%组织培养感染剂量（TCID₅₀）滴定、酶联免疫吸附试验（ELISA）、直接灭活与时间添加实验、病毒附着/内化检测、TAK-242处理及小干扰RNA（siRNA）敲低TLR4。体内使用15头无PRRSV的8周龄仔猪（Pengyue Laboratory Animal Technology Co., Ltd., Jinan, China），随机分三组，每组5头；SD16滴鼻3×10⁵ TCID₅₀/头，Arbidol HCl 40 mg/kg口服于?1、1、3、5、8 DPC，21 DPC采血和肺组织。统计用Student’s t检验或单因素方差分析。

2.1 盐酸阿比多尔（Arbidol HCl）的药物细胞毒性检测（The Drug Cytotoxicity Detection of Arbidol HCl）：通过CCK-8检测，20 μM以下不影响MARC-145细胞和PAMs活力，故后续上限为20 μM。2.2 易感细胞中的抗PRRSV活性（Anti-PRRSV Activity of Arbidol HCl in Susceptible Cells）：通过qPCR、western blot和IFA检测SD16感染，Arbidol HCl剂量依赖性降低子代病毒产生、PRRSV N蛋白和病毒蛋白表达。2.3 广谱抗PRRSV活性（Arbidol HCl Exerts a Broad-Spectrum Antiviral Activity Against PRRSV Strains）：通过TCID₅₀和western blot，Arbidol HCl降低PRRSV-1 GZ11-G1、P073-3及PRRSV-2 VR-2332、JXA1、CH-1a、NADC30-like的病毒滴度和N蛋白表达。2.4 通过调控CD163和MYH9在早期感染阶段发挥抗PRRSV作用（Arbidol HCl Exerts Anti-PRRSV Effects at the Early Infection Stages by Modulating CD163 and MYH9 Expression）：直接灭活实验显示无直接杀病毒作用；时间添加实验显示全程、预处理和共处理降低病毒拷贝和N蛋白；附着和内化试验显示Arbidol HCl降低病毒附着和内化；PAMs中1、3、5、7 hpi的CD163、MYH9 mRNA降低，ORF-7时间依赖性降低，24 hpi的CD163和MYH9蛋白降低。2.5 减弱PAMs多种促炎细胞因子生成（Arbidol HCl Attenuates Multiple Proinflammatory Cytokine Generation in PAMs）：ELISA显示10、20 μM Arbidol HCl剂量依赖性降低IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α产生。2.6 抑制TLR4/NF-κB信号通路以抑制PRRSV感染（Arbidol HCl Inhibits the TLR4/NF-κB Signaling Pathway to Suppress PRRSV Infection）：western blot显示TLR4、MyD88、p-NF-κB、p-IκBα降低，IκBα升高，总NF-κB不变；TAK-242和siTLR4处理呈现类似降低N蛋白及细胞因子的效应，提示抗病毒活性依赖TLR4/NF-κB下调。2.7 Arbidol HCl体内抗PRRSV活性（Arbidol HCl Demonstrates Anti-PRRSV Activity In Vivo）：仔猪攻毒实验显示Arbidol HCl组血清病毒拷贝数低于DMSO组，血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α降低；肺大体病变和H&E显微病变较轻，肺泡间隔增厚减轻。

讨论部分指出，PRRS仍是全球养猪业最具经济破坏性的疾病之一，造成持续感染、免疫抑制和重大经济损失；尽管研究数十年，完全保护性疫苗和批准临床使用的抗病毒药物仍缺乏，因此需要新型抗PRRSV药物。研究人员首次证明Arbidol HCl通过多重互补机制发挥抗PRRSV活性：下调CD163和MYH9抑制病毒进入，抑制病毒诱导的炎症反应，并调节TLR4/NF-κB信号通路。Arbidol HCl原为抗流感小分子药物，具有已建立的安全性和膜融合抑制/基因组释放抑制机制，其广谱活性已在SARS-CoV-2和口蹄疫病毒等中报道；该研究提示Arbidol HCl抗PRRSV作用针对病毒生命周期保守环节而非毒株特异元件。CD163和MYH9为PRRSV进入关键介导因子，Arbidol HCl降低二者表达可减少感染。PRRSV感染触发过度促炎细胞因子并加重病理，Arbidol HCl在PAMs和仔猪中降低IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α，体现双重作用。TLR4/NF-κB通路验证显示Arbidol HCl剂量依赖性降低TLR4、MyD88并减少NF-κB和IκBα磷酸化，TAK-242和siTLR4实验支持其抗炎和抗病毒活性经该通路关联。仔猪攻毒模型中，Arbidol HCl降低血液病毒载量和血清促炎细胞因子，并减轻肺大体及显微病变。

研究结论翻译：综上，本研究提供全面证据表明，Arbidol HCl通过多种整合机制发挥强效抗PRRSV活性：（i）通过下调CD163和MYH9表达抑制病毒进入；（ii）通过TLR4/NF-κB通路抑制病毒诱导的炎症反应；（iii）在体内降低病毒复制和相关病理。对多种PRRSV毒株的广谱活性，结合其在人类和其他物种中已确立的安全性，使Arbidol HCl成为PRRS管理的有前景治疗候选物。未来研究应评估最佳给药方案、猪体内药代动力学和田间有效性，以促进临床转化。这项工作不仅为PRRS控制提供潜在新工具，也凸显将已批准抗病毒药物重新用于新发和再发兽医疾病的价值。