《Human Nutrition & Metabolism》：Functional thiamine status in cord blood of near-term gestational women in Northeast India: an erythrocyte transketolase activity coefficient-based cross-sectional study
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目的：评价印度东北部近足月妊娠妇女分娩时脐血红细胞转酮醇酶活性系数（ETK-AC）所反映的功能性硫胺素状态，并识别功能性硫胺素缺乏的决定因素。方法：于2023年10月至11月在阿萨姆邦Sribhumi（Karimganj）Makunda基督教麻风病与综合医院开
目的：评价印度东北部近足月妊娠妇女分娩时脐血红细胞转酮醇酶活性系数（ETK-AC）所反映的功能性硫胺素状态，并识别功能性硫胺素缺乏的决定因素。方法：于2023年10月至11月在阿萨姆邦Sribhumi（Karimganj）Makunda基督教麻风病与综合医院开展医院为基础的横断面研究。连续纳入≥32孕周入院分娩的近足月妊娠妇女，直至达到目标样本量32例。纳入标准为年龄15～45岁、单胎妊娠、≥32孕周且居住于医院服务辖区。排除已知血红蛋白病、慢性系统性疾病或入院前30天内使用硫胺素补充剂（产前标准铁-叶酸除外）者。分娩时采集脐血3 mL于EDTA管中，离心、洗涤红细胞后于?80 °C保存至分析。采用改良的96孔板动力学法测定ETK-AC，以硫胺素焦磷酸（TPP）刺激活性与基础活性之比计算；按国际公认阈值分类：充足（≤1.15）、中度缺乏风险（>1.15至≤1.25）、高度缺乏风险（>1.25）。采用Fisher精确检验（大于2×2表采用Freeman–Halton扩展）比较亚组间缺乏患病率，采用Pearson相关系数评估ETK-AC与连续变量的关联。结果：32例参与者平均年龄27.3±5.2岁，平均BMI 26.5±3.7 kg/m2，阿萨姆邦与特里普拉邦各占50%。全部参与者以精白米为主食；75%饮用加盐茶，72%食用发酵鱼或鱼酱，56%食用发酵槟榔。ETK-AC评估显示28%（n=9）参与者ETK-AC升高（>1.15），其中25%（n=8）为中度风险，3%（n=1）为高度风险；72%（n=23）为硫胺素充足；无一例达到与脚气病相关的>1.4阈值。平均ETK-AC为1.102±0.102（范围0.85～1.29）。第二次妊娠者缺乏患病率最高（50%，6/12），初产妇为20%（2/10），≥3次妊娠者为10%（1/10）（Fisher精确检验p=0.119）。妊娠期使用复合维生素/B族维生素者缺乏患病率（14%，2/14）低于未使用者（39%，7/18）（Fisher精确检验p=0.235）。脐血血红蛋白与ETK-AC呈显著负相关（r=?0.375，p=0.035），为本研究唯一具有统计学意义的关联。结论：印度东北部近足月妊娠妇女中28%分娩时脐血ETK-AC升高（>1.15），提示至少存在中度硫胺素缺乏风险，其中3%为高度风险，无一例处于脚气病相关范围；该队列整体更接近硫胺素充足而非明显缺乏的参考人群。脐血血红蛋白与ETK-AC的显著负相关提示硫胺素与铁缺乏可能共存，但尚不能确认。妊娠期复合维生素/B族维生素补充与较低的缺乏患病率相关但未达统计学显著性，值得在足够把握度的研究中评估。研究结果支持将硫胺素明确纳入产前补充剂、加强个体层面综合儿童发展服务（ICDS）补充剂发放，并针对印度东北部高危传统饮食行为开展文化适配的膳食咨询。
**研究背景与问题**
硫胺素（维生素B1）是参与碳水化合物代谢、神经功能和细胞能量产生的水溶性B族维生素，体内储存有限且周转迅速，需持续膳食供给。以精白米为主的高碳水、低硫胺素膳食使人群处于持续性缺乏风险之中。硫胺素缺乏在临床上表现为脚气病，可呈周围神经病变（干性脚气病）、心功能障碍（湿性或Shoshin脚气病）或二者兼有；由硫胺素缺乏母亲纯母乳喂养的婴儿若发生急性心脏型脚气病，未及时识别和治疗时病死率高。全球范围内，硫胺素缺乏在南亚和东南亚部分地区仍是持续存在的公共卫生挑战，老挝、柬埔寨、泰国、缅甸和孟加拉国均有反复暴发报道。在印度，证据显示硫胺素缺乏在特定亚区域重新出现，尤其是精白米消费近乎普遍、硫胺素密集食物摄入低的印度东北部；全国营养调查持续将阿萨姆邦、特里普拉邦、曼尼普尔邦和梅加拉亚邦列为低硫胺素摄入区。20世纪90年代初，阿萨姆邦南部巴拉克谷及特里普拉邦毗连地区的教会医院医生开始记录围产期妇女硫胺素反应性周围神经病变和婴幼儿心脏型脚气病病例，后续病例系列证实这些疾病持续存在，但社区层面和实验室确认的流行病学数据仍然匮乏。分娩时采集的脐血为了解胎儿硫胺素状态提供了独特窗口，可作为母乳喂养开始时新生儿硫胺素储备的替代指标。胎儿-胎盘单位通过硫胺素转运体（THTR-1和THTR-2）主动将硫胺素从母体转运至胎儿循环，使脐血硫胺素浓度通常高于同时采样的母血；然而，通过ETK-AC可测得的母体功能性耗竭直接反映于脐血ETK-AC值。既往来自印度和东南亚的重要研究已证实母体与脐血ETK-AC比值之间存在显著正相关：Bamji（1976）证明母体与脐血红细胞转酮醇酶活性显著相关，同时显示硫胺素缺乏母亲所生婴儿自身更易出现生化性硫胺素缺乏；McGready等（2001）在可比的东南亚环境中记录到多数围产期克伦族妇女存在以红细胞转酮醇酶激活测定的生化性硫胺素缺乏，强调以稻米为主食人群中母体硫胺素耗竭持续至围产期；Sánchez等（1999）在131对产妇及其新生儿队列中证实母体与婴儿ETK-AC值显著相关。该母婴-脐血关系的临床意义直接延伸至早期新生儿期：母乳硫胺素浓度与母体功能性硫胺素状态紧密耦合，缺乏母亲的纯母乳喂养婴儿自出生第一天起即获得低硫胺素乳汁。因此，分娩时脐血ETK-AC既是新生儿硫胺素储备的生物学有效替代指标，也是纯母乳喂养导致婴儿脚气病风险新生儿的哨点指标。此前尚无研究刻画印度东北部脐血功能性硫胺素状态，本研究旨在填补这一空白，通过测定阿萨姆邦一家三级转诊医院分娩的近足月妊娠妇女脐血ETK-AC，并识别分娩时功能性硫胺素缺乏的决定因素。
**主要关键技术方法**
研究为医院为基础的单中心横断面研究，样本来自2023年10—11月于阿萨姆邦Sribhumi（Karimganj）Makunda基督教麻风病与综合医院分娩的连续近足月妊娠妇女（≥32孕周），目标样本量32例，服务辖区覆盖阿萨姆邦南部巴拉克谷及北特里普拉、Dhalai和Unakoti毗连地区；经ICMR-国家营养研究所机构伦理委员会批准（IEC No. NIN-CR/01/II/2022），全部参与者签署书面知情同意。采用结构化问卷收集社会人口学、产科病史及膳食习惯资料，并以食物频率问卷评估 habitual 膳食模式。分娩时采集脐血于EDTA管，经离心、去血浆和白细胞层、冰冷生理盐水洗涤三次后于?80 °C保存；以去离子水裂解红细胞，离心取上清稀释于100 mM Tris缓冲液（pH 7.6），在96孔板中分别设置基础孔与TPP刺激孔，加入含核糖-5-磷酸、NADH、αGDH-TPI和Tween-20的新鲜工作试剂，于37 °C、340 nm动力学模式下每分钟读数共60分钟；ETK-AC以TPP刺激活性与基础活性之比计算，并按Jones等国际阈值分类，每批次设内部质控样本，超过预设变异系数者重新分析。统计分析采用SPSS 25.0，分类变量组间比较用Fisher精确检验（大于2×2表用Freeman–Halton扩展），连续变量关联用Pearson相关，显著性水平p<0.05。
**研究结果**
*社会人口学特征*：32例参与者平均年龄27.3±5.2岁（范围16～40岁），阿萨姆邦与特里普拉邦各16例（50%）；91%为家庭主妇，印度教占63%、伊斯兰教28%、基督教6%；住房为永久结构者47%、半永久9%、临时44%；全部家庭通电，液化石油气与柴火/生物质燃料各占50%；平均BMI 26.5±3.7 kg/m2。通过描述性统计得出该队列社会经济与居住条件概况。
*产科与产前史*：孕次1～5次，初产妇31%（n=10），第二次妊娠经产妇38%（n=12），第三次及以上妊娠31%（n=10）；分娩孕周36周者59%（n=19）、32周者38%（n=12）、40周者3%（n=1）；38%于8周、31%于12周开始产前保健，44%就诊4～6次、34%就诊7～9次；94%报告服用铁-叶酸片，多数服用100～180片；44%（n=14）确认妊娠期使用复合维生素或B族维生素，22%（n=7）补充资料缺失并归类为非使用者；53%（n=17）接受ICDS补充剂。通过问卷资料总结产前保健与补充剂暴露情况。
*膳食习惯与硫胺素拮抗实践*：全部32例（100%）以精白米为主食；75%（n=24）饮用加盐茶，72%（n=23）食用发酵鱼或鱼酱，56%（n=18）食用发酵槟榔；无一例报告食用糙米或蒸谷米。通过食物频率问卷得出该地区膳食模式与已知硫胺素拮抗特征一致。
*ETK-AC功能性硫胺素状态*：28%（n=9）参与者ETK-AC升高（>1.15），提示至少中度硫胺素缺乏风险，其中25%（n=8）为中度风险（>1.15至≤1.25）、3%（n=1）为高度风险（>1.25）；其余72%（n=23）为充足（≤1.15）；无一例达到脚气病相关值>1.4；平均ETK-AC 1.102±0.102（范围0.85～1.29）。通过ETK-AC测定得出该队列功能性硫胺素缺乏患病率及分布。
*亚组分析与危险因素*：各亚组缺乏患病率存在差异，但无一比较达统计学显著性且多个分层样本量极小。第二次妊娠者缺乏患病率最高（50%，6/12），初产妇20%（2/10），≥3次妊娠者10%（1/10）（Fisher精确检验p=0.119）；生育年龄两端数值上较高，<20岁者50%（1/2）、>35岁者67%（2/3）（Fisher精确检验p=0.232）。脐血血红蛋白分类间缺乏患病率为12～14 g/dL组67%（2/3）、14～16 g/dL组31%（4/13）、16～18 g/dL组8%（1/13）、>18 g/dL组67%（2/3），分类比较未达显著性（Fisher精确检验p=0.065）；连续分析显示脐血血红蛋白与ETK-AC呈显著负相关（r=?0.375，p=0.035），即较低血红蛋白与较高（较差）ETK-AC相关，为本研究唯一具有统计学意义的关联。使用复合维生素/B族维生素者缺乏患病率（14%，2/14）低于未使用者（39%，7/18，含7例无补充记录者），差异未达显著性（Fisher精确检验p=0.235）；接受ICDS补充剂者缺乏患病率数值上高于未接受者（35%对20%），差异亦未显著（Fisher精确检验p=0.444），家庭内补充剂共享未作正式分析；饮用加盐茶者缺乏患病率数值上较高（33%对13%，Fisher精确检验p=0.386）。通过亚组Fisher精确检验与Pearson相关得出上述探索性关联。
**讨论与结论**
本研究首次提供印度东北部这一有记录但量化不足的脚气病负担地区近足月妊娠妇女分娩时脐血ETK-AC功能性硫胺素状态数据。28%的功能性缺乏率（25%边缘性、3%严重）具有临床意义，因为分娩时脐血ETK-AC直接反映母乳喂养开始时的新生儿硫胺素储备；鉴于母乳硫胺素含量与母体功能性硫胺素状态紧密耦合，该人群中相当比例新生儿自出生第一天起即面临接受硫胺素缺乏母乳的直接风险。作者强调本研究仅测定脐血功能性硫胺素状态，未评估母体静脉血、母乳硫胺素及婴儿结局，脐血ETK-AC与母体硫胺素状态、母乳硫胺素含量及婴儿脚气病风险之间的联系系依据既往文献推断而非本队列所证实。本研究报告的28%升高ETK-AC患病率与全球可比环境中的发现大致一致：Sánchez等（1999）以红细胞酶学方法研究131对产妇及新生儿，报告38%～63%母亲硫胺素、核黄素或吡哆醇状态不足，且硫胺素缺乏母亲所生婴儿中85%自身硫胺素状态不足；Bamji（1976）在印度低收入产妇中证明母体与脐血ETK活性显著相关并记录母婴生化性硫胺素缺乏，确立了母婴传递途径的印度先例；McGready等（2001）在膳食与印度东北部相似的东南亚人群中报告多数围产期克伦族妇女存在生化性硫胺素缺乏。与胎盘硫胺素浓集一致，既往配对母婴研究发现婴儿功能性硫胺素状态通常优于其母亲。本医院样本28%的升高ETK-AC患病率系在近足月队列分娩时测定，与在母体硫胺素需求最大阶段采样相符，而非覆盖全部孕期；Kareem等（2023）在 South Asia 硫胺素流行区发现38%孕妇在全部三个孕期硫胺素状态低下，与本研究报告32孕周缺乏患病率最高（42%）相近。脐血血红蛋白与ETK-AC的显著负相关（r=?0.375，p=0.035）与多种微量营养素共存耗竭一致：血红蛋白较低（提示铁缺乏或营养性贫血）的妇女ETK-AC亦倾向于较高（较差），符合以精白米为主食、多种微量营养素不足人群的更广泛营养脆弱性。但该关联须谨慎解读，因为ETK-AC是依赖可用于刺激的脱辅基转酮醇酶量的比值，贫血和红细胞年龄分布改变可独立于硫胺素状态而升高ETK-AC；低血红蛋白样本可能部分因分析原因产生较高ETK-AC值，故该相关与铁和硫胺素缺乏共存相符但不能确认，区分二者需补充测定以每克血红蛋白表示的基线红细胞转酮醇酶活性，本研究未测定。对新生儿健康的意义已较明确：Whitfield等（2016）在随机对照试验中证明柬埔寨妇女哺乳期补充硫胺素可显著提高母乳硫胺素浓度并改善16周时婴儿出生后硫胺素状态。这些发现也应适度解读：在采用相同测定方法的近期双人群比较中，硫胺素充足的英国育龄妇女平均ETK-AC为1.09，13%为中度风险、无高度风险；而明显缺乏的冈比亚妇女平均为1.22，43%为中度、34%为高度风险。本队列（平均1.10；25%中度、3%高度风险）更接近充足参考人群而非缺乏人群，代表ETK-AC分布的适度右移及高危端少量但真实的超额，而非高负担缺乏人群；但由于本研究测定的是脐血而非母体外周血，直接比较仍受限。本研究识别的危险因素特征——第二次妊娠经产、生育年龄两端、共存贫血、未使用复合维生素补充剂及包括加盐茶和槟榔在内的膳食拮抗因素——与南亚和东南亚更广泛文献报道一致。复合维生素/B族维生素使用者缺乏患病率较低（14%对39%；Fisher精确检验p=0.235）与保护效应相符，但在小样本中未达统计学显著性，应视为假设生成性；若在足够把握度的研究中得到确认，将具有政策意义，因为印度政府铁-叶酸规划目前不含硫胺素。ICDS接受者缺乏患病率意外高于未接受者，家庭内补充剂共享是一种可能解释，但本研究未正式分析共享情况，故该解释属推测性；差异无统计学显著性，也可能反映样本量小。本研究存在若干局限：医院为基础的小样本（n=32）限制统计把握度和研究辖区外推性，多个亚组仅含2～4例，相应亚组患病率和Fisher精确检验不稳定，按探索性而非确证性处理；无一分类亚组比较达统计学显著性，这些关联应解读为假设生成性。功能性硫胺素状态仅以ETK-AC评估，未采用高效液相色谱法（HPLC）这一生化金标准直接定量红细胞或全血硫胺素二磷酸，两种方法可能不完全一致。膳食模式虽定性记录，但能量和碳水化合物摄入未量化，故无法考察来源于碳水化合物的膳食能量比例（硫胺素需求的重要决定因素）与硫胺素状态的关系。此外，未评估母体静脉血、母乳和婴儿结局，无法直接评价母体-脐血-婴儿硫胺素通路。尽管有上述局限，本研究首次以ETK-AC为基础刻画印度东北部分娩时脐血功能性硫胺素状态。结论部分指出：分娩时脐血ETK-AC是经验证的新生儿硫胺素状态替代指标，并通过已确立的母体-脐血硫胺素相关成为纯母乳喂养婴儿硫胺素缺乏母乳风险的指标。印度东北部近足月妊娠妇女28%存在升高的ETK-AC（>1.15），提示至少中度硫胺素缺乏风险，其中3%为高度风险（>1.25）、无一例处于脚气病相关范围，识别出可能面临婴儿脚气病风险的新生儿亚群，同时使该队列更接近硫胺素充足而非明显缺乏的参考人群。脐血血红蛋白与ETK-AC的显著负相关（r=?0.375，p=0.035）提示该人群硫胺素与铁缺乏可能共存但尚未确认；妊娠期复合维生素/B族维生素补充与较低但非显著的缺乏患病率相关，值得在足够把握度的研究中评估。这些发现为将硫胺素明确纳入产前补充剂、加强个体层面ICDS补充剂发放以及针对印度东北部高危传统实践开展文化适配膳食咨询提供了有力依据。
