尼泊尔加德满都犬狂犬病疫苗抗体应答相关因素评估

《Veterinary Vaccine》：Assessment of factors associated with antibody responses to rabies vaccines in dogs from Kathmandu, Nepal

　　

： 狂犬病是一种几乎100%致死的人畜共患疾病，犬只疫苗接种是阻断病毒传播的基石措施。本研究旨在评估尼泊尔加德满都谷地已接种狂犬病疫苗犬只的抗体应答相关因素。研究于2024年5月至9月间开展，共纳入106只犬只，采集血清样本并采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗狂犬病病毒糖蛋白抗体水平。结果显示，56.6%的犬只表现出充分的血清转换（≥0.5 EU/mL），而43.4%的犬只血清转换不足。单变量分析表明，疫苗接种场所、疫苗剂型（单剂量瓶或多剂量瓶）及绝育状态与充分血清转换显著相关（p<0.001）。多变量逻辑回归分析显示，医院接种（比值比[OR]=8.79；95%置信区间[CI]：2.54–30.48；p<0.001）、使用单剂量瓶疫苗（OR=5.40；95% CI：1.76–16.57；p=0.003）以及年龄大于7岁（OR=4.51；95% CI：1.17–17.40；p=0.029）与充分的血清转换显著相关。多变量线性回归分析进一步表明，绝育状态（估计值=1.10；95% CI：0.38–1.82；p=0.003）和疫苗接种场所（估计值=?0.74；95% CI：?1.44至?0.04；p=0.040）与抗体水平独立相关。研究结论指出，仅56.6%的接种犬只达到充分血清转换，存在显著的免疫缺口。医院接种、单剂量瓶疫苗及绝育状态与更优的抗体应答相关，提示优化疫苗接种实践和动物管理对于加强狂犬病控制具有重要意义。

论文解读

一、研究背景与问题

狂犬病是由狂犬病毒属（Lyssavirus）RNA病毒引起的一种几乎100%致死的人畜共患疾病，主要影响包括人类在内的哺乳动物中枢神经系统。尽管该病可通过疫苗预防，但全球每年仍约有59,000人死于狂犬病，其中绝大多数病例发生在亚洲和非洲，且对15岁以下儿童影响尤为严重。尼泊尔是全球狂犬病年龄标准化发病率最高的国家之一，其狂犬病相关伤残调整生命年高达每10万人82年。仅在尼泊尔财政年度2080/81（即2023年7月中旬至2024年7月中旬），就报告了超过20万例人类动物咬伤病例，消耗约30万瓶狂犬病疫苗瓶，并确认至少14例狂犬病相关死亡。

犬咬伤是尼泊尔动物与人类间狂犬病传播的主要途径。犬只疫苗接种是狂犬病预防的基石，需达到70%以上的覆盖率才能阻断病毒传播。然而，尼泊尔目前缺乏全国范围内犬只狂犬病疫苗覆盖率的系统数据。流浪犬问题在尼泊尔主要城市十分严重，加之宠物犬主人在前暴露和后暴露预防中的依从性不足，实现70%的犬只接种覆盖率面临巨大挑战。此外，关于不同类型疫苗在田间条件下诱导血清转换的证据有限，缺乏抗体应答数据阻碍了对现行接种实践的评估和狂犬病控制策略的优化。因此，本研究旨在确定加德满都谷地已接种狂犬病疫苗犬只中与抗体应答相关的因素，为加强尼泊尔狂犬病消除工作提供证据支持。

二、研究设计与方法

本研究于2024年5月至9月间开展，研究对象包括在中央转诊兽医医院、私立兽医医院就诊的犬只以及加德满都谷地的家养犬只。纳入标准为外观健康、定期驱虫和接种疫苗、且距上次接种超过四周但不超过一年的犬只，接种史通过疫苗接种卡验证。研究共纳入106只犬只，其中56只（52.83%）为雄性，50只（47.17%）为雌性。血样采集后离心分离血清，采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）（Platelia? Rabies II，Bio-Rad）检测抗狂犬病病毒糖蛋白抗体，该检测方法报告特异性为98.6%，敏感性为88.8%。根据抗体水平将血清转换分为高水平（>4 EU/mL）、充分（0.5–4 EU/mL）和不足（<0.5 EU/mL）。数据分析采用SPSS 26软件，分别使用逻辑回归和线性回归模型识别与充分血清转换和抗体水平相关的因素。

三、研究结果

（一）样本基本特征与血清转换总体情况

在106只犬只中，61只（57.55%）在家中接种疫苗，45只（42.45%）在医院接种；54只（50.94%）使用多剂量瓶疫苗，52只（49.06%）使用单剂量瓶疫苗；55只（51.89%）未绝育，51只（48.11%）已绝育；年龄小于2岁的有27只（25.47%），2至7岁的有42只（39.62%），大于7岁的有37只（34.91%）；本地杂交品种65只（61.32%），外来品种41只（38.68%）。在106份样本中，28只（26.42%）表现出高水平血清转换，33只（30.19%）表现出充分血清转换，46只（43.40%）血清转换不足。因此，60只（56.60%）犬只表现出可能充分的血清转换，46只（43.40%）血清转换不足。

（二）单变量逻辑回归分析结果

单变量逻辑回归分析显示，充分狂犬病抗体水平的存在与疫苗接种场所（家中对比医院，p<0.001）、疫苗剂型（多剂量瓶对比单剂量瓶，p<0.001）和绝育状态（未绝育对比已绝育，p<0.001）显著相关。外来品种相较于本地杂交品种具有更高的保护性抗体水平几率（OR=2.22，95% CI：0.98–5.03，p=0.056）。动物性别（p=0.784）和年龄与抗体应答无显著关联。

（三）多变量逻辑回归分析结果

由于绝育状态与疫苗接种场所（r=?0.548，p<0.01）和疫苗剂量（r=0.604，p<0.01）高度相关，被排除在多变量逻辑回归模型之外。在最终多变量模型中，医院接种犬只比家中接种犬只更可能表现出充分血清转换（OR=8.79；95% CI：2.54–30.48；p<0.001）；接受单剂量瓶疫苗的犬只比接受多剂量瓶疫苗的犬只具有更高的充分抗体水平几率（OR=5.40；95% CI：1.76–16.57；p=0.003）；年龄大于7岁的犬只比小于2岁的犬只更可能具有充分血清转换（OR=4.51；95% CI：1.17–17.40；p=0.029）。品种在多变量模型中与抗体状态无独立关联。

（四）线性回归分析结果

单变量线性回归分析显示，疫苗接种场所、疫苗剂量、绝育状态和品种显著影响抗体水平（p<0.05），而性别和年龄不显著。多变量模型中，绝育状态（估计值=1.10；95% CI：0.38–1.82；p=0.003）和疫苗接种场所（估计值=?0.74；95% CI：?1.44至?0.04；p=0.040）与抗体水平独立相关，而疫苗剂量和品种不再显著。

四、讨论与结论

研究结果显示，加德满都谷地仅56.60%的已接种犬只具有充分的狂犬病抗体应答，43.40%缺乏充分血清转换，存在显著的免疫缺口。与先前研究中89.09%的血清转换率相比，本研究观察到的较低比例可能归因于样本采集时间距疫苗接种时间较长（平均125天，中位数79天），而既往研究表明抗体水平在接种后1至3个月间较高。

医院接种与更高的抗体产生和抗体水平显著相关，这可能与医院中疫苗在适当的冷链条件（2–8°C）下储存有关。冷链失败可导致抗原变性和佐剂降解，使疫苗生物失活。同时，医院接种由具备专业技能的兽医技术人员操作，而家中接种难以保证此类质量控制。

单剂量瓶疫苗与更高的抗体水平相关。多剂量瓶虽在低收入和中等收入国家具有降低成本的优势，但反复穿刺增加了微生物污染风险和环境暴露，可能损害疫苗完整性和免疫应答。单剂量瓶开封后立即使用并丢弃，降低了疫苗抗原不当处理的风险。

年龄效应在调整模型中显著，大于7岁的犬只比小于2岁的犬只具有更高的充分抗体水平几率。年轻犬只因缺乏先前抗原暴露而预期抗体应答较低，而老年犬只的抗体水平可能因免疫衰老而下降，但既往接种史可能直接影响抗体水平。

绝育犬只比未绝育犬只具有显著更高的充分抗体水平几率，与既往研究一致。这可能与生物学原因或绝育犬只家庭具有更好的养犬责任感有关，绝育犬只更可能在受控环境中饲养，接受定期兽医监督、及时接种、改善营养，并减少慢性应激源和传染源暴露，这些均对免疫能力和疫苗应答产生积极影响。

品种和生物性别与狂犬病抗体水平无显著关联，表明标准剂量疫苗可能足以在本地杂交品种和外来品种的两种性别犬只中诱导抗体应答。

研究结论指出，仅56.60%的犬只具有≥0.5 EU/mL的抗体水平，尽管接种疫苗仍有相当比例的犬只血清转换不足。疫苗接种场所、疫苗剂量、年龄和绝育状态与抗体应答及达到充分抗体水平的可能性显著相关。这些发现强调了正确接种实践和有效动物管理对确保犬只充分血清转换的重要性。观察到的免疫缺口构成显著公共卫生关注，凸显了加强该地区狂犬病控制措施、优化接种方案、改善兽医服务提供和实施针对性宣传活动的必要性。基于这些发现，采用医院接种环境和单剂量瓶制剂可能有助于支持最佳免疫应答，尽管仍需纵向或干预性研究确认因果关系。优先实施这些实践有助于提高血清转换率，支持实现有效狂犬病控制所需阈值的更广泛努力。