暹罗鳄（Crocodylus siamensis）肉蛋白水解物增强抗氧化活性并减轻卵清蛋白诱导哮喘大鼠气道病变

《Foods》：Siamese Crocodile (Crocodylus siamensis) Meat Protein Hydrolysate Enhances Antioxidant Activity and Attenuates Airway Lesions in Ovalbumin-Induced Asthmatic Rats

　　

过敏性哮喘（allergic asthma）涉及气道炎症、氧化失衡及结构损伤。本研究评估暹罗鳄（Crocodylus siamensis）肉蛋白水解物对卵清蛋白（OVA）诱导过敏性哮喘大鼠模型的血清抗氧化酶活性、血液学与生化参数及气道组织病理学的影响。将四十二只Sprague-Dawley大鼠分配至六组：健康对照组、未治疗哮喘组，以及分别以鳄肉蛋白水解物（100或200 mg/kg）、商品鸡精（100 mg/kg）和地塞米松（2.5 mg/kg）治疗的哮喘组。干预持续14天。测定摄食量、体重、血液学指标、血清生化参数及超氧化物歧化酶（SOD）与过氧化氢酶（CAT）活性，并对气管与肺组织病理学所见进行定性评估，未作推断性统计学比较。各组间摄食量无显著差异。与健康对照组或未治疗哮喘组相比，两种剂量水解物均未显著改变体重或多数所测血液学与生化参数。地塞米松与较低体重和血小板计数、中性粒细胞增多、淋巴细胞减少、丙氨酸与天冬氨酸氨基转移酶活性升高以及血清蛋白和脂质谱改变相关。两个水解物治疗哮喘组的SOD活性均高于未治疗哮喘组，而CAT活性在水解物治疗哮喘组中高于地塞米松组。既有组织病理学描述与代表性切片提示，水解物组的上皮损伤、炎症浸润、出血及血管改变较未治疗哮喘组为轻。这些定性观察未能确立统计学显著的组织学差异或剂量依赖性。水解物给药与血清SOD活性高于未治疗哮喘组相关，而定性组织病理学观察提示气道病变较轻。这些发现支持将该水解物作为潜在食品来源生物活性成分开展进一步临床前研究。然而，这些发现并未证实其对哮喘的疗效，未确立抗氧化反应介导了组织病理学观察结果，亦未证明其长期安全性。

研究背景方面，哮喘是全球最常见的慢性呼吸道炎症性疾病之一，估计影响3亿至4亿人，且在发展中国家发病率持续上升。其典型病理生理包括气道高反应性、肥大细胞脱颗粒、嗜酸性粒细胞浸润、杯状细胞化生及上皮下纤维化，由辅助性T细胞2（Th2）偏向的免疫反应驱动，并伴白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-13及免疫球蛋白E（IgE）等促炎细胞因子上调。同时，氧化应激可放大气道炎症与组织损伤，活性氧参与上皮损伤并维持炎症级联反应，进而导致气道结构性重塑。氧化失衡可伴随炎症过程与上皮损伤出现。SOD将超氧化物转化为过氧化氢，而CAT参与过氧化氢分解，其活性为酶促抗氧化防御提供互补信息，但血清测定不能直接量化肺内氧化损伤或抗氧化活性。目前一线药物管理依赖吸入性糖皮质激素与支气管扩张剂，然而长期或高剂量全身性糖皮质激素暴露存在下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴抑制、肝细胞损伤、高脂血症、肌肉萎缩、骨质疏松及继发性免疫抑制等显著风险。吸入性糖皮质激素是哮喘管理的基石，应将长期高剂量全身性糖皮质激素暴露的不良反应与吸入治疗的临床作用加以区分。因此，探究食品来源生物活性成分属于临床前研究策略，并不意味替代既定哮喘治疗。暹罗鳄（Crocodylus siamensis）是原产于东南亚的极危淡水爬行动物，在泰国被广泛商业养殖。除作为皮革和肉来源的经济价值外，鳄源产品在亚洲各文化传统医学中用于健康促进与免疫调节。既往对鳄油和肝提取物的研究考察了代谢与生物转化相关终点，但这些产品不同于肉蛋白水解物。对鳄肉来源肽的直接研究采用不同制备与测试方法报道了抗氧化活性；对血液成分和血红蛋白水解物的研究提供了鳄源生物活性物质的间接证据。暹罗鳄肉是优质蛋白的丰富来源，其酶解可产生具有强效抗炎和抗氧化特性的生物活性肽片段。尽管有轶事和民族药理学证据提示鳄源产品可能对呼吸系统疾病患者有益，但尚无严格的体内研究在验证过的哮喘模型中系统评估鳄肉肽提取物的安全性和有效性。本研究在建立的卵清蛋白（OVA）诱导Sprague-Dawley大鼠过敏性哮喘模型中，评估两种剂量鳄肉水解物（100和200 mg/kg）相对于未治疗哮喘对照组的作用，并纳入商品鸡精补充剂（100 mg/kg）作为动物源食品对照，地塞米松（2.5 mg/kg）作为药理对照。食品对照在未进行成分匹配的情况下不能分离物种特异性肽活性。研究人员假设水解物给药与较高的血清抗氧化酶活性及较轻的气道组织病理学损伤相关，目的是将这些终点与体重、摄食量及血液学和生化参数一并评估，这些发现可为暹罗鳄肉作为潜在食品来源成分的高值化提供可行策略。

研究人员开展的研究为：从持证商业设施获取鳄肉（蛋白含量20.11%），切片绞碎后按1:1（w/w）与蒸馏水混合，以3%（w/w酶与底物比）Amano 2SD于50 °C、中性pH下水解3 h，经中试规模篮式离心机相分离，获得淡黄色液体水解物，最终蛋白含量10.29 g/100 mL，水解度76.28%，SDS-PAGE显示分子量介于10至15 kDa。选用7周龄雄性Sprague-Dawley大鼠（200–250 g，n=42），饲养于12 h/12 h明暗周期、24±2 °C、55–60%相对湿度的聚碳酸酯笼中，自由摄食标准鼠粮与纯净水。所有实验程序遵循机构动物护理与使用伦理指南，经泰国Kasetsart大学机构动物护理与使用委员会（IACUC）批准（批准号ACKU66-VET-062；2023年6月6日批准）。研究仅纳入研究开始时7周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠，每组7只。限制单一性别与年龄可提供更均匀的实验群体，但结果不能假定适用于雌性大鼠或其他年龄组。大鼠随机分为六组（每组n=7）：正常对照组（C组）、OVA诱导哮喘对照组（A组）、OVA诱导哮喘以鳄肉蛋白水解物100 mg/kg治疗组（AC100组）、OVA诱导哮喘以鳄肉蛋白水解物200 mg/kg治疗组（AC200组）、OVA诱导哮喘以商品鸡精100 mg/kg治疗组（AB组）及OVA诱导哮喘以地塞米松2.5 mg/kg治疗组（AD组）。除C组外，所有组于第0天和第7天经腹腔注射1 mg OVA与200 mg氢氧化铝在1 mL无菌0.9% NaCl中的乳化液致敏；第14天至28天每日以雾化1% OVA溶液经雾化器激发30 min。鳄肉蛋白水解物或鸡精于雾化前30 min每日灌胃一次，连续14天。测量结局包括体重、摄食量、血液学指标、血清肝肾功能生化参数、脂质谱及血清SOD和CAT活性，并对气管与肺组织病理学所见进行定性评估。第29天以Tiletamine-Zolazepam（40 mg/kg；腹腔注射）处死所有动物，采集全血进行血液学分析，分离血清并保存于–20 °C用于生化测定，采集气管与肺组织用于组织病理学评价。血液学方面，使用自动血液分析仪测定白细胞计数、白细胞分类计数（中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）、红细胞计数、血红蛋白浓度、血细胞比容及血小板计数，制备血涂片并以Wright-Giemsa染色进行形态学评价。血清以3000 rpm、4 °C离心15 min分离，使用自动生化分析仪测定肝功能标志物包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、白蛋白和总蛋白，通过血清肌酐和血尿素氮（BUN）评估肾功能，采用酶比色法测定总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。抗氧化活性方面，以Bradford法测定血清总蛋白浓度，以牛血清白蛋白为校准标准，分光光度法测定血清CAT和SOD活性，归一化至血清总蛋白含量并以每毫克蛋白单位（U/mg protein）表示。CAT活性参照Mokhtari-Zaer等的方法并作轻微修改，基于CAT介导的过氧化氢分解，反应体系含1.95 mL 50 mM磷酸钾缓冲液（pH 7.0）、1.00 mL 10 mM H2O2和0.05 mL血清，终体积3 mL，加入过氧化氢启动反应，于240 nm连续记录吸光度下降3 min。SOD活性参照Radovanovi?等的方法并作轻微修改，基于SOD介导的肾上腺素自氧化生成肾上腺色素抑制，于26 °C、480 nm监测吸光度增加，一单位SOD活性定义为在规定测定条件下抑制肾上腺素自氧化50%所需的酶量。组织病理学方面，处死后采集气管与肺组织固定于10%中性缓冲福尔马林，常规处理、石蜡包埋、4 μm切片、苏木精-伊红（H&E）染色，由对实验分组不知情的委员会认证兽医病理学家进行组织病理学检查。气管检查包括上皮脱屑、纤毛丢失、黏膜下炎症细胞浸润及管腔出血；肺检查包括支气管周围和血管周围炎症细胞浸润、肺泡结构改变、肺泡出血、血管充血及水肿。结果以既有病理描述和代表性显微照片定性报告。可获得的记录无法核实每只动物检查的切片或显微视野数量，亦无法重建动物水平病变评分，修订期间未进行额外切片检查，因此未报告数值病变分级，描述性发现未用于估计病变频率、动物间变异或统计学显著的治疗效应。统计学方面，定量结局以均值±标准差汇总，采用Shapiro-Wilk检验评估分布正态性。对采用单因素方差分析（ANOVA）分析的结局，采用Tukey多重比较程序进行组间两两比较；对采用Kruskal-Wallis检验分析的结局，采用Dunn多重比较程序。p值小于0.05视为统计学显著。这些多重比较程序针对各终点内的组间比较，其本身并未控制全部所测结局的多重性。所有统计分析与图形呈现使用GraphPad Prism 8.0版（GraphPad Software，San Diego，CA，USA）完成。组织病理学发现以描述性方式呈现，未作推断性统计分析；动物水平序数评分和定量形态学测量无法获得，因此用于定量血液学和生化结局的统计程序未应用于组织病理学。

研究结果方面，第一，鳄肉水解物对体重和摄食量的影响：实验期间体重和摄食量见图1。在OVA致敏阶段（第1–14天），各组体重增长相似。在OVA激发和治疗阶段（第15–28天），对照组、未治疗哮喘组、AC100组、AC200组和鸡精组体重持续增加；相反，地塞米松治疗组体重进行性下降，第28天显著低于所有其他组（268.4±20.9 g；p<0.001）。实验结束时，对照组、未治疗哮喘组、AC100组、AC200组和鸡精组之间体重无显著差异（p>0.05）。摄食量在OVA致敏阶段各组相当，第7至14天略有增加；第21天OVA激发后多数组摄食量下降，第28天部分组部分恢复；未检测到显著总体治疗效应或治疗与时间交互作用（p>0.05）。因此，任一剂量鳄肉蛋白水解物给药相对于对照组或未治疗哮喘组均未显著影响体重或摄食量。第二，鳄肉蛋白水解物对血液学和血清生化参数的影响：各组总白细胞计数无显著差异（p>0.05）。AD组中性粒细胞百分比（83.7%±2.5%）显著高于所有其他组，淋巴细胞百分比（8.7%±2.4%）显著低于所有其他组（p<0.001）。红细胞计数、血红蛋白浓度、血细胞比容及单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞百分比各组无显著差异（p>0.05）。AD组血小板计数（617.8±184.7×103/μL）显著低于所有其他组（p<0.05），尽管均值仍在已报道参考范围内。在哮喘大鼠中，任一剂量鳄肉蛋白水解物相对于对照组或未治疗哮喘组均未显著改变所测血液学参数。血清生化参数方面，AD组ALT（502.1±164.8 U/L）和AST（832.1±502.2 U/L）活性显著高于所有其他组（p<0.0001）。AD组血清ALP活性显著低于对照组（p<0.05），而白蛋白和总蛋白浓度显著高于所有其他组（p<0.0001）。AC100和AC200组ALT和AST活性与对照组或未治疗哮喘组无显著差异（p>0.05）。AD组血清肌酐浓度低于所有其他组（p<0.05）。未治疗哮喘组、AC100组、AC200组和AB组BUN浓度显著高于对照组和AD组（p<0.0001）。AD组总胆固醇和HDL-C浓度亦显著高于所有其他组（p<0.0001）。LDL-C浓度各组无显著差异（p>0.05）。AC100和AC200组血清脂质参数与对照组和未治疗哮喘组相当。第三，鳄肉蛋白水解物对血清抗氧化酶活性的影响：AC100组（12.47±3.87 U/mg protein）和AC200组（9.41±3.80 U/mg protein）SOD活性显著高于未治疗哮喘组（3.15±2.70 U/mg protein）（分别为p<0.0001和p<0.001）；此外，AC100和AC200组SOD活性显著高于AB组（3.23±1.80 U/mg protein）和AD组（2.84±2.42 U/mg protein）（p<0.001）。CAT活性在AC100组（185.28±78.63 U/mg protein）和AC200组（156.39±30.88 U/mg protein）数值上高于对照组（115.96±32.54 U/mg protein）、未治疗哮喘组（123.72±11.13 U/mg protein）和AB组（112.34±21.57 U/mg protein），但差异无统计学显著性（p>0.05）；相反，AD组CAT活性显著低于AC100和AC200组（分别为p<0.0001和p<0.001）。第四，鳄肉蛋白水解物对气管和肺组织病理学的影响：对照组显示完整的纤毛假复层柱状上皮，无明显黏膜下炎症细胞浸润或管腔出血；未治疗哮喘组显示中度上皮脱屑、顶端纤毛丢失、黏膜下炎症细胞浸润及管腔出血，这些发现以定性方式呈现，未作定量病变评分或推断性统计比较。AC100和AC200组代表性气管切片显示轻度上皮脱屑或纤毛丢失，轻度黏膜下炎症细胞浸润仍明显，显示视野内未见管腔出血；AB和AD组显示中度上皮脱屑或纤毛丢失及黏膜下炎症细胞浸润，显示视野内未见明显管腔出血，AD组顶端纤毛丢失仍明显。总体描述性组织病理学提示图示AC100和AC200组气管病变较未治疗哮喘组轻，但未进行动物水平定量评估或推断性统计比较。肺组织方面，对照组显示保存的肺结构、完整细支气管上皮及保存的肺泡和血管形态，无明显病理性炎症浸润、肺泡出血、血管充血或水肿，亦观察到偶见形态符合肺泡巨噬细胞的细胞及支气管相关淋巴组织；未治疗哮喘组显示明显的支气管周围和血管周围炎症细胞浸润、肺泡结构破坏伴局灶性出血及血管充血和水肿，受影响区域可见炎症细胞；AC100组代表性切片显示肺泡结构相对保存，残留支气管周围或血管周围炎症浸润及血管充血或水肿，显示视野内未见肺泡出血；AC200组显示保存的肺泡和血管形态，炎症浸润不明显，显示视野内未见出血、充血或水肿；AB组显示支气管周围或血管周围炎症浸润、局灶性肺泡损伤或出血及血管充血或水肿；AD组显示肺泡结构相对保存，炎症浸润不明显，显示视野内未见明显血管充血或水肿。总体而言，两种水解物剂量均与未治疗哮喘组相比未引起体重或多数常规血液学和生化参数的显著差异；两个水解物组血清SOD活性较高，而CAT活性与未治疗哮喘组无显著差异；定性组织病理学观察提示气管和肺病变较轻，但未进行动物水平定量评估或统计比较；未治疗哮喘组和水解物组BUN浓度相对于健康对照组升高。

讨论部分总结：本研究表明，暹罗鳄肉蛋白水解物增强OVA诱导过敏性哮喘大鼠模型的血清抗氧化酶活性，并与较轻的气管和肺病变相关。所测两种水解物剂量相对于对照组或未治疗哮喘组均未引起体重或多数所测血液学、肝脏、肾脏和脂质参数的明显改变，尽管BUN浓度升高值得进一步研究。相反，地塞米松治疗与较低体重、中性粒细胞增多、淋巴细胞减少、血清转氨酶活性升高及蛋白和脂质谱改变相关。这些发现说明暹罗鳄肉蛋白水解物作为食品来源生物活性成分及过敏性哮喘潜在辅助干预手段的潜力，尚需纳入气道功能、炎症生物标志物、肽表征及有统计学效力的组织病理学分析的进一步研究以确认其疗效、安全性和作用机制。各组总白细胞计数无显著差异，表明任一剂量鳄肉蛋白水解物对循环白细胞数量未产生可检测效应；AC100和AC200组中性粒细胞和淋巴细胞百分比与对照组和未治疗哮喘组相当；相反，地塞米松治疗导致明显中性粒细胞增多（83.7%）和淋巴细胞减少（8.7%），为糖皮质激素诱导应激性白细胞图谱的特征，可能源于糖皮质激素介导的中性粒细胞边缘池动员和循环淋巴细胞再分布。外周白细胞谱本身不足以确立全身抗炎效应。外周嗜酸性粒细胞百分比各组均低且无显著差异，缺乏外周嗜酸性粒细胞增多可能反映采血时机、嗜酸性粒细胞从循环向气道组织再分布或SD大鼠模型及致敏方案特征。未治疗哮喘大鼠组织学可见支气管周围和血管周围炎症浸润，但未用差异染色或免疫组化确认这些浸润的细胞组成，因此仅凭这些组织病理学发现不能确立嗜酸性气道炎症。这种血液学调节模式与Cellat等观察一致，其证明天然酚类化合物酪醇显著抑制Wistar大鼠OVA诱导的白细胞增多并保持正常白细胞亚群比例，而地塞米松治疗诱导明显淋巴细胞减少；Mundo-Franco等亦报道蓝细菌天然色素C-藻蓝蛋白在Sprague-Dawley大鼠OVA诱导哮喘模型中减轻白细胞增多和组织髓过氧化物酶活性，实现了无甲泼尼龙所观察免疫抑制谱的免疫调节，与本研究中鳄提取物所展示的免疫调节益处密切平行。地塞米松组所观察的血液学和生化差异需谨慎解释：中性粒细胞和淋巴细胞比例本身不能确立绝对细胞数量或免疫功能变化；同样，转氨酶活性、白蛋白和脂质参数差异不足以确立特定机制或确认肝毒性，需额外靶向评估以确定其生物学和病理学意义；这些发现亦未确立水解物比地塞米松更安全。鳄提取物的保肝特征是本研究发现中最引人注目的之一。AD组血清ALT和AST水平（分别为502.1和832.1 U/L）超过对照值10倍以上，符合严重肝细胞坏死和潜在药物性肝损伤；AD组ALP反常抑制是啮齿类对糖皮质激素的特异性反应，由肠道和肝脏ALP同工酶下调介导。相反，AC治疗动物维持与健康对照统计学不可区分的肝酶谱。本研究未确立水解物的抗炎或保肝效应：未评估炎症细胞因子、炎症细胞活性、肝脏组织学和氧化损伤标志物；定性较轻的炎症浸润不能证明炎症通路抑制，血清生化发现本身不能确立肝脏保护；同样，较高血清SOD活性不直接证明组织氧化损伤减少。因此，抗炎和组织保护作用仍属需靶向研究的假设，而非对所观察发现的既定解释。本研究所观察的地塞米松诱导转氨酶活性升高程度与既往详述啮齿类皮质激素治疗肝毒性的研究一致。例如，Hassan等报道Wistar大鼠地塞米松给药导致ALT（+121%）和AST（+154%）活性显著升高，伴高脂血症和氧化应激，与本研究AD组所见密切吻合；Osman等进一步确认这种皮质激素诱导肝毒性模式，报道地塞米松治疗大鼠关键肝功能标志物包括转氨酶和血清白蛋白水平及白蛋白与球蛋白比值改变。相反，鳄提取物保肝作用的机制与Park等发现一致，其表明磷虾蛋白水解物组分（1–3 kDa）显著恢复酒精处理小鼠肝脏SOD、CAT和GPx活性，同时降低血清转氨酶水平，该模型伴随的组织病理学改善与本研究中AC治疗所观察的组织保护直接平行。这些发现支持以下假设：食品来源生物活性肽不论物种来源如何，均通过上调内源性抗氧化酶系统共享共同保肝机制。氧化失衡为研究食品来源肽在过敏性哮喘中的作用提供生物学依据，鉴于活性氧参与气道炎症和结构损伤。既往对鳄肉来源肽的研究报道了抗氧化活性，尽管其制备方法和实验条件与本研究不同；对鳄血液成分和血红蛋白水解物的研究涉及不同起始材料，不能直接确立本研究肉蛋白水解物的特性。本研究所用制剂的活性成分未表征，因此其生物学效应不能归因于特定肽或肽构效关系。本研究中两个水解物治疗组血清SOD活性高于未治疗哮喘组，然而CAT活性与未治疗哮喘组无显著差异，尽管高于地塞米松组。这些发现未证明整体抗氧化能力恢复或肺组织内氧化损伤减少。水解物治疗组亦描述气道病变较轻，但组织病理学发现为定性，且无动物水平定量比较支持。同一治疗组中较高血清SOD活性与看似较轻病变的同时出现代表描述性共存，而非已证明的动物水平相关性或因果关系；未进行中介分析或抗氧化通路的实验性调控。因此，抗氧化反应仍是需进一步研究的可能解释，而非已确立的组织保护机制。需直接测量肺氧化损伤、定量组织病理学及检验抗氧化通路参与的实验以确定这些反应是否促成气道损伤的任何减轻。Phosri等报道暹罗鳄血液成分包括血红蛋白、粗白细胞提取物和血浆在多种自由基清除试验中表现显著抗氧化能力，并通过减少脂多糖刺激RAW 264.7巨噬细胞一氧化氮和IL-6产生展示抗炎活性。在肽水平，Yang等从木瓜蛋白酶消化的暹罗鳄肉水解物中分离出四种抗氧化肽，包括VPPHIY和RNGLPGPIGPAG，其半数自由基清除活性（IC50）在1.0 mg/mL时与抗坏血酸相当，其中<3 kDa组分效力最高；Song等最近通过虚拟筛选和生物信息学从暹罗鳄肌原纤维蛋白天然蛋白酶水解物中鉴定出八种新型抗氧化肽，进一步确认该物种作为抗氧化肽来源的潜力；Lueangsakulthai等证明暹罗鳄血红蛋白胃蛋白酶水解物产生抗氧化和抗炎肽，水解2 h后分离的肽组分显著降低脂多糖刺激巨噬细胞IL-6、IL-1β和PGE2产生，鉴定出的活性序列包括KIYFPHF、SAFNPHEKQ和IIHNEKVQAHGKKVL。这些研究共同为本研究中鳄提取物所观察的抗氧化和抗炎活性建立明确机制基础，将既往报道的体外生物活性延伸至体内哮喘模型。组织病理学发现印证了生化和血液学数据。在AC治疗动物的气管和肺组织中，过敏性气道疾病的标志特征即上皮脱屑、炎症细胞浸润、血管充血和杯状细胞增生相对于未治疗哮喘组一致减轻。AC100和AC200治疗动物纤毛上皮完整性的部分保存尤其值得注意，因为纤毛对黏液纤毛清除至关重要，其丢失是哮喘气道重塑的关键早期步骤。尽管地塞米松引起深刻免疫抑制效应，但未完全消除气管或肺组织的结构改变，此结果凸显单独全身抗炎治疗策略的明显局限性。值得注意的是，鳄提取物通过联合抗炎和组织保护通路在血液学和组织病理学终点上产生更广泛、更一致的防护。还值得注意的是，商品鸡精（100 mg/kg）给药引起与较低剂量水解物组（AC100组）大致相当的中间防护效应，而将水解物剂量增至200 mg/kg（AC200组）产生优于AC100和AB组的抗氧化指标和较低病变评分，此结果提示暹罗鳄肌肉蛋白水解物的特定氨基酸组成和生物活性肽谱在较高浓度下比标准鸡精提供更大治疗益处。这些组织病理学结果与使用OVA诱导哮喘啮齿类模型的类似天然产物干预研究报告密切一致。Shakerinasab等证明豆瓣菜水醇提取物显著减轻OVA致敏Wistar大鼠气道炎症细胞浸润、杯状细胞增生和氧化应激标志物，肺SOD和GPx活性相对于未治疗模型动物结局显示实质性保存，与本研究中AC组所观察的组织病理学和生化改善密切对应；同样，Kim等报道中国木瓜和Saururus chinensis组合提取物显著减少OVA处理小鼠气道炎症细胞浸润和黏液高分泌，同时抑制肺组织IL-4、IL-5、IL-13和诱导型一氧化氮合酶表达，这些效应在机制上类似于归因于AC水解物通过其肽的抗氧化和抗炎活性所产生的效应。脂质和代谢数据进一步证实AC水解物良好的安全性特征。糖皮质激素诱导的高脂血症以AD组总胆固醇和HDL-C浓度增加2.5倍和近3倍为例，是类固醇治疗公认的代谢后果，与心血管风险增加相关。鳄水解物治疗组维持与对照相当的胆固醇稳态，符合中性或潜在有利的代谢影响。BUN在未治疗哮喘以及两个水解物组和鸡精组中相对于健康对照升高，此模式未识别出水解物特异性效应；模型相关氮代谢改变、蛋白摄入差异、分解代谢过程或水合状态是可能解释，但未通过实验确立，这些发现未表明肽补充是原因。水解物组肌酐未变不能排除肾脏受累，缺乏尿液测量和肾脏组织学限制了解释。因此，在声称良好安全性特征之前，BUN升高需进一步研究。AD组所检测的代谢扰动与Malkawi等描述的机制框架一致，其记录地塞米松治疗大鼠表现高血糖、血清脂质改变和总血清ALP显著降低，伴反映糖异生和蛋白分解加速的独特代谢组学谱。本研究所记录的地塞米松诱导血脂异常模式以总胆固醇和HDL-C水平均升高为特征，与Reaven等描述的双峰脂蛋白扰动模式一致，其中高剂量糖皮质激素给药产生血清胆固醇和HDL-C浓度加倍，同时伴肝脏脂生成激活。相反，鳄提取物的代谢中性与其他食品来源蛋白水解物的已发表数据一致。Nawaz等证明膳食补充具有高抗氧化活性的发酵鸡肉蛋白水解物对雄性Wistar大鼠脂质谱、肝酶或肾脏参数无不良影响，此发现与本研究中鳄水解物所观察的安全性特征一致，进一步提供食品级动物蛋白水解物代表代谢安全干预剂的证据。本研究若干局限性值得承认：OVA诱导哮喘啮齿类模型虽经广泛验证，但不能完全重现人类哮喘复杂的免疫和结构异质性，尤其是日益牵涉重症的 neutrophilic 和混合粒细胞内型；此外，本研究未在分子水平完全表征肽组分，未来采用LC-MS/MS肽组谱分析的工作对鉴定负责所观察效应的特定生物活性序列及实现构效优化至关重要；另外，测量关键Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13、IL-33）、IgE和气道高反应性指标将大幅增强后续研究的机制解释；同样，缺乏支气管肺泡灌洗液（BALF）分析妨碍直接量化气道嗜酸性粒细胞增多和炎症细胞分类，而这些是该模型中确认局部过敏性气道炎症的关键终点；后续研究应纳入BALF细胞学以及Th2细胞因子和IgE谱分析以提供全面免疫学表征。本研究存在若干局限性：水解物未经肽测序或全面分子量谱表征；未测量气道功能、BALF细胞分类、IgE、Th2细胞因子和直接氧化损伤标志物；组织病理学评分为描述性且缺乏推断性比较；商品食品对照在未进行成分匹配情况下亦限制解释；组成肽的胃肠道稳定性、吸收和生物利用度仍未知。这些局限性支持对所观察血清SOD和组织病理学发现作谨慎解释，而非视为已证明的治疗干预。结论部分翻译：暹罗鳄（C. siamensis）肉蛋白水解物与OVA诱导哮喘大鼠较高血清SOD活性相关，而CAT与未治疗哮喘组无显著差异；定量组织病理学观察提示气道病变较轻。然而，由于缺乏动物水平定量组织病理学和机制证据，组织保护及其与抗氧化反应的因果关系仍未确认。多数所测血液学和生化参数与未治疗哮喘组无显著差异，但BUN浓度升高值得进一步研究。在本研究条件下，地塞米松与多种血液学和生化改变相关。进一步研究应使用LC-MS/MS表征候选生物活性物质并进行功能验证，评估生物利用度，并纳入定量组织病理学、肺氧化和炎症终点及气道功能测量。这些发现支持对该水解物开展进一步临床前研究，而其机制、疗效和安全性仍有待确立。