骨髓增殖性肿瘤（MPN）是以髓系血细胞过度生成为特征的慢性血液系统疾病。Janus激酶（JAK2）V617F是最常见突变，但相当比例患者携带钙网蛋白（CALR）突变，该突变是新兴免疫治疗的有吸引力靶点。自然杀伤（NK）细胞在清除恶性细胞中起核心作用，而MPN患者NK细胞活性降低，因此重建其功能或可改善预后。研究人员证实，CALR突变小鼠模型中NK细胞成熟正常但脱颗粒增强；一致地，CALR突变患者NK细胞脱颗粒能力保留且优于JAK2突变患者。值得注意的是，CALR突变而非JAK2突变患者的NK细胞高表达免疫检查点TIGIT（T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains），这可能源于血浆中免疫调节蛋白丰度增加。此外，MPN患者CD34+细胞高表达TIGIT配体CD112（PVRL2）。TIGIT阻断在移植小鼠模型中可降低血小板数量。上述发现提示，CALR突变MPN中的NK细胞处于激活态，但在接触TIGIT配体表达靶细胞时功能受限，为探索TIGIT阻断以恢复该疾病亚型NK细胞免疫提供了有力依据。
研究背景与问题提出
骨髓增殖性肿瘤（MPN，myeloproliferative neoplasms）是一组以成熟髓系血细胞过度增殖为特征的慢性血液系统恶性肿瘤，主要包括真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）与骨髓纤维化（MF）。其核心驱动突变集中于JAK2、CALR（calreticulin，钙网蛋白）与MPL，均导致JAK（Janus kinase，Janus激酶）—STAT（signal transducer and activator of transcription，信号转导及转录激活因子）信号组成性激活。现有JAK抑制剂可改善症状，但难以实现疾病修饰或治愈，且存在白血病转化风险。既往研究多将MPN免疫紊乱归因于JAK2突变背景，对CALR突变亚型的固有免疫特征认识不足。NK细胞（natural killer cell，自然杀伤细胞）是清除病毒感染与转化细胞的关键效应细胞，MPN中NK功能受损且芦可替尼（ruxolitinib）进一步抑制其活性，但CALR突变环境下NK细胞是否真正“无能”尚不明确。该研究据此提出：需区分驱动突变类型，解析CALR突变MPN中NK细胞的表型、功能约束与可成药免疫检查点。
研究人员通过开展CALR突变小鼠模型与MPN患者队列联合分析，结合转录组、蛋白组、流式免疫表型与体内阻断实验，得出核心结论：CALR突变环境中NK细胞并非发育缺陷，而是呈现激活态NK3样表型、脱颗粒潜能保留，但被TIGIT（T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains，T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域抑制性受体）检查点反向钳制；恶性CD34+细胞高表达CD112（PVRL2）配体，形成“激活—受限”免疫逃逸轴；抗TIGIT阻断可恢复NK杀伤并降低移植模型血小板负荷。该发现为CALR突变MPN的精准免疫治疗提供了新靶点逻辑。
主要关键技术方法
研究采用CALRDEL/DEL敲入小鼠与NSG移植模型，结合抗NK1.1耗竭与抗TIGIT体内阻断；患者样本来源于成人MPN队列（CALR与JAK2突变ET/MF患者）及健康供体白细胞减除滤袋，分离PBMC与血浆；方法上整合流式细胞术（脱颗粒标记CD107a、检查点受体谱）、分选NK细胞批量RNA测序与GSEA（gene set enrichment analysis，基因集富集分析）、血浆非偏倚质谱蛋白组与Luminex多重细胞因子检测、体外NK—靶细胞共培养特异性裂解评估，并以已发表MPN转录数据验证配体表达。
突变CALR细胞上清可诱导NK92与原代NK上调TIGIT；血浆蛋白组显示S100家族与半乳凝素富集，Luminex证实IL-18升高。S100A8/A9处理原代NK可轻度诱导TIGIT，串联分析指向S100—TLR4—MyD88/IRAK/NF-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells）—TIGIT调控线索，说明可溶性微环境因子塑造检查点表型。
