摘要
谷氨酸脱羧酶（GAD）催化γ-氨基丁酸（GABA）的生成，是植物GABA代谢途径中的核心酶。在Morex V3大麦参考基因组中鉴定出了六个HvGAD基因，并对其系统发育、基因结构、保守 motifs、染色体分布以及启动子顺式作用元件进行了研究。通过结合公共转录组数据与 reverse transcription quantitative PCR (RT-qPCR) 分析，在干旱、盐胁迫和寒冷胁迫条件下筛选出对这些胁迫广泛响应的基因成员，并探讨了HvGAD1基因表达与叶片GABA含量之间的关系。结果显示，HvGAD1基因表达在多种胁迫条件下均较为活跃。pearson相关性分析表明，在汇总数据以及干旱和寒冷胁迫条件下，HvGAD1基因表达与GABA含量之间存在正相关，但在调整处理时间和采样时间后这种相关性不再显著。利用重组的HvGAD1蛋白制备了多克隆抗体，该抗体能够检测并富集大麦组织中的HvGAD免疫反应蛋白。通过免疫沉淀-质谱（IP-MS）分析，鉴定出六个共富集的候选蛋白，包括胞质天冬氨酸氨基转移酶、可能的丝氨酸乙酰转移酶5以及一种类似Annexin D7的蛋白。这些发现支持将HvGAD1作为进一步研究大麦GABA代谢和非生物胁迫响应功能的候选基因。该抗体以及共富集的六个蛋白为后续的蛋白质水平研究提供了重要资源。
