《Sci》：Integrated Proteomic Profiling of Gingival Crevicular Fluid and Tooth Surface-Collected Material Reveals Potential Inflammatory Signatures in Periodontitis Post-Therapy: An Exploratory Study
编辑推荐：
背景：表征牙周炎（Periodontitis, PD）的分子微环境对于鉴定无创生物标志物至关重要。本研究比较了全身健康个体与PD患者在非手术牙周治疗（Non-Surgical Periodontal Therapy, NSPT）前后，牙龈沟液（Gingival
背景：表征牙周炎（Periodontitis, PD）的分子微环境对于鉴定无创生物标志物至关重要。本研究比较了全身健康个体与PD患者在非手术牙周治疗（Non-Surgical Periodontal Therapy, NSPT）前后，牙龈沟液（Gingival Crevicular Fluid, GCF）与牙面采集材料（Tooth Surface-Collected Material, TSCM）的总蛋白含量及定性蛋白质谱。方法：在基线（T0）与NSPT后3个月（T1），从20名全身健康受试者（10名健康对照与10名III–IV期PD患者）采集GCF与TSCM样本；对照组与PD组未行年龄与性别匹配。PD患者中GCF采自健康位点与病理位点。总蛋白浓度通过Bradford法定量，差异SDS-PAGE条带经LC-MS/MS分析合并池样本。结果：NSPT显著改善临床牙周参数（p < 0.05）。PD患者总蛋白浓度高于对照（p < 0.05）。基线分析显示差异蛋白模式，病理GCF与TSCM中鉴定出急性期与免疫相关蛋白；NSPT后这些改变明显减弱，并出现组织保护与稳态相关蛋白。PD患者健康位点亦呈现独特蛋白谱，提示存在亚临床炎症状态。结论：GCF与TSCM整合蛋白质组学为PD及相关治疗反应提供了分子改变的探索性证据；鉴于样本量小、未匹配及合并池设计，需进一步验证以评估其未来用于PD管理的潜力。
研究背景与立项依据
牙周炎（Periodontitis, PD）是一种慢性、多因素的炎症性疾病，特征为牙支持组织进行性破坏。当前诊断依赖探诊袋深度（Probing Pocket Depth, PPD）、临床附着水平（Clinical Attachment Level, CAL）和探诊出血等临床参数，这些指标主要反映组织破坏的累积后果，难以捕捉疾病活动度与治疗反应的分子层面信息。因此，寻找能补充常规评估的分子生物标志物成为研究热点。在可用生物基质中，牙龈沟液（Gingival Crevicular Fluid, GCF）为血清来源的炎症渗出液，反映局部宿主反应；牙面采集材料（Tooth Surface-Collected Material, TSCM）则为从牙面与龈缘机械采集的异质材料，包含生物膜、唾液蛋白、脱落上皮细胞、炎症渗出与细胞外基质成分，可提供互补信息。非手术牙周治疗（Non-Surgical Periodontal Therapy, NSPT）是标准非手术治疗，但GCF与TSCM在同一研究中的直接比较有限，治疗后的蛋白重塑及“临床健康位点是否也存在分子异常”尚不清楚。为此，研究人员开展本研究，旨在比较健康人与PD患者治疗前后两种基质的蛋白谱，探索疾病相关及疗效相关的分子特征。
研究设计与关键技术方法
研究人员在意大利摩德纳大学医院招募20名18–70岁、非吸烟、无系统疾病的受试者，分为健康组（H组，n=10）与III–IV期PD组（P组，n=10），两组未做年龄性别匹配。基线（T0）采集所有受试者GCF与TSCM；P组接受NSPT后3个月（T1）复采。GCF中健康位点（HS，PPD≤3 mm无出血）与病理位点（PS，PPD≥6 mm）分别采样；TSCM在健康人HS及PD患者PS对应位点采集，并于T1同位点复采。总蛋白用Bradford法定量；为获得足够蛋白量，GCF先个体定量再等蛋白量合并为3个独立池，TSCM因产量低直接合并为3个池。差异蛋白经SDS-PAGE分离与密度分析，切胶后由nano-UHPLC-MS/MS（Orbitrap）鉴定，数据库比对人SwissProt。统计用t检验，p<0.05为显著。
研究结果
3.1 研究人群特征
P组经NSPT后全口菌斑评分、出血评分、平均PPD与CAL均显著下降，证实治疗有效。
3.2 总蛋白含量
GCF中PD组总蛋白显著高于健康组，HS与PS间无差异；TSCM中PD组基线高于健康组，治疗后下降但仍高于健康组。说明炎症状态提升局部蛋白渗出，治疗可减轻但未完全恢复正常。
3.3 电泳蛋白谱与密度分析
GCF识别出10个差异条带，TSCM识别出3个重叠条带（#2、#5、#7）。基线PS相对健康对照有升有降，涉及急性相、免疫、应激与代谢相关蛋白；NSPT后炎症相关条带下调，组织保护相关增强。PD患者HS也呈现不同于完全健康人的谱型。
3.4 质谱蛋白鉴定
条带鉴定出补体C3、α2-巨球蛋白、乳过氧化物酶、乳铁蛋白、热休克蛋白70、免疫球蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serpin）家族、厌氧代谢酶（ENO1、GAPDH、LDHA等）以及抗氧化蛋白（PRDX1/6、SOD2、GSTP1）。功能覆盖天然免疫、抗菌、氧化应激、蛋白稳态、细胞骨架重塑与能量代谢。
讨论与结论翻译
讨论指出，GCF与TSCM共享部分分子签名，反映可溶性液相与表面吸附相的持续交换；临床“健康位点”仍存在氧化应激与炎症适应性蛋白，提示亚临床炎症场效应。NSPT后急性炎症蛋白减少，但抗氧化与应激蛋白持续检出，说明组织修复是延续过程。研究局限为样本小、未匹配、池化定性分析、随访仅3个月且无多重校正。
结论：本研究提供初步证据，GCF与TSCM呈现区别但部分重叠的蛋白谱，关联牙周健康、PD及治疗变化。PD患者的临床健康位点显示有别于完全健康者的蛋白谱，提示PD相关分子差异可超出肉眼病变位点。基于池样本的定性LC-MS/MS结果属探索性，尚不能评估单体蛋白丰度与通路激活。GCF与TSCM的互补价值需在更大规模、个体样本、定量验证与更长随访中确认。
