《Molecular Pain》：Electroacupuncture alleviates TNBS-induced visceral pain and modulates cortical EEG rhythms in association with TREM1/DAP12 pathway inhibition: Enhanced effects with pharmacological TREM1 blockade
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背景：炎症性肠病（IBD）中的内脏痛缺乏有效疗法。TREM1/DAP12通路是否与电针（EA）镇痛及皮层脑电图（EEG）调控相关尚不清楚。目的：确定脊髓TREM1/DAP12是否与EA在2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的内脏痛中的镇痛及神经调控效应相关
背景：炎症性肠病（IBD）中的内脏痛缺乏有效疗法。TREM1/DAP12通路是否与电针（EA）镇痛及皮层脑电图（EEG）调控相关尚不清楚。目的：确定脊髓TREM1/DAP12是否与EA在2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的内脏痛中的镇痛及神经调控效应相关。方法：雄性Sprague-Dawley大鼠经TNBS诱导结肠炎后，接受EA（ST36/ST37）、TREM1抑制剂Nangibotide或二者联合干预。评估行为学指标（缩足阈值PWT、结直肠扩张CRD、疾病活动指数DAI）、脊髓TREM1/DAP12、下游炎症介质及小胶质细胞共定位。皮层EEG采用归一化功率谱密度（Normalized PSD，%）分析。结果：EA显著缓解内脏/牵涉性痛觉过敏并降低DAI评分（P < 0.05）。TNBS上调脊髓TREM1、DAP12、TNF-α、NLRP3和TLR4并增加TREM1/DAP12与小胶质细胞共定位（P < 0.0001），均被EA逆转（P < 0.001）。单用Nangibotide部分模拟EA效应，二者联合产生更强的镇痛及分子抑制作用（P < 0.05）。归一化EEG分析显示，TNBS增加δ功率（P < 0.0001）并降低θ和β功率（P < 0.001）。值得注意的是，EA和Nangibotide特异性逆转δ升高并恢复θ功率（P < 0.05），而不改变β功率（P > 0.05），联合治疗对δ的抑制强于任一单独治疗（P < 0.0001）。结论：EA缓解TNBS内脏痛并使皮层δ/θ节律紊乱正常化，这些效应与抑制小胶质细胞TREM1/DAP12神经炎症相关。药理学TREM1阻断可模拟并增强EA效应，支持该通路作为内脏痛的有前景治疗靶点。
炎症性肠病（IBD）相关内脏痛是临床常见症状，严重影响患者生活质量，但现有药物治疗个体差异大且副作用显著，亟需安全有效的替代疗法。电针（EA）作为传统中医疗法在多种疼痛治疗中广泛应用，但其在IBD相关内脏痛中的具体机制尚未完全阐明。近年研究表明，髓系细胞触发受体1（TREM1）与跨膜接头蛋白DAP12结合后可激活下游NF-κB、SYK及NLRP3/caspase-1等信号通路促进炎症反应，而TREM1/DAP12通路在脊髓水平与内脏痛及EA镇痛的关系尚不清楚。基于此，研究人员旨在探究TREM1/DAP12通路在EA治疗TNBS诱导的内脏痛大鼠模型中的作用，并考察EA对皮层脑电图（EEG）节律的影响。
研究人员采用TNBS诱导的SD大鼠内脏痛模型，设置EA（ST36/ST37）、TREM1抑制剂Nangibotide（鞘内注射，5 mg/kg）及联合干预组，通过行为学测试（PWT、CRD阈值、DAI评分）、Western blot、免疫荧光双标及皮层EEG记录等多层次手段进行评估。研究得出以下主要结论：EA可显著缓解TNBS模型大鼠的内脏痛觉过敏和机械性痛觉过敏，降低DAI评分；EA抑制脊髓TREM1、DAP12及下游炎症介质TNF-α、NLRP3、TLR4的表达，并减少TREM1/DAP12与脊髓IBA1阳性小胶质细胞的共定位；Nangibotide单用可部分模拟EA效应，联合使用产生更强的镇痛和分子抑制效果；TNBS诱导的皮层δ功率增强和θ功率降低被EA和Nangibotide逆转，联合治疗对δ振荡的抑制效果更佳。该研究首次系统揭示TREM1/DAP12通路与EA镇痛及中枢神经调控效应的关联，为内脏痛的临床治疗提供了新的理论依据和潜在联合治疗策略。
在技术方法上，研究人员主要采用：TNBS经结肠灌注诱导内脏痛模型（雄性SD大鼠，180–200 g）；双侧ST36/ST37穴位电针刺激（1 mA，疏密波，每日一次，连续7天）；鞘内注射TREM1抑制剂Nangibotide（5 mg/kg，建模后第1、3、5、7天各一次）；行为学评估包括von Frey纤维丝测定PWT、结直肠扩张阈值测定及DAI评分；Western blot检测脊髓L6–S1段TREM1/DAP12通路及下游炎症蛋白表达；免疫荧光双标检测TREM1/DAP12与IBA1的共定位；皮层EEG电极植入及清醒状态功率谱密度分析。
研究结果如下：
3.1 EA改善TNBS模型大鼠疼痛行为及一般状况——通过行为学测试发现，TNBS组PWT和CRD阈值显著降低、DAI评分显著升高，模型建立成功；EA干预后PWT回升、DAI降低、CRD阈值自第5天起显著升高，假电针组与TNBS组无显著差异，证实EA的镇痛效应源于电刺激本身而非针刺或束缚等非特异性因素。
3.2 EA抑制TNBS模型大鼠脊髓TREM1/DAP12及炎症蛋白表达——通过Western blot检测发现，TNBS组脊髓TREM1、DAP12、TNF-α、NLRP3、TLR4蛋白表达显著上调，EA干预后上述蛋白表达显著下调，假电针组无显著变化，表明EA抑制TNBS诱导的TREM1/DAP12通路激活及后续炎症反应。
3.3 EA减少TREM1/DAP12与脊髓小胶质细胞的共定位——通过免疫荧光双标发现，TNBS组TREM1/IBA1和DAP12/IBA1共定位百分比显著升高，提示TNBS诱导脊髓小胶质细胞中TREM1信号异常激活；EA干预7天后共定位显著降低，假电针组无显著变化，证实抑制效果特异性归因于电刺激。
3.4 Nangibotide增强EA诱导的行为学改善——通过四组比较（TNBS、TNBS+Nangibotide、EA+Vehicle、EA+Nangibotide）发现，Nangibotide单用可显著提高PWT和CRD阈值、降低DAI评分，部分模拟EA效应；EA+Nangibotide组在各行为学指标上均表现最优，显著优于任一单独治疗，提示联合干预产生更强镇痛效果。
3.5 Nangibotide增强EA诱导的TREM1/DAP12及炎症蛋白表达下调——通过Western blot发现，Nangibotide单用或EA单用均显著下调TREM1、DAP12、TNF-α、NLRP3、TLR4表达；EA+Nangibotide组对TREM1、DAP12、TNF-α和TLR4的抑制显著强于EA+Vehicle组，但NLRP3在两组间无显著差异，提示NLRP3调控与TREM1/DAP12轴的偶联程度可能低于其他分子。
3.6 Nangibotide增强EA对脊髓小胶质细胞TREM1/DAP12表达的抑制——通过免疫荧光双标发现，Nangibotide单用显著降低TREM1/IBA1和DAP12/IBA1共定位，EA+Vehicle组同样显著降低；EA+Nangibotide组共定位进一步显著低于EA+Vehicle组和TNBS+Nangibotide组，表明Nangibotide可放大EA对小胶质细胞TREM1/DAP12信号的抑制作用。
3.7 EA调控TNBS内脏痛大鼠EEG节律并与TREM1/DAP12通路相关——通过归一化功率谱密度分析六个组别发现，TNBS组δ功率显著升高、θ和β功率显著降低，α和γ功率无显著变化；EA+Vehicle组δ功率显著降低、θ功率显著恢复，假电针组无显著变化；Nangibotide单用同样抑制δ升高并恢复θ功率；EA+Nangibotide组对δ功率的抑制显著优于EA+Vehicle组和TNBS+Nangibotide组，但θ功率的恢复在EA+Nangibotide组与EA+Vehicle组间无显著差异，提示δ和θ振荡的调控机制可能存在差异。
讨论部分总结：本研究首次系统探究TREM1/DAP12信号通路在EA治疗TNBS诱导的内脏痛中的作用。主要发现包括：EA显著改善内脏痛觉过敏和全身症状；EA抑制脊髓TREM1、DAP12及下游炎症介质表达；EA减少TREM1/DAP12在脊髓小胶质细胞的异常共定位；Nangibotide单用部分模拟EA效应，联合使用产生更强效果；EA和Nangibotide均逆转TNBS诱导的δ振荡增强和θ功率降低。值得注意的是，EA与Nangibotide联合的增强效应并不支持EA仅通过抑制TREM1/DAP12单一通路发挥作用的观点——若二者仅作用于同一可饱和通路，应观察到闭塞效应而非增强效应，因此TREM1/DAP12抑制是EA整体镇痛效应的重要组成部分，但EA可能还涉及其他平行机制。NLRP3在EA+Nangibotide与EA+Vehicle组间无显著差异，可能反映EA主要影响NLRP3的翻译后或组装水平而非转录水平。EEG结果提示TREM1/DAP12相关脊髓神经炎症可能通过上行脊髓丘脑通路影响丘脑皮层节律性，从而调控异常δ振荡。研究局限性包括：缺乏50%乙醇溶剂对照组；药理学抑制而非基因敲除手段；假电针不能完全排除针刺非特异性效应；仅使用雄性大鼠；抗生素预防可能影响肠道菌群。
结论部分翻译：综上所述，这些研究结果表明，EA抑制TNBS诱导的内脏痛中脊髓TREM1/DAP12表达及下游神经炎症。药理学抑制TREM1部分重现EA的镇痛和神经调控效应，联合治疗产生更大改善，提示TREM1/DAP12通路是EA作用机制的重要组成部分。然而，联合治疗观察到的增强效应也提示，除TREM1/DAP12信号外，其他机制可能与EA的整体效应相关。总之，本研究确定TREM1/DAP12通路作为内脏痛的有前景治疗靶点，并支持EA与TREM1抑制剂的联合应用。
