SPINK2基因敲低可抑制MLL–MLLT3重组的THP-1细胞的增殖并促进细胞死亡

《Histochemistry and Cell Biology》：SPINK2 knockdown reduces proliferation and promotes cell death in MLL–MLLT3-rearranged THP-1 cells

　　

摘要

急性髓系白血病（AML）是一种由多种遗传和细胞遗传学改变驱动的异质性血液系统恶性肿瘤。据报道，丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型2（SPINK2）在AML中过度表达，并与不良临床结局相关；最新研究表明，SPINK2参与调控白血病细胞的增殖、分化以及铁死亡相关通路；然而，其在MLL-MLLT3重排型AML细胞中的功能作用仍不完全清楚。本研究旨在探讨SPINK2敲低对MLL-MLLT3重排型人类单核细胞白血病（THP-1）细胞存活率和细胞死亡的影响。通过使用SPINK2 shRNA进行慢病毒转导来实现SPINK2的敲低。细胞增殖情况通过MTT检测评估，细胞凋亡情况通过流式细胞术检测。利用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）分析SPINK2及相关基因的表达水平，通过Western印迹法测定蛋白质表达水平，并通过透射电子显微镜（TEM）观察亚细胞形态变化。抑制SPINK2的表达导致细胞存活率显著下降。然而，Western印迹和RT-qPCR的结果并不支持Caspase-3激活或铁死亡是细胞死亡的主要机制。这些发现表明，SPINK2敲低会降低细胞存活率，并与MLL-MLLT3重排型THP-1细胞中细胞死亡增加及自噬相关的超微结构变化有关。需要进一步使用其他AML模型和特异性通路功能检测来确定细胞死亡的根本机制及其广泛意义。