《Journal of Biochemical and Molecular Toxicology》：Exosomal circ_0000387 Is Associated With Ovarian Cancer Metastatic Regulation Through IGF2BP3-Related Signalling and Endothelial VWF Responses
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研究人员通过环状RNA（circRNA）测序分析配对原发性与转移性卵巢癌组织，以鉴定与转移相关的circRNA。在SKOV3细胞中开展功能获得与功能缺失实验评估恶性表型，并采用RNA反义纯化（CHIRP）与RNA免疫沉淀（RIP）探究circ_0000387与
研究人员通过环状RNA（circRNA）测序分析配对原发性与转移性卵巢癌组织，以鉴定与转移相关的circRNA。在SKOV3细胞中开展功能获得与功能缺失实验评估恶性表型，并采用RNA反义纯化（CHIRP）与RNA免疫沉淀（RIP）探究circ_0000387与胰岛素样生长因子2信使RNA结合蛋白3（IGF2BP3）的相互作用。外泌体经分离与表征后，通过SKOV3-内皮细胞共培养实验评价外泌体相关对内皮血管性血友病因子（VWF）反应及肿瘤细胞行为的影响。腹腔播散小鼠模型用于体内验证。结果显示：circ_0000387在转移性组织中高表达；细胞内circ_0000387与IGF2BP3互作，经AKT活化、AMPK抑制及YAP核积聚促进增殖、侵袭与迁移。相反，富含circ_0000387的外泌体增加内皮VWF分泌，并在凝血因子VIII（FVIII）调控的共培养背景下伴随SKOV3侵袭与迁移减弱，该效应与AMPK活化增强及YAP核积聚减少相关，且可被外泌体释放抑制或VWF阻断所逆转。体内过表达circ_0000387与腹腔播散及腹水形成减少相关，而Rab27a沉默或VWF中和可削弱上述效应。综上，circ_0000387在卵巢癌中具有语境依赖性功能：通过IGF2BP3相关AKT/AMPK/YAP信号发挥肿瘤细胞内促恶性作用，同时通过外泌体依赖、VWF相关的肿瘤-内皮反应抑制转移活性。
研究背景与立项依据
卵巢癌（OC）是最致命的妇科恶性肿瘤之一，多数患者确诊时已发生腹腔播散。其转移受肿瘤细胞增殖、上皮-间充质转化、基质重塑以及肿瘤与腹膜微环境动态互作的驱动。在分子层面，PI3K/AKT、AMPK与Hippo/YAP等通路共同塑造转移表型；其中AKT增强生存与化疗抵抗，AMPK失活促进代谢重编程与运动能力，YAP异常活化驱动细胞骨架重塑与机械传导。环状RNA（circRNA，一类共价闭合、稳定存在的非编码RNA）作为新兴调控分子，可影响转录、RNA-蛋白互作与信号通路，但哪些circRNA协调上述通路仍不清楚。RNA结合蛋白IGF2BP3在侵袭性卵巢癌中上调，可稳定促转移转录本，然而circRNA是否调控IGF2BP3依赖信号尚属空白。另一方面，外泌体（一类携带生物活性 cargo 的小型细胞外囊泡）介导肿瘤-间质通讯；内皮细胞释放的血管性血友病因子（VWF，多功能多聚体糖蛋白）不仅参与止血，还关联血管通透性、肿瘤黏附与转移。VWF是凝血因子VIII（FVIII）的主要载体，而FVIII亦牵涉肿瘤相关病理生理。因此，研究人员拟明确：候选circ_0000387在肿瘤细胞内如何作用于IGF2BP3/AKT/AMPK/YAP轴，以及外泌体circ_0000387能否经内皮VWF反应反向调控转移。
主要技术方法与样本来源
研究人员纳入复旦大学附属中山医院青浦分院20例上皮性卵巢癌患者配对的原发灶与转移灶组织；基于其中4对组织进行circRNA测序。细胞实验以SKOV3为主模型，结合外泌体分离与鉴定、共培养体系、慢病毒/小干扰RNA功能干预、体内NOD/SCID小鼠腹腔播散模型；关键检测包括CHIRP与RIP互作验证、qRT-PCR、Western blot、ELISA/VWF定量、Transwell与伤口愈合、免疫荧光及组织学分析，并以Rab27a敲低与外泌体释放抑制剂、VWF中和抗体、FVIII处理解析机制。
研究结果
3.1 转录组分析鉴定转移相关circRNA
通过对转移与配对原发组织差异表达circRNA测序及KEGG富集，发现候选circ_0000387在转移组中显著上调，通路涉及PI3K-AKT、AMPK、Hippo等，据此选入机制研究。
3.2 细胞与外泌体基线表达
在SKOV3、OVCAR3、CaOV3、A2780中检测显示，SKOV3细胞及其外泌体circ_0000387表达最高，故以SKOV3为核心模型。
3.3 circ_0000387调控肿瘤细胞恶性表型与信号
RNase R验证其环状特征；过表达提升存活、侵袭、迁移，促进YAP核积聚，伴p-AKT升高、p-AMPK降低；敲低则反向。表明细胞内circ_0000387增强SKOV3恶性表型并重构AKT/AMPK/YAP信号。
3.4 circ_0000387结合IGF2BP3并依赖其发挥作用
FISH定位于胞质；CHIRP与RIP证实其与IGF2BP3物理结合。过表达升高IGF2BP3；在敲低circ_0000387背景下回补IGF2BP3或AMPK抑制剂Compound C均可挽救活力、侵袭与迁移。说明circ_0000387经IGF2BP3相关通路促癌。
3.5 外泌体富集与Rab27a依赖分泌
电镜、纳米追踪与标志物确认外泌体；转移组织及过表达外泌体中circ_0000387富集；PKH67标记见内皮细胞内吞。Rab27a敲低降低外泌体释放与外泌体circ_0000387水平。
3.6 外泌体circ_0000387升高内皮VWF并抑制肿瘤运动
共培养中过表达外泌体增加CD63外泌体信号与内皮VWF分泌，同时SKOV3活力、侵袭、迁移下降，YAP核定位减弱，p-AKT降、p-AMPK升；GW4869或si-Rab27a阻断外泌体后效应消失。提示外泌体经VWF相关内皮反应抑制肿瘤迁移。
3.7 FVIII调制外泌体-VWF反应
加入FVIII（10、30 μg/mL）可改变VWF分泌与肿瘤细胞侵袭/迁移：完整外泌体联合FVIII时运动受抑最强，外泌体阻断则削弱该抑制。表明FVIII参与修饰外泌体-VWF相关表型，但非线性因果通路。
3.8 VWF敲低逆转抑制效应
内皮si-VWF降低VWF水平，并恢复oe-circ条件下被抑制的SKOV3活力、侵袭与迁移。证明VWF是外泌体circ_0000387抗运动效应的关键中介。
3.9 体内腹腔播散与信号验证
腹腔模型显示OE-circ组结节数与腹水少于对照；si-Rab27a或抗VWF中和后播散回升。血浆VWF升高，肿瘤组织YAP核定位降低、p-YAP(Ser127)/YAP比升高，IGF2BP3与p-AKT降、p-AMPK升；干预后部分回弹。体内印证外泌体-VWF依赖的抗转移作用及信号重排。
讨论总结
研究人员指出，circ_0000387具有区室依赖性双重功能：在肿瘤细胞内经IGF2BP3促AKT/抑制AMPK、促YAP入核，增强恶性表型；而以外泌体形式递送至内皮后，诱导VWF释放，经FVIII修饰的微环境反馈抑制YAP核积聚与肿瘤运动，减少腹腔播散。该双向模型拓展了外泌体circRNA在肿瘤-内皮通讯中的认知，也揭示IGF2BP3上游非编码调控环节。作者同时说明局限：单一细胞系为主、临床样本量小、circ_0000387与IGF2BP3具体调控方式未完全解析、外泌体内吞未定量、内皮效应是否由circ_0000387直接介导尚需因果验证。
结论翻译
本研究将circ_0000387鉴定为具有语境依赖性功能的转移相关circRNA。细胞内circ_0000387经IGF2BP3及AKT/AMPK/YAP信号促进SKOV3细胞恶性表型；而富含circ_0000387的外泌体关联于内皮VWF反应并降低肿瘤细胞运动性。体内结果进一步支持其经外泌体依赖与VWF相关机制影响腹腔播散。这些发现凸显circ_0000387作为肿瘤内在信号与肿瘤-内皮通讯潜在调控因子的价值，但仍需进一步机制与多中心临床验证。
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提炼该研究可进一步验证的关键科学问题 设计多细胞系验证实验的技术路线 提炼该研究可进一步验证的关键科学问题 设计多细胞系验证实验的技术路线
