《Journal of Biological Chemistry》：Sti1 requires its Hsp70-interacting regions to deposit misfolded proteins at the nucleus-vacuole junction
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蛋白质稳态（proteostasis）保障细胞拥有正确折叠且具功能的蛋白质组，对细胞存活至关重要。在应激或突变条件下，蛋白质常发生错误折叠；稳态网络通过将错误折叠蛋白组装进无膜结构的蛋白质质量控制（PQC）区室进行处置。包括分子伴侣与隔离酶（sequestra
蛋白质稳态（proteostasis）保障细胞拥有正确折叠且具功能的蛋白质组，对细胞存活至关重要。在应激或突变条件下，蛋白质常发生错误折叠；稳态网络通过将错误折叠蛋白组装进无膜结构的蛋白质质量控制（PQC）区室进行处置。包括分子伴侣与隔离酶（sequestrases）在内的多种因子被鉴定为“分选因子”，可将底物导向不同PQC区室，但何种特征决定某因子特异地服务特定区室仍不清楚。研究人员利用三类模式错误折叠蛋白发现，Sti1的TPR结构域对将可溶性错误折叠蛋白分选至不同胞质区室至关重要。研究显示，对可溶性底物，Sti1需借助与Hsp70的互作，方可将其沉积于核-液泡连接处（NVJ）或清除；而当底物为淀粉样蛋白时，Sti1则需Hsp70与Hsp90共同参与，以触发更强的稳态响应或直接将其靶向周边IPOD区室。这表明Sti1不仅是折叠/重折叠开关，还可作为错误折叠蛋白隔离去向的稳态开关。
蛋白质稳态（proteostasis，细胞维持蛋白质正确折叠与清除错误折叠蛋白的平衡网络）是保障细胞存活的核心。细胞内错误折叠蛋白可来源于热激等应激，也可源于突变导致的固有构象异常；此类蛋白若不被处理，会形成有毒聚集。为此，细胞演化出位于胞质与核内的无膜蛋白质质量控制（PQC）区室，如果聚糖体（Q-bodies）、近核质量控制区室（JUNQ）与不溶性蛋白沉积体（IPOD），并依赖分子伴侣、协同伴侣（co-chaperone）与隔离酶（sequestrases，直接将底物导向特定PQC区室的蛋白）完成分选。已有研究提示酵母应激诱导蛋白1（Sti1，哺乳动物中称Hop/STIP1）可结合Hsp70与Hsp90，但其如何作为隔离酶、是否依赖伴侣互作完成区室化沉积仍无定论。本研究以酿酒酵母为模型，选取组成型错误折叠的可溶蛋白VHL、非毒与有毒淀粉样突变亨廷顿蛋白（mHTT1a，分别含或缺失富脯氨酸域）为对象，探究Sti1及其TPR结构域如何依底物性质差异调控错误折叠蛋白在核-液泡连接处（NVJ）与周边区室的沉积。
关键技术方法上，研究人员使用BY4741野生型及来自酵母敲除库的缺失株系，包括ssa1Δssa2Δ（Hsp70双缺失）、hsp82Δ与hsc82Δ（Hsp90单缺失）、sti1Δ，以及回补野生型与特异性削弱Hsp70/Hsp90结合的Sti1点突变体（如R341A、R79A R351A R469A等）；底物为gal启动子驱动的GFP-VHL与Flag-97QP/Flag-97QΔP-GFP。通过活细胞荧光显微术结合FM4-64液泡染色与Hoechst 33342核染定位NVJ/周边归属，以稳态Western blot校正表达量，并以生长曲线评估有毒mHTT的表型代价。
研究结果如下。
Hsp70是阻止VHL包涵体形成所必需的：删除Ssa1/2使VHL在无非应激条件下即形成多发包涵体，且清除减缓；Hsp90单缺失对VHL定位影响有限，说明Hsp70主要在上游维持VHL可溶性与降解。
删除蛋白稳态机器改变mHTT1a每细胞包涵体数：对非毒Flag-97QP，Hsp70/Hsp90缺失增加单包涵体比例并偏周边化；对有毒Flag-97QΔP，hsp104Δ致弥散荧光，其余伴侣缺失对定位影响弱，提示淀粉样毒底物分选路径不同。
Sti1删除使VHL在有无应激下均形成更多周边包涵体（倾向IPOD）：sti1Δ提升VHL包涵体频率与数量，且定位由NVJ转向细胞周边，表明Sti1是将可溶终末错误折叠蛋白保留于JUNQ侧的关键隔离酶。
Sti1删除增强mHTT1a毒性并改变包涵体数目：非毒构建体多发包涵体增多且NVJ与周边并存；有毒构建体则单包涵体/弥散比例上升并伴生长缺陷，说明Sti1缺失破坏淀粉样底物的正常聚集管控。
Sti1通过结合Hsp70的协同伴侣功能行使隔离酶作用：在VHL模型中，仅破坏Hsp70结合的Sti1突变（而非仅破Hsp90结合的R341A）重现sti1Δ表型，即包涵体增加且周边化；证明Sti1依赖Hsp70结合而非独立结构功能完成可溶底物分选。
Sti1的Hsp70-Hsp90协同功能对mHTT1a包涵体形成关键：非毒mHTT仅三突变（同时阻断Hsp70/Hsp90结合）影响沉积；有毒mHTT亦主要依赖TPR域双伴侣互作。即可溶底物仅需Sti1-Hsp70，淀粉样底物需Sti1-Hsp70-Hsp90联合。
讨论与结论翻译：研究人员指出，Hsp70维持VHL可溶但不主导其区室定位；Sti1作为JUNQ隔离酶，其功能来自Hsp70依赖的协同伴侣机制而非独立活性。对可溶错误折叠蛋白，Sti1联合Hsp70促其在NVJ沉积或清除；对淀粉样蛋白，Sti1需同时调度Hsp70与Hsp90以激发更强稳态响应或靶向IPOD，该过程在有毒mHTT中失效。结论为：Sti1凭借与Hsp70及Hsp90的互作，依底物溶解性将错误折叠蛋白导向JUNQ或IPOD，因而不仅是折叠重折叠开关，更是蛋白质隔离去向的稳态开关。
论文的核心机制已经明确，接下来可以选择一个方向继续深化：
