《Molecules》：Excitation-Dependent Visible and Near-Infrared Luminescence of Dy3+/Pr3+ Co-Doped Borate Glasses
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建立并验证了一种将改良QuEChERS提取与基于C18P-PVDF微旋滤膜的微固相萃取（MSPE）相结合的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法，用于测定蜂蜜中的氯霉素（CAP）。在0.10、0.15和0.30 μg kg?1的验证水平下，表观回收
建立并验证了一种将改良QuEChERS提取与基于C18P-PVDF微旋滤膜的微固相萃取（MSPE）相结合的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法，用于测定蜂蜜中的氯霉素（CAP）。在0.10、0.15和0.30 μg kg?1的验证水平下，表观回收率范围为102.1%至105.1%，重复性（RSDr）为4.5%至9.5%，实验室内再现性（RSDwR）为6.0%至12.5%。决策限（CCα）为0.123 μg kg?1，低于行动参考点（RPA）0.15 μg kg?1，而估计的检测限（LOD；未经实验验证）为0.01 μg kg?1。对20份蜂蜜样品进行的基质效应评估显示，所提出程序及其SPE和QuEChERS对照方法的响应均在80–120%范围内。在真实蜂蜜样品中未检出CAP。所开发的工作流程为蜂蜜中CAP的常规测定提供了一种实用且经过验证的替代方案。
论文解读：基于QuEChERS-MSPE-HPLC-MS/MS的蜂蜜中氯霉素残留分析方法开发与验证
一、研究背景与目的
氯霉素是一种广谱抗生素，因其可能引发再生障碍性贫血等严重毒性反应，欧盟已禁止在食用动物中使用。然而，其非法或意外残留仍可能在蜂蜜等食品中被发现。欧盟法规规定蜂蜜中氯霉素的行动参考点为0.15 μg kg?1，因此需要灵敏度高、选择性好的确证方法来监测其残留。蜂蜜基质成分复杂，富含糖类、色素及其他微量组分，这些物质容易干扰色谱分离和质谱检测，导致离子抑制或增强，影响定量准确性。现有的前处理方法如液液萃取、固相萃取（SPE）和QuEChERS虽各有优势，但在处理复杂基质时仍存在共提取物干扰等问题。为此，研究人员旨在开发一种结合改良QuEChERS提取与C18P-PVDF微旋滤膜微固相萃取（MSPE）的样品前处理流程，并通过高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）进行检测，以实现对蜂蜜中氯霉素的灵敏、可靠测定，并全面评估其性能。
二、研究方法概述
本研究采用的关键技术方法包括：首先，利用改良QuEChERS方法对蜂蜜样品进行提取，使用乙腈作为提取溶剂并加入氯化钠盐析；随后，采用装有C18P-PVDF膜的微旋滤膜进行MSPE净化，通过离心实现上样、淋洗和洗脱；最后，使用配备电喷雾负离子源的三重四极杆质谱仪在多重反应监测模式下进行HPLC-MS/MS分析。方法验证严格遵循欧盟委员会实施条例（EU）2021/808。此外，研究人员使用了来自波兰的20份空白蜂蜜样品（包括多花蜜、洋槐蜜和油菜蜜）进行选择性和基质效应评估，并使用6份深色蜂蜜样品（3份荞麦蜜和3份甘露蜜）扩展了基质效应研究。
三、研究结果
2.1 验证结果
通过在0.10、0.15和0.30 μg kg?1三个浓度水平下的验证实验，该方法表现出良好的线性（R2=0.998）、重复性（RSDr为4.5%–9.5%）和实验室内再现性（RSDwR为6.0%–12.5%）。表观回收率介于102.1%至105.1%之间，证实了方法的准确度。通过Youden型设计评估了耐用性，结果表明方法稳健。计算得出的决策限为0.123 μg kg?1，低于行动参考点。扩展测量不确定度在0.02至0.05 μg kg?1之间。检测限估计为0.01 μg kg?1。
2.2 与先前开发方法的比较
与文献报道的其他HPLC-MS/MS方法相比，本研究的QuEChERS-MSPE方法在回收率方面表现相当。主要区别在于样品前处理策略，该方法通过C18P-PVDF微旋滤膜增加了额外的净化步骤，不同于分散固相萃取，其吸附剂固定在装置内，通过连续离心完成净化流程。
2.3 选择性与基质效应
在20份空白蜂蜜样品中，虽然在氯霉素定量离子通道观察到额外信号，但这些信号与氯霉素峰色谱分离良好，且在定性离子通道无对应峰，不满足鉴定标准，因此不影响选择性。在所有验证水平下，包括0.10 μg kg?1，均满足保留时间和离子强度偏差的鉴定要求。对20份蜂蜜样品的基质效应比较显示，SPE、QuEChERS和QuEChERS-MSPE三种方法的内标校正基质效应值均在80%–120%范围内。QuEChERS-MSPE方法显示出最低的样品间变异性和最小的偏离100%响应的平均绝对偏差，尽管这些差异在统计学上不显著。在6份深色蜂蜜的附加实验中，QuEChERS-MSPE相比单独使用QuEChERS表现出更低的离子抑制，其中内标校正后的基质效应差异具有统计学显著性。
2.4 讨论
结合改良QuEChERS提取与C18P-PVDF微旋滤膜净化的方法在残留监测相关的浓度水平上提供了满意的回收率和精密度。与传统的SPE和QuEChERS方法相比，额外的MSPE步骤是对提取物净化方式的改进。虽然三种方法在20份样品中均表现良好，但QuEChERS-MSPE在降低样品间基质效应变异性方面略有优势。在深色蜂蜜中，QuEChERS-MSPE有效降低了离子抑制，同时内标校正进一步补偿了基质效应，但未能完全消除。通过对不同膜材质的比较，PVDF膜因其低结果变异性和统一的离心条件而被选用。研究还指出，该方法对于区分氯霉素异构体的能力有限，需依赖适当的色谱条件。初步实验表明该方法可能也适用于其他酰胺醇类抗生素，但推广到其他兽药类别需要进一步优化。
四、结论总结与讨论
本研究成功开发并验证了一种将改良QuEChERS提取与C18P-PVDF微旋滤膜净化相结合的蜂蜜中氯霉素测定方法。该方法在研究的浓度水平上表现出令人满意的表观回收率和精密度，其决策限为0.123 μg kg?1，低于0.15 μg kg?1的行动参考点。在三种样品前处理程序的直接比较中，QuEChERS-MSPE在内标校正基质效应方面显示出最低的变异性，尽管差异无统计学意义。在六份深色蜂蜜样品中，QuEChERS-MSPE比QuEChERS表现出更低的离子抑制，虽然差异也无统计学意义。相比之下，经内标校正后的基质效应值在QuEChERS-MSPE处理后显著更高。这些发现支持C18P-PVDF微旋滤膜净化作为蜂蜜中氯霉素测定的替代样品前处理方法。未来需要进一步评估该方法对其他分析物及更广泛蜂蜜类型的适用性。
