糖尿病视网膜病变玻璃体转录组学研究：现状与未来展望

《Biology》：Vitreous Transcriptomics in Diabetic Retinopathy: Current Research and Future Prospects

　　

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy, DR）是工作年龄成人可预防性失明的主要原因，但其威胁视力并发症背后的分子机制尚未完全阐明。转录组学（transcriptomics）能够通过活性基因表达研究这些过程，为发现新的生物标志物和治疗靶点提供了途径。玻璃体液（vitreous humour）在包括DR在内的多种视网膜病变中常受累，并可通过睫状体平坦部玻璃体切除术（pars plana vitrectomy）获取，使其成为转录组学研究的良好候选样本。经PubMed和Embase检索，共纳入18篇关于玻璃体转录组学的研究。这些研究被进一步细分为非编码RNA（non-coding RNA）、RNA甲基化（RNA methylation）、血管生成（angiogenesis）、炎症（inflammation）和纤维化（fibrosis）等主题。研究人员认为，玻璃体转录组学具有影响未来DR诊断和治疗的潜力。然而，当前证据受限于研究效能不足以及缺乏标准化方案。

1. 引言

糖尿病 mellitus（diabetes mellitus, DM）影响全球约5.37亿人，是一种累及包括眼在内的多个重要器官系统的全身性疾病，导致显著的发病负担。糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy, DR）是DM最早的微血管并发症之一，影响三分之一的DM患者，是工作年龄成人可预防性视力丧失的主要原因之一。临床上，DR分为非增殖性糖尿病视网膜病变（non-proliferative diabetic retinopathy, NPDR）和增殖性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy, PDR）。DR视力恶化的主要原因是糖尿病性黄斑水肿，其特征为黄斑区视网膜下或视网膜内液体积聚。由新生血管形成和视网膜缺血直接驱动的其他威胁视力的DR后遗症包括玻璃体出血、牵拉性视网膜脱离和新生血管性青光眼。理解DR及其后遗症背后的病理生理过程对于未来靶向治疗方案的进展至关重要。近年来，转录组学已成为在基因水平研究疾病过程的手段。转录组（transcriptome）是生物体在特定时间点存在的RNA分子集合，代表特定细胞或组织中活跃表达的基因子集，其组成是动态的，可受发育阶段、环境因素和生理条件影响。近期研究已生成聚焦于眼后段和前段的基因表达图谱，但人玻璃体转录组学仍是一个研究不足、需要进一步关注的领域。玻璃体液占据人眼五分之四的体积，为邻近眼结构提供结构性和生化支持。既往研究表明，由于玻璃体与内层视网膜结构的邻近性和相互作用，其组成在包括DR在内的多种视网膜疾病状态下可发生改变。玻璃体取样可行，因其是手术可及的储库，识别病变玻璃体的转录组可为推进DR威胁视力后遗症的诊断和治疗提供机会。

2. 背景

2.1 糖尿病视网膜病变病理生理学概述

高血糖是驱动糖尿病病理生理的主要生化紊乱。在DR早期，高血糖浓度通过晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products, AGEs）积累、蛋白激酶C通路激活以及多元醇通路和己糖胺通路紊乱诱发氧化应激。这种生化失调导致周细胞（pericytes）凋亡。健康状态下，周细胞负责维持毛细血管壁完整性，其丧失导致局灶性血管薄弱和微动脉瘤形成，这是NPDR早期的标志性表现。持续高血糖进一步驱动内皮细胞凋亡和基底膜增厚，这些结构改变破坏内血-视网膜屏障（inner blood–retinal barrier, iBRB），最终导致毛细血管闭塞和缺血。缺氧触发血管生成因子如血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和缺氧诱导因子1的上调，导致新生血管形成，这是增殖性疾病的特征性表现。这些新生血管脆弱，常出血进入玻璃体，导致严重玻璃体出血和继发性青光眼等威胁视力的后遗症。此外，在缺乏完全性玻璃体后脱离的情况下，新生血管继续长入后部玻璃体，以其为支架形成纤维血管膜（fibrovascular membranes, FVMs）。这种纤维增殖和玻璃体收缩可对视网膜产生牵拉，将神经感觉视网膜从视网膜色素上皮层拉开，导致视网膜脱离，若累及黄斑可能造成显著视力损害。慢性低度炎症触发白细胞淤滞（leukostasis）是DR的另一重要特征，导致毛细血管阻塞和细胞死亡。DR中的炎症机制复杂，被认为由AGEs、氧化应激和内皮细胞粘附分子上调驱动。既往免疫分析研究显示，细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1）、血管细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1）和选择素（E-选择素）在PDR中过表达，促进白细胞-内皮粘附。趋化因子如单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞炎症蛋白-1α（macrophage inflammatory protein-1α, MIP-1α）和MIP-1β也被证明通过促进白细胞募集和活化至缺氧视网膜区域而发挥作用。此外，视网膜胶质细胞包括星形胶质细胞、Müller细胞和小胶质细胞在高血糖应激下释放促炎分子，进一步加剧神经炎症过程。

2.2 转录组学

转录组学是对生物体基因组表达的所有RNA转录本的研究。该领域近几十年来取得重大进展，其起源可追溯至20世纪70年代低通量Sanger测序的引入，但该方法仅捕获分离的DNA片段，使全基因组测序缓慢且费力。二十年后，微阵列（microarray）方法问世，允许同时测序数千个转录本。随后，2000年代RNA测序（RNA sequencing, RNA-seq）等下一代测序技术的出现彻底改变了该领域，使整个人类转录组的高效定量在数小时内而非数年内完成。此外，单细胞RNA测序（single-cell RNA sequencing, scRNA-seq）现已可行，超越了微阵列和批量RNA-seq，可识别每个细胞的转录模式并揭示特定细胞群内基因表达和调控的异质性。重要的是，它是识别稀有细胞群体、生物标志物和对药理学制剂转录反应的工具。尽管仍是较新发展的技术，scRNA-seq已成功应用于临床环境，指导难治性药物超敏反应综合征患者的治疗干预。此外，微阵列检测正在肿瘤学领域试验用于某些类型癌症的预后判断和诊断。当前转录组方法相关的若干技术挑战已在文献中充分描述，微阵列和RNA-seq方法的重要考量因素见表1。尽管RNA-seq主导当前转录组学时代，微阵列仍是宝贵方法，因其更标准化且成本效益高，适合临床实践应用。从样本采集到数据生成的阵列处理时长各异，从数小时到数天不等。若样本处理与检测程序标准化，未来有潜力将检测周期缩短至24小时，支持快速临床决策。人工智能也正被试验作为工具以促进测序过程中产生的大数据集分析。这些工具结合有望通过实现更个体化的诊断和治疗方法改善患者预后。

3. 方法

本叙述性综述检索了两个电子数据库：PubMed和Embase（通过Ovid）。检索跨三个概念模块进行：糖尿病视网膜病变、玻璃体和转录组学方法。排除标准为综述、会议摘要、重复文献，或研究不涉及玻璃体转录组学或未研究糖尿病视网膜病变。报告FVMs转录组学的研究被保留，因为这些结构位于玻璃体腔内。仅考虑英文摘要。标题/摘要筛选由单一评审者进行，随后由同一评审者对符合纳入标准的摘要进行全文审查。检索式由生成式人工智能（generative artificial intelligence, genAI）聊天工具（Claude Opus 5, Anthropic）创建，执行前由作者审查并手动编辑。PubMed最终检索式为：（“Diabetic Retinopathy”[MeSH] OR diabetic retinopathy[tiab] OR proliferative diabetic retinopathy[tiab]）AND（“Vitreous Body”[MeSH] OR Vitrectomy[MeSH] OR vitreous[tiab] OR vitreous humor[tiab] OR vitreous fluid[tiab] OR vitrectomy[tiab]）AND（Transcriptome[MeSH] OR “Gene Expression Profiling”[MeSH] OR “Sequence Analysis, RNA”[MeSH] OR transcriptomic*[tiab] OR transcriptome[tiab] OR “RNA-seq”[tiab] OR “RNA sequencing”[tiab] OR “gene expression profiling”[tiab] OR microarray[tiab] OR “differentially expressed genes”[tiab]）。检索获得55条记录，其中15篇纳入，发表年份跨度为2015–2026年。随后使用Embase（Ovid）进行补充检索，检索式同样由genAI初始创建并由作者手动编辑。检索获得79条记录，由单一评审者按上述标准筛选，额外纳入1篇文章。另有2篇文章在数据库检索之外被确定，由共同作者通过背景阅读推荐，经相同资格标准评估后纳入，最终共纳入18项研究。

4. 玻璃体转录组学与关键主题发现

4.1 血管生成与新生血管信号

在PDR中，当前治疗的主要目标是抑制血管生成驱动。因此，识别VEGF之外的治疗靶点对扩展未来治疗选择至关重要。近年来，含血小板反应蛋白1型基序的去整合素样金属蛋白酶13（A disintegrin-like metalloprotease with a thrombospondin type 1 motif, 13, ADAMTS13）被证明可调节炎症、血管生成和细胞外基质（extracellular matrix, ECM）降解。Li等人对人玻璃体样本进行RNA-seq，研究了5例PDR和5例对照，检测到PDR中ADAMTS13上调，并证明ADAMTS13表达通过上调polo样激酶-1/血管生成素-2信号通路促进血管生成，该通路独立于VEGF。这些发现提示靶向ADAMTS13可为抗VEGF治疗反应不佳的患者提供替代方案。

4.2 炎症

Haliyur等人首次在单细胞水平对人玻璃体进行转录组表征，研究了PDR玻璃体的免疫学景观。玻璃体样本取自晚期出血性PDR患者的稀释套管冲洗液，进行基于液滴的scRNA-seq，同一受试者的外周血样本作为对照。结果显示，与外周血相比，玻璃体中T细胞丰度高而中性粒细胞几乎完全缺失。这些发现引起关注，因为目前对适应性免疫在PDR中的确切作用尚无定论，但其在病变玻璃体中的存在可能具有临床相关性，有助于未来免疫调节治疗的发展。Boneva等人进行RNA-seq分析，主要关注玻璃体PDR中透明细胞（hyalocytes）的作用。透明细胞是存在于玻璃体靠近玻璃体-视网膜界面的特化驻留巨噬细胞。在高血糖状态下，它们被认为驱动血管生成、释放促纤维化因子并参与红细胞吞噬。结果显示，与视网膜前膜（epiretinal membrane, ERM）和黄斑裂孔（macular hole, MH）患者的透明细胞相比，PDR透明细胞中白细胞介素-6和血管生成素-2等促炎和促血管生成因子增加。因此，透明细胞的免疫调节可能成为未来治疗PDR的潜在选择。Hu等人也研究了PDR玻璃体的免疫学景观，通过单核RNA测序（snRNA-seq）转录分析揭示小胶质细胞是FVMs的主要细胞亚群。Scheri等人对其数据集（GSE165784）的二次分析挑战了最初发现，无法重现Hu等人描述的小胶质细胞亚群，也无法在任何细胞簇中复制促纤维化特性，反而发现FVM样本含有巨噬细胞而非小胶质细胞。原研究者承认其标记无法排除单核细胞来源的巨噬细胞，并认为转录组学无法解决这一争议，因为小胶质细胞能够响应局部损伤表现出异质性疾病相关谱系。因此，未来应设计谱系追踪实验以确定FVM驻留髓系细胞的起源。

4.3 纤维化与ECM重塑

FVMs的存在是严重PDR的特征性表现，由基质组织和细胞成分组成，包括视网膜胶质细胞、巨噬细胞/透明细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞。FVMs可收缩并诱导牵拉性视网膜脱离导致视力丧失。尽管在疾病过程中高度重要，FVMs发生和进展的机制尚未完全理解。Ishikawa等人对人FVMs进行微阵列分析，3个样本含活动性FVMs，3个为非活动性FVMs，将活动性定义为存在灌注毛细血管。FVM基因表达与正常人类视网膜RNA比较，87个基因在FVMs中优先表达，以ECM基因（COL6A3、THBS2、COL1A1、POSTN、TNC、SERPINE1、VCAN）为主。活动性FVMs富集血管生成基因（APLN、MMP9、ANGPT2、ESM1），非活动性FVMs富集代谢性凋亡基因（CRYAA最高）。该研究生成了未来可靶向治疗以减缓FVMs进展且可能不影响正常视网膜功能的基因列表。值得注意的是，FVM样本来自两个日本中心的手术标本，而参考视网膜RNA来自商业高加索人供体库，由于FVM患者无血统数据，不能排除群体差异影响观察到的基因表达变异。Boneva等人使用RNA-seq和蛋白质组学对FVMs进行多模式表征，发现FVMs中3365个基因相对于对照样本上调，组成以ECM分子、内皮标志物和免疫调节因子为主。随后的免疫组织化学分析显示玻璃体透明细胞表达α-平滑肌肌动蛋白，这是肌成纤维细胞的已知标志物，提示透明细胞可能在PDR中FVMs的发展中发挥作用。

4.4 RNA甲基化

RNA甲基化是一种转录后修饰方式，可稳定RNA并调节其定位、转运、剪接和翻译。迄今已鉴定超过150种RNA修饰类型，但关于其在DR中作用的文献很少。Wang等人研究了DR玻璃体中5-甲基胞嘧啶（m⁵C）修饰，发现NSUN2表达在DR玻璃体中显著升高，进一步分析显示NSUN2通过结合RNA m⁵C阅读器ALYREF促进MUC1表达，该信号通路被认为驱动DR中的微血管增殖、侵袭和血管生成。另一项研究调查了DR中mRNA的N6-甲基腺嘌呤（m⁶A）去甲基化、脂肪质量与肥胖相关蛋白（fat mass and obesity-associated protein, FTO）和驱动蛋白家族成员11（kinesin family member 11, KIF11）基因的作用。FTO被认为促进DR中的血管内皮功能障碍，KIF11是肿瘤生物标志物，也已被确定为PDR的潜在标志物。Lin等人使用meRIP-seq发现FTO在玻璃体PDR中过表达，随后KIF11去甲基化并过表达。体外实验显示该机制增强人视网膜微血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells, hRECs）的增殖、DNA合成、迁移、伤口愈合和管形成，体内实验显示其增强链脲佐菌素诱导大鼠模型中DR的发展。研究者称KIF11的商业抑制剂ispinesib在DR临床治疗中具有巨大潜力，但当前文献尚不支持这一结论。值得注意的是，ispinesib作为单一药物在黑色素瘤和头颈部鳞状细胞癌等癌症患者的临床试验中未获支持，未来研究可调查ispinesib在PDR背景下的疗效以促进临床转化。

4.5 非编码RNA

非编码RNA（non-coding RNA, ncRNA）指不编码蛋白质但在表观遗传、转录和转录后水平参与基因调控的RNA。本综述提及的ncRNA类型包括微小RNA（microRNA, miRNA）、长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）、tRNA衍生小RNA（tRNA-derived small RNAs, tsRNAs）和环状RNA（circular RNA, circRNA）。四项转录组学研究报道了miRNA在PDR玻璃体中的作用。Yan等人从玻璃体外泌体中提取总RNA，通过RNA-seq在所有玻璃体样本中鉴定出843个独特miRNA，其中60个在PDR患者和非糖尿病对照间差异表达。PDR玻璃体中下调最显著的miRNA为miR-204-5p和miR-211-5p，两者均已被证明对糖尿病并发症具有保护作用；上调最显著的为miR-451a和miR-486-5p，后者被认为在血管生成中发挥作用。但值得注意的是，miR-451a是溶血标志物，miR-486-5p也是红细胞表达的miRNA，由于部分样本来自非清除性玻璃体出血的眼，上调分子是否为污染物是需要考虑的重要问题。Guo等人对玻璃体小RNA进行测序，鉴定出225个差异表达miRNA（179个上调，46个下调），其中10个被选择进行靶标预测。三个miRNA（hsa-miR-24-3p、hsa-miR-197-3p、hsa-miR-3184-3p）在第二个队列中通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）确认升高，同时通过酶联免疫吸附测定检测到玻璃体VEGF-A和转化生长因子-β（transforming growth factor-beta, TGF-β）升高，每个miRNA与两种生长因子之间观察到正Pearson相关（系数范围=0.498–0.586）。然而，论文仅报告合并相关性而非组内分析，报告的r值可能表明组间分离而非PDR内部的关系。评估疾病组内的剂量-反应关系将更有助于支持所提出的结论。Smit-McBride等人比较了每例DR患者血浆、玻璃体和房水中的miRNA表达，在Affymetrix阵列上分析了847个miRNA探针，结果显示DR中房水、玻璃体和血浆中常见生物标志物失调，包括let-7b、miR-320b、miR-762、miR-4488。研究者指出其结果未识别与既往团队报道相同的生物标志物，且研究效能不足。该研究的实验设计部分将对照组列为11例MH或ERM患者，但补充表S1还表明对照组包括1例视网膜脱离患者和1例诊断未明确的患者，且这是唯一从NPDR患者获取玻璃体样本的研究，但其中两名患者的手术原因未明确说明，这种纳入受试者透明度不足影响未来研究的可重复性。He等人使用微阵列分析研究了lncRNAs和miRNAs，发现LINC02099在PDR玻璃体中高表达，被证明驱动Müller细胞中高血糖诱导的纤连蛋白、胶原I和胶原IV上调。生物信息学分析揭示LINC02099、miR-214-3p和组织蛋白酶S（cathepsin S, CTSS）之间的直接相互作用。CTSS被认为在高血糖状态下驱动血管生成和炎症，miR-214-3p在DR中的作用仍有争议。通过计算预测，He等人发现CTSS被miR-214-3p直接抑制，团队得出结论：LINC02099/miR-214-3p/CTSS轴调节DR中的ECM，促进纤维化。在另一项研究中，Thomas等人研究了lncRNAs在DR内皮-间质转化（endothelial–mesenchymal transition, EndMT）中的作用。EndMT由高血糖引起，涉及内皮细胞转分化为间质样细胞，导致内皮连接标志物丧失，血管通透性增加，引起免疫细胞浸润和液体渗漏，间质细胞表型在疾病后期也驱动纤维化。Thomas等人发现lncRNA H19通过抑制TGF-β及其信号通路阻止EndMT，其在DR中表达受抑从而驱动EndMT过程。但该论文使用特发性MH和未明确的非糖尿病条件作为对照，缺乏对照类型的明确说明影响结果可重复性。Zeng等人进行的另一项微阵列分析评估了PDR患者以及接受抗VEGF药物治疗患者玻璃体中的lncRNA表达，发现PDR玻璃体中1067个失调非编码转录本，特别是5个lncRNAs下调：RP11-573J24.1、RP11-787B4.2、RP11-654G14.1、RP11-2A4.3和RP11-502I4.3。此外，抗VEGF治疗后PDR患者玻璃体中RP4-631H13.2表达较未治疗PDR患者增加。研究者使用受试者血浆样本比较其转录本与玻璃体转录本，确定经PCR验证的转录本在血浆中均无显著差异，因此认为信号可能局限于玻璃体。该设计原则上合理，但效能不足以完全支持所作结论。在另一项涉及lncRNAs的研究中，Hu等人使用RNA-seq从PDR玻璃体中分离外泌体，鉴定出899个差异表达lncRNAs，其中LOC100132249上调最显著。匹配血浆外泌体测序未显示差异，提示视网膜来源而非系统性来源。高糖刺激的人视网膜血管内皮细胞被确定为可能来源。所提出的机制涉及核内LOC100132249结合miR-199a-5p并解除对SNAI1的抑制，SNAI1是与生理和病理性眼新生血管形成相关的基因，这激活Wnt/β-catenin信号并导致内皮功能障碍。Wang等人也使用微阵列研究了PDR患者中lncRNAs的作用，从接受术前玻璃体腔抗VEGF注射（康柏西普）与未接受的患者中获取FVMs。研究表明lncRNAs和mRNA表达受康柏西普影响，发现427个差异表达lncRNAs，其中长链基因间非编码RNAs（long intergenic non-coding RNAs, lincRNAs）构成最大组。生物信息学分析将其与代谢通路（糖异生）、缺氧诱导因子1信号和炎症通路（包括肿瘤坏死因子-α）相关联。Yang等人对PDR和MH患者玻璃体样本进行小RNA测序，发现37个差异表达tsRNAs和70个miRNAs，并确定AMP活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase, AMPK）信号是tsRNA靶标的主要通路，Th17细胞分化是miRNA靶标的主要通路。这是首个报道人PDR玻璃体tsRNA表达谱的研究。一项研究报告了DR玻璃体中circRNAs的表达。circRNAs可结合miRNAs并充当其“海绵”以防止miRNAs抑制靶mRNA。He等人对PDR玻璃体进行转录组测序，证明122个circRNAs上调和9个下调，进一步生物信息学分析预测每个circRNA可与至少5个miRNAs相互作用。对3个随机选择的miRNAs进行PCR检测揭示其下调，证实PDR玻璃体中circRNA-miRNA串扰的预期效应。但值得注意的是，对照组组成多样，包括1例孔源性视网膜脱离（rhegmatogenous retinal detachment, RRD）、1例MH和1例ERM患者，RRD涉及血-视网膜屏障破坏，使其成为以屏障相关病理为研究重点的不理想基线。

5. 讨论

5.1 当前玻璃体转录组学研究的局限性与未来展望

本综述讨论的研究提供了DR患者遗传组成的新数据。然而，所有研究均受限于小样本量和缺乏健康对照。后者难以克服，因为玻璃体取样具有侵入性并携带威胁视力的风险，如眼内感染、视网膜裂孔、视网膜脱离和玻璃体出血。目前，大多数研究者使用因特发性玻璃体视网膜病变而需行玻璃体切除术的患者作为对照，有些甚至选择非眼组织。本综述纳入的研究在对照受试者选择上存在差异，7项研究在对照组中使用超过1种疾病，3项研究未列出对照受试者的确切类型，4项研究使用视网膜脱离患者作为对照。对照组的异质性和对照受试者缺乏明确说明可能导致所讨论研究中缺乏对PDR单一生物标志物的共识。此外，RRD涉及血-视网膜屏障破坏，使其成为屏障相关病理（如DR）的不理想对照选择。未来研究应旨在使用相同类型的对照以实现有意义的比较和可重复性。当前玻璃体转录组学研究的另一个重要局限性是缺乏标准化的玻璃体取样方法。一些研究使用未稀释玻璃体标本，而其他研究提出稀释样本。样本体积或玻璃体切除术切割速率等参数并非总是被报告，后者可能与保持所获细胞及其RNA质量相关。还有玻璃体组织采集后RNA材料保存优化的问题。样本可为新鲜、冷冻储存或固定。未来研究可调查提取RNA的基因表达谱与人玻璃体样本保存方法之间的相关性。Bhanja等人最近发表了用于单细胞转录组学研究的玻璃体免疫细胞浸润分离和表征详细方案，可能改善未来项目的标准化。获取活体患者细胞的一种替代方案是使用类器官（organoids），其利用干细胞重建各种眼结构的模型。已有主要眼组织包括视网膜、角膜、晶状体和结膜的类器官模型报道，多眼类器官模型也存在，可重建类天然组织结构。近期研究还将类器官整合到器官芯片（organ-on-chip, OoC）平台的受控微环境中。微流控OoC设备提供更准确的生理条件表征，因其允许营养扩散模拟脉管系统。据研究者所知，尚无涉及玻璃体液的类器官或OoC报道。尽管OoC平台是人类取样的有用替代方案，但在体外玻璃体研究背景下不太可能成功，因为玻璃体几乎无细胞且主要由ECM组成，其转录本来自视网膜释放的外泌体、驻留透明细胞和浸润炎症细胞。未来研究应侧重于标准化现有玻璃体取样方案并增加样本量以加强结论。

5.2 临床转化的当前障碍

目标是识别驱动PDR的特异性生物标志物，可用于未来靶向治疗开发。本综述讨论的研究鉴定出众多生物标志物但重叠很少。因此，目前尚无候选标志物在排除血液污染的可比条件下被重复验证。此外，无法确定所列生物标志物是否也可转化应用于NPDR患者，因为除一项研究取样了4例NPDR患者外，样本仅来自需要玻璃体切除术的晚期PDR患者。NPDR患者通常不需要玻璃体切除术，除非因其他原因（如并发MH或ERM）。为了将发现应用于NPDR患者，未来生物标志物最好能在糖尿病患者血液中被识别。总体而言，当前玻璃体转录组学研究临床转化的主要障碍包括缺乏标准化取样、缺乏标准化对照和小样本量。目前，所有这些因素影响可重复性，导致无法识别可靠的生物标志物候选。

5.3 本综述的局限性

摘要由单一评审者筛选，缺乏独立验证并引入潜在选择偏倚风险。研究还试验使用genAI创建PubMed和Embase的初始检索式，强调执行前人工检查输出的重要性。尽管提示词简短，初始检索式需要手动编辑以确保高质量检索。例如，初始PubMed检索式包含冗余的缩写“PDR”。Embase检索式的生成输出包含更多不相关术语，导致大量噪声。输入原始genAI生成的检索式时，Embase识别出111篇文章，经手动编辑术语得出最终检索式后，该数量减少至79篇。研究者分析了genAI输出中额外32篇文章的摘要，结论是均不符合纳入标准。因此，在综述文章方法学中使用genAI是有帮助的，但需要仔细的人工监督以确保其效率。

6. 结论

近年来，视觉研究领域在转录组学方面取得了显著进展。此外，人玻璃体转录组学研究正变得更加普遍，初步发现前景可观。研究者希望转录组学融入常规临床实践将成为未来眼科护理的一部分。目前，其实施受多种因素限制，包括缺乏优化方案、高成本和缺乏充分效能的研究。