《OncoImmunology》：Cancer patient outcomes correlate with activating-KIR/ligand repertoires associated with distinct NK cell transcriptomic profiles
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背景：癌症治愈率不断提高，然而复发和难治性仍是临床挑战，需要替代性治疗策略。自然杀伤（NK）细胞若其抗肿瘤反应性得以增强，可能发挥决定性作用。杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）与其人类白细胞抗原I类（HLA-I）配体之间的相互作用显著影响NK细胞教育，并可能影
背景：癌症治愈率不断提高，然而复发和难治性仍是临床挑战，需要替代性治疗策略。自然杀伤（NK）细胞若其抗肿瘤反应性得以增强，可能发挥决定性作用。杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）与其人类白细胞抗原I类（HLA-I）配体之间的相互作用显著影响NK细胞教育，并可能影响癌症患者的临床结局。本研究评估了KIR/HLA-I相互作用对循环NK细胞转录组谱的影响及其与患者结局的关联。方法：对实体瘤和血液系统恶性肿瘤患者（n=1,153）进行KIR和HLA-I基因分型，并结合循环NK细胞中KIR表达分析。此外，对具有与短生存期和长生存期相关的KIR/HLA-I基因型的选定供者进行循环NK和T淋巴细胞的单细胞转录组分析（scRNA-seq）。结果：与抑制性KIR相比，激活型KIR（aKIR）与癌症患者结局的关联更为显著。aKIR–HLA相互作用的累积与较短的总生存期相关，而在无其他aKIR相互作用的情况下，KIR2DS1/C2相互作用与较长生存期相关。研究识别了三种主要的NK细胞转录谱：成熟细胞毒性型、未成熟/调节型以及适应性细胞毒性型。适应性样转录谱与较长生存期相关。结论：总之，aKIR/HLA-I相互作用与癌症患者结局相关。特别是，在无其他激活信号的情况下，KIR2DS1/C2相互作用与适应性NK细胞转录组谱及改善的生存期相关。理解有效的NK细胞介导的抗肿瘤免疫机制可能为难治性肿瘤患者提供新的机会。
研究背景：癌症是21世纪主要的健康和经济挑战之一，全球近六分之一的死亡由其导致。尽管近几十年来癌症治疗取得了显著进展，提高了总体生存率和患者生活质量，但耐药性等挑战限制了现有疗法的疗效，促使人们开发旨在增强患者免疫系统的生物疗法。恶性细胞的遗传特征决定侵袭性和治疗敏感性，但患者免疫系统的遗传多样性也调控其与肿瘤细胞的相互作用。固有免疫是抗肿瘤的第一道防线，自然杀伤（NK）细胞在识别和清除肿瘤细胞中发挥关键作用。NK细胞的细胞毒性活性由抑制性和激活性信号的复杂网络协调，这些信号通过与其靶细胞上相应配体相互作用而触发。根据杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因型，每个个体可能表达不同数量的9种抑制性KIR（iKIR）或6种激活性KIR（aKIR）。抑制性KIR和NKG2A受体与其人类白细胞抗原I类（HLA-I）配体的相互作用促进NK细胞的教育和最佳功能能力。尽管已有报道aKIR与其同源配体的相互作用，但其在NK细胞教育和功能中的作用尚不清楚表征。在此背景下，通过靶向KIR相互作用来增强NK细胞反应的策略正在癌症免疫治疗中探索，但初步临床试验未取得令人鼓舞的结果。因此，更全面地理解KIR–配体相互作用如何调控NK细胞分化和功能对于优化这些治疗策略至关重要。鉴于新出现的证据表明激活性KIR有助于NK细胞教育和功能适应，研究人员假设不同的激活性KIR/HLA-I相互作用库塑造NK细胞分化程序，产生与不同临床结局相关的特定转录组谱。为验证这一假设，研究人员评估了大型实体瘤和血液系统恶性肿瘤患者队列中KIR/HLA-I相互作用与生存期的关联，并通过单细胞转录组分析表征了相应的NK细胞转录状态。
研究方法：研究纳入1,148名健康供者和1,153例初诊癌症患者，包括328例膀胱癌、310例黑色素瘤、89例卵巢癌、323例浆细胞肿瘤和102例儿童急性白血病。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取外周血DNA，使用Lifecodes KIR-SSO和HLA-SSO分型试剂盒进行KIR和HLA-A、-B、-C基因分型。通过流式细胞术分析CD56bright和CD56dim NK细胞以及CD3+CD4+和CD3+CD8+ T细胞上CD16、CD226（DNAM1）、NKG2A、TIGIT和KIR（KIR2DL1、2DS1、2DL2/S2、2DL3和3DL1）的表达。单细胞转录组分析选取6名具有与长生存期或短生存期相关的aKIR/配体基因型的健康供者和/或癌症患者，使用阴性选择RossetteSep试剂盒从外周血中富集NK和T淋巴细胞，按9:1的NK:T细胞比例混合后进行scRNA-seq分析。细胞用TotalSeq-C抗体标记后，在Chromium Next Gem平台上构建表面抗体（IRM）和基因表达（GEX）文库，在NovaSeq 6000上测序。为在单细胞水平分析KIR基因表达，使用基于RAGE-seq的杂交捕获方案富集KIR转录本，并在PromethION2仪器上进行Nanopore测序。生物信息学分析使用Cell Ranger（v6.0）处理短读长数据，Dorado（v0.5.3）进行碱基识别，splitcode（v0.30.0）进行条形码提取，lr-kallisto进行KIR转录本定量。数据整合至AnnData对象并使用scanpy工具包处理，经严格质量控制后，使用Leiden算法进行聚类，Harmony进行批次校正，Wilcoxon秩和检验进行差异基因表达分析，edgeR进行伪批量分析，g:Profiler进行功能富集分析。统计分析使用SPSS version 21.0，采用Pearson's χ2或双尾Fisher精确检验分析分类变量，Student's t或ANOVA分析连续变量，Kaplan–Meier估计量和Log-rank检验分析总生存期（OS），Cox回归分析确认变量间的关联。
研究结果：
影响KIR/配体相互作用对癌症患者生存期的效应：单个KIR、KIR配体或KIR/配体相互作用与所评估的任何癌症的易感性均无明确关联，仅KIR2DL2/C1（p=0.03）和KIR2DS2/C1（p=0.012）相互作用与较差结局显著相关。由于KIR2DL2与KIR2DS2之间存在强连锁不平衡，无法阐明哪个受体导致了观察到的效应。进一步分析显示，在无相应aKIR/配体相互作用的情况下，iKIR/配体相互作用与患者生存期无显著关联。在分析aKIR时，具有KIR2DS1/C2相互作用且无其他aKIR相互作用的患者生存期显著延长，在总队列及实体瘤或血液系统肿瘤分别分析中均如此。生存期次优的组为无任何aKIR/配体相互作用的患者。相反，具有两个或以上aKIR相互作用（KIR2DS1/C2、KIR2DS2/C1或KIR3DS1/Bw4中）的患者总生存期显著缩短。Cox回归分析显示，KIR2DS1/C2相互作用（HR=0.826，95% CI：0.935–0.728，p=0.003）、KIR3DS1（HR=1.316，95% CI：1.742–0.995，p=0.054）和年龄（HR=1.023，95% CI：1.013–1.034，p<0.001）在所有癌症类型中与总生存期独立相关。
KIR2DS1/C2相互作用与较低癌症发病率及有利患者结局相关：根据aKIR/配体相互作用库将患者分为六种不同基因型，这些基因型与不同的患者结局相关。生存期最长的基因型（KIR2DS1/C2为唯一aKIR相互作用）频率最低，但在健康对照中频率较高（4.3%，p<0.05），相较于实体瘤（2.7%）和血液系统恶性肿瘤（1.7%）患者，提示该基因型与较低癌症发病率相关。相反，以Bw4配体存在且无额外aKIR相互作用为特征的基因型在血液系统疾病患者中显著更常见（39.8%，p<0.001），相较于健康对照（28.3%）或实体瘤（30.9%）。其余基因型在健康对照和患者之间无差异。分析主要循环淋巴细胞亚群和KIR+ NK细胞库显示，不同aKIR/配体基因型间CD4+和CD8+ T淋巴细胞及CD56dim和CD56bright NK细胞频率无差异。然而，与遗传数据一致，aKIR/配体基因型显著影响KIR+ NK细胞亚群的库。表达KIR2DS1的NK细胞在与最长生存期相关的基因型中是优势循环亚群。相反，KIR2DL2/S2+ NK细胞在与最差结局相关的基因型患者中代表优势亚群。
有和无癌症个体中NK和T淋巴细胞亚群的转录谱分析：为剖析与癌症结局相关的aKIR/配体基因型有关的循环NK和T淋巴细胞的表型和功能异质性，在三个独立实验中对六名选定受试者进行了单细胞转录组分析，每个实验包括一名具有短生存期相关基因型的受试者和一名具有长生存期相关基因型的受试者。平均每个样本回收10,000个细胞，每细胞200,000 reads，每样本检测1,700个基因，数据集总计达25,000个基因。各样本间细胞数、每细胞reads数和线粒体基因百分比相当，表明数据质量高且一致。基于转录相似性的无监督聚类（Leiden算法，分辨率0.5）识别了11个不同亚群，包括单核细胞和多个NK和T细胞亚群，并通过TotalSeq抗体谱验证。使用NK联盟组描述的与NK细胞活化、抑制、细胞毒性和细胞因子分泌相关的经典标记分析循环NK细胞亚群的异质性，识别了三种主要NK细胞亚群：（1）NK1对应成熟细胞毒性NK细胞，以CD16高蛋白表达和CD56较低表达为特征，与强细胞毒性特征相关，高表达PRF1、GZMB及NK细胞成熟标记如CD160、NKG7、CLI3、SPON2或FCER1G；（2）NK2为未成熟和调节性NK细胞群体，以CD56高蛋白表达和CD16低或阴性为特征，高表达转录因子TCF7、细胞因子受体基因（IL2RB、IL7R）、SELL、膜受体NKG2A（KLRC1基因）和XCL1/2及GZMK；（3）NK3对应适应性细胞毒性NK细胞，以CD16高蛋白表达和CD56较低表达为特征，表达表面分子编码基因如KLRC2（NKG2C）、FCGR3A和FCRL6，分泌因子如IL32、CCL5和GZMH，以及效应基因如S100A4和CST7。NK3簇的联合蛋白和转录特征与Rebuffet等人描述的适应性NK细胞高度相似。次要细胞亚群包括以细胞周期调控因子MKI67和TOP2A高表达为特征的增殖性NK细胞。此外，分析 delineated 功能分层的T淋巴细胞区室，经CD3蛋白表达确认并分为CD4+和CD8+谱系，识别了五个转录 distinct 亚群：na?ve CD4+（EEF1B2、FAU）、效应CD4+（LTB、MAL、UBA52）、na?ve CD8+（CD8B、SARAF）、细胞毒性CD8+（GZMH、KLRG1、CD8A）和记忆CD8+（CXCR4、IL32、DUSP2）。还检测到以SPI1、MS4A7和SERPINA1表达定义的单核细胞群体。
NK3细胞簇显示与患者结局相关的最高数量差异表达基因：分析11个细胞簇根据与患者结局相关基因型的频率和分布，簇频率在长生存期和短生存期组间大致相似。然而，在NK区室内，长生存期相关基因型供者的细胞相对富集于NK3簇。这些数据表明，aKIR/配体基因型相关的差异临床结局并非由于亚群间的数量差异，而是NK3群体内的转录和潜在功能变异。为阐明这种差异分布背后的转录变化，进行了差异基因表达（DGE）分析。NK3簇显示最高数量的DGE（n=288），比较长生存期与短生存期相关基因型时，115个基因上调、174个基因下调，其次是NK1亚群（35个DGE）。这些发现支持NK3亚群是与aKIR/配体基因型相关的差异临床结局关键贡献者的假设。为更好理解NK3亚群在抗肿瘤反应中的相关性，分析长生存期队列中参与其效应功能的基因表达。该亚群的转录谱表现出高度特化和多功能淋巴细胞特征的上调基因模式，包括适应性身份相关基因（KLRC2、KLRC4）、关键转录因子（ZBTB38、PRDM1、ArId5B）、高度活化和通讯状态标记（HLA-B、MHC-II类反式激活因子CIITA、黏附分子ALCAM和CADM1、信号受体IL7R和IFNLR1）、细胞毒性和促炎转录谱（IL32显著上调，FDR=0.0067；GZMH表达较高但未达统计学显著性，FDR=0.44；SERPINB9和CTSH）、高代谢活性状态（核糖体蛋白基因RPL3和RPS4X上调）。相反，长生存期特征以免疫功能障碍相关遗传程序的显著下调为特征，包括耗竭和抑制性信号相关基因（检查点受体HAVCR2/TIM-3和LAYN、磷酸酶DUSP6、PTPRR和PTPRB、其他抑制性分子PAG1和BTN3A2）、代谢功能障碍和转录重编程相关基因（CD38、FBP1、IRF8、SOX4、MEF2C、SPI1、TRIB2）以及免疫抑制和促肿瘤基因（HLA-G、IL18、VEGFA、FGFR1、ADAM12、ADAM28、CXCR2）的低表达。
激活性KIR基因表达在长生存期相关基因型患者的NK3簇中占优势：为在全长转录本水平获得KIR表达的高分辨率视图，使用Nanopore技术进行靶向测序。该分析使得能够量化3个NK细胞簇中KIR基因的表达。aKIR分析显示其表达主要局限于最分化的NK细胞亚群：成熟细胞毒性NK1和适应性NK3亚群。KIR3DS1基因是最丰富的aKIR，其次是KIR2DS2和KIR2DS1，其表达在适应性NK3亚群中占优势。值得注意的是，未成熟/调节性NK2簇几乎不表达激活性KIR转录本。KIR2DL1、KIR3DL2、KIR2DL3、KIR2DL5和KIR3DL2转录本主要见于NK1和NK3亚群。KIR3DL1在三个NK细胞亚群中均有表达。一个显著例外是KIR2DL4，其在NK2亚群中高度且特异性富集，这与先前文献描述KIR2DL4优先表达于CD56bright NK细胞一致，构成对NK细胞分类策略的生物学验证。为研究NK3簇内KIR表达的作用及其与患者结局的关系，对该亚群中aKIR和iKIR的累积表达进行定量分析。分析显示，携带长生存期相关基因型的患者在NK3细胞中aKIR表达超过iKIR，而短生存期相关基因型患者呈现相反模式。
讨论部分总结：近几十年来癌症治疗手段大幅扩展，但相当比例肿瘤仍对现有治疗难治。免疫系统遗传多样性关键影响免疫细胞与肿瘤细胞的相互作用，从而塑造治疗效果和疾病进程。本研究旨在评估KIR受体与其HLA-I配体相互作用对癌症患者结局的影响，并探究NK细胞中的潜在分子通路。队列分析表明iKIR相互作用与患者生存期无显著关联。相反，在无其他aKIR相互作用的情况下，KIR2DS1/C2相互作用与延长生存期相关。其在健康对照中频率高于癌症患者，支持在独立队列中研究该关联以确定其潜在保护相关性。然而，已有描述KIR2DS1和HLA-C2共表达在无其他aKIR相互作用时在NK细胞教育中有功能，但可能意味着NK细胞对恶性细胞的低反应性。这些结果与本队列中携带该基因型患者观察到的转录谱形成对比，后者明显存在具有适应性NK细胞特征和强抗肿瘤潜力的NK3亚群。此外，这与接受骨髓移植患者中报道的生存获益一致，其中选择携带KIR-B单倍型的供者以通过KIR2DS1/C2促进同种反应性。在此类严格控制环境中，供者选择以避免其他KIR/配体相互作用，从而减少KIR2DS1以外相互作用的共存，这可能解释这些临床环境中观察到的有利结局。同样，研究结果与先前报道一致，即aKIR累积与不同类型癌症患者较差生存期相关。研究人员先前研究进一步表明，基因型中aKIR累积与激活性受体CD16和CD226表达降低以及实体瘤患者较差生存结局相关。当前结果表明aKIR相互作用累积与耗竭和免疫抑制肿瘤微环境相关的NK细胞转录谱相关。NK3和NK1细胞产生HLA-G升高可能在这些基因型中促成此效应。值得注意的是，循环NK细胞上HLA-G表达与乳腺癌抗肿瘤免疫降低相关，该效应可通过HLA-G中和逆转，强调其调节NK细胞功能的直接作用。近期发现将强细胞毒性和抗肿瘤能力归因于表达KIR2DS2且无其抑制性对应物KIR2DL2的NK细胞。然而，研究人员体内结果显示表达KIR2DL2/S2的NK细胞在与最差结局相关基因型中代表优势循环亚群。这些发现与先前报道一致，将KIR2DL2/S2表达NK细胞与癌症和移植中的不良结局联系起来，可能由于主导性抑制信号和NK细胞库重塑。事实上，当KIR2DS2和KIR2DL2共表达时，通过KIR2DL2的抑制覆盖KIR2DS2介导的激活。尽管循环NK细胞KIR表达的免疫表型分析无法区分KIR2DS2与KIR2DL2，但Nanopore测序转录谱分析揭示KIR2DS2是NK1和NK3细胞中的优势基因之一，与KIR2DL2和最显著的KIR3DS1一起。KIR3DS1是所有NK亚群中最广泛表达的aKIR；因此，患者中C1和Bw4配体同时出现将在NK细胞中累积激活和抑制信号，可能共表达所有这些受体，从而诱导低反应性，如先前所述。在KIR2DS1/C2相互作用是唯一可用aKIR相互作用的患者中不会出现这种情况。支持这一假设，Nanopore分析显示在长生存期相关基因型受试者的NK3簇中，aKIR表达累积并超过iKIR。相反，在该适应性NK细胞簇上iKIR表达在较差结局相关基因型受试者中占主导。因此，适应性NK细胞的转录组分析揭示了以激活性KIR高表达（主要为KIR3DS1、KIR2DS1和KIR2DS2）为特征的场景。在C2作为唯一aKIR配体存在时，这似乎促进与有效抗肿瘤反应相关的基因转录程序，而额外配体Bw4和C1的累积将有利于与免疫功能障碍和免疫抑制相关的转录程序。先进单细胞技术，特别是scRNA-seq，大幅扩展了对NK细胞功能多样性的理解。尽管肿瘤中NK细胞功能障碍已有充分文献记载，但特定的功能障碍转录谱先前未与KIR介导的教育和癌症结局联系起来。因此，本研究可能为未来比较分析不同临床结局相关激活性KIR/HLA-I基因型的NK细胞转录状态提供基础。根据Rebuffet等人建立的标记框架并借助TotalSeq抗体的单细胞表面蛋白测量，识别并注释了三种主要NK细胞亚群。尽管其相对比例在长生存期和短生存期相关基因型间相似，但NK3细胞显示出不同的结局相关转录谱。与先前研究一致，NK1细胞高表达GZMA、GZMB和PRF1；NK2细胞富集GZMK；适应性NK3亚群以GZMH表达为特征，支持其细胞毒性转录谱。差异基因表达分析揭示长生存期和短生存期相关基因型患者NK3群体转录程序的额外差异。适应性NK3细胞（以KLRC2、KLRC4、ZBTB38、GZMH、PRDM1和ArId5B过表达为特征）在较长生存期基因型患者中显示细胞因子IL32上调。IL-32与皮肤黑色素瘤患者生存期改善相关，通过促进NK细胞浸润和活化。此外，体外研究表明IL-32通过激活DR3和caspase-3增强NK-92细胞对癌细胞的细胞毒性活性，突显该NK亚群在长生存期患者中的有利特征。IL7R和IFNLR1受体在长生存期基因型NK3簇中也上调。IL7R具有调节NK细胞抗肿瘤活性的潜力，近期研究强调工程化CAR-NK细胞表达IL7R以展现优越增殖和抗肿瘤反应。IFNLR1在NK抗肿瘤反应中的直接证据仍未知，但近期发现表明肿瘤细胞中异位表达III型干扰素（IFN-λ）通过IFNLR1信号显著增加NK细胞浸润。事实上，人膀胱癌中肿瘤和基质细胞高表达IFN-λ3与更有效的免疫浸润（包括NK细胞）正相关。同样，NK3中观察到的SERPINB9表达升高与抗肿瘤反应正相关，因其中和泄漏到胞质中的颗粒酶，从而防止颗粒酶介导的NK细胞凋亡。相反，长生存期相关aKIR/配体基因型在NK3簇中显示HAVCR2（TIM-3）、IRF8、TRPM2、TRIB2和CD38等基因表达降低。TIM-3表达特征升高与多种癌症不良预后和NK细胞功能受损相关；因此，长生存期者NK3中观察到的降低表达进一步支持其抗肿瘤反应的潜在作用并突显其为治疗靶点。IRF8与NK细胞发育和成熟相关，其过表达与严重疾病相关。TRPM2是调节细胞内钙的关键离子通道，影响NK细胞抗肿瘤能力；TRPM2功能改变导致细胞毒性降低。TRIB2与肺癌细胞进展相关。CD38通过Sirt1/NF-κB信号调节NK细胞因子分泌，抑制肿瘤免疫监视，同时参与NAD?代谢、Ca2?信号、腺苷产生和降低细胞毒性。总体而言，这种基因调控模式支持长生存期患者NK3细胞增强的细胞毒性潜力，而短生存期患者表现出与迁移减少、免疫调节和NK3细胞耗竭一致的抑制性转录程序。除效应基因外，长生存期NK3特征包括核糖体转录本（RPL3、RPS4X）丰度增加，与翻译能力瞬时增加（“翻译激增”）一致。在NK细胞中，翻译适应性由转录程序和营养感应通路控制；例如，MYC支持NK细胞核糖体生物发生和翻译。翻译还与整合应激反应（ISR）和通过GCN2（EIF2AK4）的氨基酸感应耦合，后者可在营养限制下磷酸化eIF2α并抑制mTORC1输出。这些观察激发未来工作测试长生存期NK3细胞是否结合增强的翻译能力与ISR相关应激适应，理想情况下使用正交读数（如磷酸化蛋白测定）。值得注意的是，研究人员观察到长生存期NK3细胞中MHC-II反式激活因子CIITA上调，与抗原呈递程序的 intrinsic 诱导一致。活化的人NK细胞可表达HLA-DR，并通过与树突状细胞相互作用获得MHC-II分子（“MHC-II修饰”NK细胞），影响CD4+ T细胞反应。由于CIITA是MHC-II转录的主调控因子，其诱导表明NK3群体中的MHC-II信号可能不仅源于被动获取，值得蛋白质水平验证。比较长生存期和短生存期相关基因型时，NK3细胞中多达288个基因差异表达，尽管其中大多数在NK细胞生物学中的作用仍不清楚。需要进一步研究阐明它们对NK细胞功能、肿瘤免疫监视和癌症患者临床结局的潜在贡献。未来研究的一个重要方向是确定此处识别的循环NK细胞特征如何与肿瘤微环境中免疫细胞组成和空间组织的变化相关。近期纵向研究表明，治疗相关的肿瘤免疫微环境重塑可能比静态基线谱更准确地预测临床结局。解决这一关系需要前瞻性研究，纳入治疗前和治疗期间收集的配对、部位匹配的肿瘤样本以及外周血谱分析。尽管此处呈现的结果需要在更大转录组队列中进行功能验证和确认，但它们表明激活性KIR与其HLA-I配体之间的相互作用在癌症免疫监视中发挥决定性作用。这些相互作用似乎与在KIR2DS1/C2之外累积额外配体相互作用的患者适应性NK细胞中 divergent 转录程序相关。值得注意的是，KIR2DS1/C2相互作用的孤立存在似乎赋予抗癌保护，并与治疗后延长生存期相关。然而，这些发现应被解释为关联性而非因果性。此外，转录组分析在有限数量的选定受试者中进行，因此需要在更大的独立队列中验证。使用具有该基因型供者的NK细胞或旨在复制其转录谱的策略可能代表未来研究难治性肿瘤患者的有希望途径。研究局限性：本研究的主要局限性在于scRNA-seq队列规模有限，其被构思为探索性研究，可能限制发现的普适性。此外，不同恶性肿瘤间随访时间和临床特征的差异可能给生存分析引入变异性，尽管在实体瘤和血液系统肿瘤中观察到的一致模式支持主要发现的稳健性。基因型组间CMV流行率的差异也应考虑。最后，需要在更大的独立队列中进行功能和蛋白质水平验证以确认这些发现。
研究结论翻译：总之，aKIR/HLA-I相互作用与癌症患者结局相关。特别是，在无其他激活信号的情况下，KIR2DS1/C2相互作用与适应性NK细胞转录组谱及改善的生存期相关。理解有效的NK细胞介导的抗肿瘤免疫机制可能为难治性肿瘤患者提供新的机会。
