异体脂肪来源间充质干细胞/基质细胞（aAMSCs）单次静脉辅助治疗犬利什曼病（CanL）继发肾病的耐受性与疗效评价

《Animals》：Evaluation of the Tolerability and Efficacy of Adjuvant Treatment with Adipose Mesenchymal Stem/Stromal Cells in Dogs with Kidney Disease Secondary to Leishmaniosis

　　

研究人员评估了异体脂肪来源间充质干细胞（allogeneic adipose-derived mesenchymal stem cells, aAMSCs）治疗犬利什曼病（canine leishmaniosis, CanL）继发肾病犬的耐受性与疗效。在这项非盲法、单中心、为期3个月的研究中，20只犬接受常规治疗（conventional treatment, CT；n = 10）或常规治疗加单次静脉剂量aAMSCs（CT + aAMSCs；n = 10）。研究人员在第0、30和90天使用血浆和尿液生物标志物评估疗效。在两组（CT，n = 6；CT + aAMSCs，n = 7）中，研究人员通过闪烁显像估算肾小球滤过率（glomerular filtration rate, GFR），并进行尿液蛋白质组学分析。未观察到严重不良事件，尽管2只犬出现短暂胃肠道事件。各时间点肾脏参数未出现显著组间差异。组内分析显示，两组尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白/肌酐比值（urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin-to-creatinine ratio, uNGAL/c）均显著降低，而尿蛋白/肌酐比值（urinary protein-to-creatinine ratio, UPCR）仅在CT + aAMSCs组显著降低。纵向混合效应分析显示，任何所评估变量均无显著组×时间交互作用。尿液蛋白质组学在T₉₀鉴定出4个蛋白质条目在CT + aAMSCs组丰度较高，尽管均匀流形近似与投影（uniform manifold approximation and projection, UMAP）未显示组间分离。单次静脉aAMSCs剂量耐受良好，但相较常规治疗未提供肾脏获益。进一步研究应评估替代给药方案。

CanL继发肾病是影响患犬健康和生存的重要并发症。其肾脏病理与宿主免疫反应不足、免疫复合物沉积及巨噬细胞清除寄生虫能力不足等机制相关，现有治疗主要控制寄生虫，不能立即作用于病原或失控免疫反应，部分个体尽管接受治疗仍出现肾病进展，因此需要寻找辅助治疗。研究人员开展的这项初步、前瞻性、非盲法、对照、区组随机、单中心研究，随访3个月，旨在评估在常规治疗基础上加用单次静脉aAMSCs的耐受性与疗效，假设aAMSCs耐受良好并能改善肾功能。研究结论为：单次静脉aAMSCs总体耐受良好，未发现可直接归因于细胞给药的严重不良事件，但与单纯常规治疗相比未证明额外肾脏获益；其意义在于支持短期耐受性，但不支持单次剂量方案的额外临床获益，并提示未来应评估重复给药等替代方案。

关键技术方法概述（不超过250字）：研究队列为2019—2022年在西班牙Extremadura大学兽医教学医院前瞻性招募的20只客户拥有犬，均诊断为LeishVet（犬利什曼病临床分期体系）III/IV期CanL并继发慢性肾病（chronic kidney disease, CKD），伴UPCR > 1及符合CKD的临床与分析改变，并按IRIS（International Renal Interest Society，国际肾病研究学会）分期；采用区组随机分为CT组和CT + aAMSCs组，随访T₀、T₃₀、T₉₀。评估包括临床与影像学耐受性监测、血浆和尿液生物标志物、闪烁显像估算GFR，以及超高效液相色谱-串联质谱（ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UHPLC-MS/MS）尿液蛋白质组学与纵向混合效应模型；aAMSCs为健康供犬脂肪来源、单次静脉给药1–1.5 × 10⁶个/kg。

3.1 动物：通过20只犬随机分组及基线和纵向临床、实验室资料分析，发现两组在年龄、性别分布、血浆肌酐（plasma creatinine, pCr）、UPCR和疾病严重度方面存在基线不平衡；随访中3只犬因既存CKD进展死亡（CT组2只，CT + aAMSCs组1只），临床、实验室和尸检资料未提示与aAMSCs给药直接相关，T₉₀评估时CT组8只、CT + aAMSCs组9只存活；闪烁显像eGFR和尿液蛋白质组学仅在13只犬（CT，n = 6；CT + aAMSCs，n = 7）完成，原因为经济限制和部分主人拒绝额外操作。

3.2 aAMSCs注射的短期耐受性：通过在输注期间及T₃₀、T₉₀随访中进行临床和影像学监测，发现10只接受aAMSCs的犬中2只（20%）出现短暂胃肠道不良事件，1只恶心、1只呕吐，经降低输注速度和单次静脉马罗匹坦（1 mg/kg）处理后缓解；随访超声心动图、腹部超声和胸部X线未发现可归因于aAMSCs给药的异常。

3.3 血液和尿液生物标志物：通过各时间点血浆和尿液生物标志物检测及纵向混合效应分析，发现pCr、血浆尿素（plasma urea, pUrea）、血浆胱抑素C（plasma cystatin C, pCysC）、血浆对称性二甲基精氨酸（plasma symmetrical dimethylarginine, pSDMA）等无显著组间差异；组内uNGAL/c在两组T₀至T₉₀均显著下降，UPCR仅在CT + aAMSCs组显著下降（p = 0.019），但uNGAL/c、尿Tamm–Horsfall蛋白/肌酐比值（urinary Tamm–Horsfall protein-to-creatinine ratio, uTHP/c）和UPCR均无显著组×时间交互作用，基线校正后结论一致。

3.4 闪烁显像估算的eGFR：通过13只犬的肾闪烁显像（^99mTc-DTPA）评估eGFR，发现两组随访中eGFR呈数值升高，但组内均未达统计学显著，组间在T₀、T₃₀、T₉₀均无显著差异，纵向混合效应分析亦无显著组×时间交互作用，基线校正后不变。

3.5 尿液蛋白质组学：通过UHPLC-MS/MS分析6只CT犬和7只CT + aAMSCs犬的尿液蛋白质组，共鉴定368种蛋白质；T₀组间无显著差异，T₃₀无显著差异但4个蛋白质条目呈CT + aAMSCs组较高趋势，T₉₀这4个条目满足筛选标准且在CT + aAMSCs组丰度更高，包括两个骨桥蛋白（osteopontin，E2R161；A0A5F4BRW4）条目、WAP四二硫键核心结构域蛋白2（WAP four-disulfide core domain protein 2，F1PDT8）和含肽酶S1结构域蛋白（peptidase S1 domain-containing protein，F1PCE8）；但UMAP未见组间分离，主成分分析（principal component analysis, PCA）未见一致聚类，功能富集分析未发现显著富集通路，作者强调不能据此建立aAMSCs给药与这些蛋白升高的因果关系。

讨论部分总结：作者指出aAMSCs在犬中总体耐受性较好，短暂胃肠道事件可能与二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide, DMSO）冷冻保护剂或胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）有关，但未确认；影像学随访未见额外异常。疗效方面，pCr、pUrea、pCysC、pSDMA和eGFR均未显示组间或组×时间差异；uNGAL/c在两组均下降、UPCR仅在CT + aAMSCs组内显著下降，但所有犬均接受雷米普利，且混合效应分析无组×时间交互，不能证明aAMSCs额外获益。尿液蛋白质组学中T₉₀升高的蛋白与炎症、纤维化或既往CanL肾病相关，但不能解释为细胞治疗促进纤维化或加速疾病进展。局限性包括基线不平衡、样本量小、eGFR和蛋白质组学仅13只、随访死亡导致缺失、单次剂量和随访较短、未进行系统肾脏组织病理学评估；未来需研究重复剂量、不同细胞浓度或间充质干细胞来源细胞外囊泡等方案。

研究结论（译）：单次静脉给予aAMSCs总体耐受良好，研究期间未发现可直接归因于细胞给药的严重不良事件。然而，与单纯常规治疗相比，未证明肾功能有额外改善。尽管随访期间观察到蛋白尿和肾小管损伤尿液生物标志物下降，但纵向混合效应分析（包括基线校正模型）未显示任何所评估肾功能或损伤生物标志物存在统计学显著的组×时间交互作用，表明这些变化不能特异归因于aAMSCs给药。鉴于该初步研究具有探索性、样本量有限且采用单次给药方案，仍需进一步对照研究评估替代给药方案，尤其是重复剂量，是否可提供额外肾脏获益。