《Critical Reviews in Oncology/Hematology》：Extracellular Vesicles in Soft Tissue Sarcomas: from Tumor Biology to Clinical Translation
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软组织肉瘤（STS）是一组罕见且高度异质性的间叶源性恶性肿瘤，占成人恶性肿瘤不足1%。其生物学多样性、独特的分子驱动因素及多变的临床行为持续挑战着诊断、预后分层与治疗管理。尽管手术、放疗和全身治疗已取得进展，仍有高达40%的局限期患者最终发生转移性复发，预后差
软组织肉瘤（STS）是一组罕见且高度异质性的间叶源性恶性肿瘤，占成人恶性肿瘤不足1%。其生物学多样性、独特的分子驱动因素及多变的临床行为持续挑战着诊断、预后分层与治疗管理。尽管手术、放疗和全身治疗已取得进展，仍有高达40%的局限期患者最终发生转移性复发，预后差且治疗选择有限。STS管理的主要局限在于缺乏能够动态反映疾病演变的可靠生物标志物；临床决策仍主要依赖组织病理学特征和系列影像学检查，仅提供静态信息，常无法捕捉肿瘤异质性、微小残留病灶（MRD）或早期分子复发。与多种上皮性恶性肿瘤不同，STS缺乏经验证的循环生物标志物用于纵向监测，凸显了对微创方法的需求，以支持风险分层、治疗监测和早期复发检测。在此背景下，细胞外囊泡（EVs），包括外泌体、微囊泡和大囊泡，已成为与肿瘤微环境（TME）细胞间通讯的关键介质。通过转运反映亲代细胞分子特征的蛋白质、脂质和核酸，EVs积极参与肿瘤进展、免疫调节、血管生成和转移播散。其在生物体液中的显著稳定性也使其成为液体活检应用的有吸引力的候选者。尽管既往综述已探讨癌症中的EV生物学、肉瘤来源EV或液体活检应用，但这些视角通常分别处理上述主题，未将EV货物（cargo）的组织学亚型特异性生物学功能与其在STS中的诊断、治疗和转化意义相整合。本综述在MISEV2023报告标准实施、GMP规模EV生产努力增加以及早期转化性肉瘤-EV临床队列出现的领域关键过渡阶段，弥补了这一空白。因此，研究人员整合了三个互补视角：(1)跨STS亚型的EV货物组织学亚型分层分析及其功能效应；(2)用于靶向治疗递送的工程化EV平台的开发；(3)罕见病临床实施所需的监管和转化路径的专门分析。为处理这些方面，研究人员在PubMed/MEDLINE、Web of Science和Scopus数据库中进行了文献检索，检索更新至2026年7月31日。检索策略使用自由文本术语，将EV概念（"extracellular vesicles" OR "exosomes" OR "microvesicles"）与肉瘤特异性关键词（"soft tissue sarcoma"、"Ewing sarcoma"、"liposarcoma"、"rhabdomyosarcoma"、"leiomyosarcoma"）及转化参数（"biomarker"、"liquid biopsy"、"MISEV2023"、"scalability"、"clinical translation"）相结合。特别关注符合MISEV指南的同行评审研究和近期临床与转化研究。现有证据在不同STS组织学亚型间仍不均衡，某些罕见亚型目前可用的专用EV数据有限或缺失，包括PEComa和腺泡状软组织肉瘤。基于这些证据，本综述围绕EVs在STS中的生物学、诊断、治疗和转化维度展开，从组织学亚型特异性TME相互作用到液体活检应用、工程化EV递送以及临床转化的技术和监管障碍。
研究背景与问题
软组织肉瘤（Soft Tissue Sarcomas, STS）是一组罕见且高度异质性的间叶源性恶性肿瘤，占成人恶性肿瘤不足1%。尽管手术、放疗与全身治疗不断进步，仍有高达40%的局限期患者最终出现转移性复发，预后差且治疗选择有限。当前STS管理面临的核心瓶颈是缺乏能够动态反映疾病演变的可靠生物标志物：临床决策主要依赖组织病理学特征与系列影像学检查，仅能提供静态信息，难以捕捉肿瘤异质性、微小残留病灶（Minimal Residual Disease, MRD）及早期分子复发。与多种上皮性恶性肿瘤不同，STS尚缺乏经验证的循环生物标志物用于纵向监测。细胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）因其在生物体液中的稳定性及货物（cargo）对亲代肿瘤细胞分子特征的真实反映，被视为液体活检与治疗递送的有力候选。然而既往综述多将EV生物学、肉瘤来源EV及液体活检应用分开讨论，未将组织学亚型特异的EV货物功能与其诊断、治疗和转化意义加以整合。本综述即在MISEV2023报告标准实施、良好生产规范（Good Manufacturing Practice, GMP）规模EV生产推进及早期肉瘤-EV转化队列涌现的背景下，弥补上述整合性空白。
研究内容与结论
研究人员通过检索PubMed/MEDLINE、Web of Science和Scopus（更新至2026年7月31日），采用EV概念词、肉瘤特异性关键词与转化参数组合的自由文本策略，重点关注符合MISEV指南的同行评审研究及近期临床转化研究，从三个互补视角展开整合分析：跨STS亚型的EV货物组织学分层及其功能效应、工程化EV靶向治疗递送平台的开发、以及罕见病临床实施所需的监管与转化路径。研究指出，现有证据在不同组织学亚型间分布不均，部分罕见亚型（如PEComa与腺泡状软组织肉瘤）尚无专用EV数据，因此不能假定EV技术在全STS范围内已具备广泛临床就绪性。
关键技术方法
研究采用系统性文献综述方法，检索PubMed/MEDLINE、Web of Science与Scopus三大数据库，检索时限截至2026年7月31日，以自由文本词组合EV概念、肉瘤亚型关键词与转化参数，优先纳入符合MISEV指南的同行评审研究及近期临床与转化研究。分析框架包括组织学亚型分层的EV货物功能分析、工程化EV递送平台评估，以及监管与转化路径分析；因各研究分离方案与生物体液处理异质性大且单研究样本量有限，未进行荟萃分析合并。
研究结果
1. 引言：通过 unmet needs 梳理指出，STS在早期诊断、预后判断、随访、MRD、治疗反应、耐药与转移预测等环节均存在临床缺口，EVs在液体活检、分子签名、系列监测、货物分析、动态变化、耐药机制及转移前龛生物标志物等方面具潜在补充价值。
2. STS中细胞外囊泡的生物学：通过MISEV框架下的分类分析，明确外泌体（30-150 nm）、微囊泡（100-2000 nm）与凋亡小体（>1 μm）在发生来源、粒径与分子组成上的差异，且均通过转移生物活性货物参与细胞间通讯。
2.2.1 脂肪肉瘤来源EVs：通过机制研究总结发现，miR-25-3p与miR-92a-3p经TLR7/8激活肿瘤相关巨噬细胞、增加IL-6分泌形成前馈龛；MDM2 DNA经囊泡转移至前脂肪细胞后削弱p53信号、促进增殖迁移与MMP-2产生，提示EVs可分别经炎症激活与基质重编程两条互补途径重塑龛。
2.2.2 尤文肉瘤来源EVs：通过货物功能分析发现，EWS-FLI1-CD99轴调控的miRNA可抑制NF-κB信号、限制增殖迁移并促进神经分化，显示EV信号并非一致致癌；着丝粒周围重复RNA可激活基质细胞的DNA损伤、衰老与天然免疫程序，IGF2BP3与FOXP4-AS1则倾向促进PI3K-AKT依赖的运动与播散，EV诱导的细胞因子产生还可损害树突状细胞成熟。
2.2.3 横纹肌肉瘤来源EVs：通过亚型比较发现，EV蛋白在基质重塑、黏附与细胞周期控制上汇聚于成纤维细胞活化、内皮增殖与侵袭；腺泡型与胚胎型RMS的EV miRNA谱差异可能支持无创亚型判别，但多数数据仍属描述性。
2.2.4 其他STS来源EVs：通过有限模型总结发现，纤维肉瘤膜结合MT1-MMP可将蛋白水解活性定位于细胞外空间促进侵袭，平滑肌肉瘤EV相关miRNA则经成纤维细胞活化间接实现基质重塑。
2.3 EVs与STS中TME重编程的交互：通过四类过程归纳，将证据组织为基质重塑、免疫逃逸、缺氧驱动血管生成与转移能力；EZH2促进CAF迁移与IL-6释放而PRKCB利于伪足形成，EWS-FLI1 mRNA转移可致CAF p53依赖生长停滞，体现重编程的异质性；DKK2-Wnt信号抑制NF-κB并促IL-10分泌，Wnt-β-catenin降低CXCL9/CXCL10限制T细胞募集，共同构成炎症性但功能性免疫抑制的微环境；缺氧增加EV释放并富集HIF-1α相关转录本与miR-210，经内皮细胞摄取诱导VEGFA与血管生成。
3. STS中EVs的临床潜力与转化前景：通过特征分析指出，EVs脂质双层保护货物免受酶解、支持重复采样与纵向监测，且同时反映肿瘤细胞与TME，宜与影像、ctDNA、循环肿瘤细胞（CTCs）及人工智能工具整合而非替代现有诊断。
3.2 用于MRD的液体活检：通过对比分析指出，ctDNA受低肿瘤突变负荷、基因组改变异质与DNA释放变异限制，而EVs由存活肿瘤细胞主动分泌并封装多组学货物；尤文肉瘤中点击化学富集平台（"Click-Beads"）结合RT-ddPCR可实现EWSR1融合转录本的灵敏定量，双表位捕获系统（CaReCa）可选择性富集CD99+/B7-H3+双阳性EVs；但检测标准化、大队列前瞻验证与MRD阳性阈值确立仍是常规应用前提。
3.3 工程化细胞外囊泡用于药物递送：通过平台评估指出，EVs具生物相容性、低免疫原性与保护货物能力；多柔比星经EV递送可提高胞内蓄积并降低脱靶毒性，负载siRNA或抑癌miRNA可抑制增殖、侵袭与转移；工程策略分为表面修饰与货物装载，杂交外泌体-脂质体系统兼具靶向性与可扩展性，但GMP规模化生产、标准化分离表征、可重复装载及药代与长期安全性评价仍限制转化。
3.4 未来展望：基于EV的联合策略：通过策略归纳提出，负载STING激动剂等促炎货物可重编程免疫抑制TME、逆转免疫治疗耐药；表面装饰肉瘤特异性归巢肽或抗CD99、NY-ESO-1抗体可提升肿瘤趋向性，并与放疗联合经递送放射增敏分子或靶向DNA损伤反应的siRNA增强敏感性；针对EWS-FLI1、PAX3/7-FOXO1等融合癌基因的基因沉默策略亦具潜力，但均以临床前为主。
4. EV分离与临床转化的方法学挑战与标准化：通过方法学分析指出，肿瘤特异EV签名需从循环EV背景中区分，且STS低发病率与分子异质性限制充分把握度验证队列的可得性；现有诊断敏感性与特异性多来自回顾性单中心小样本研究，需按MISEV2023在多中心注册队列中前瞻验证；超速离心、尺寸排阻色谱与沉淀法常共分离蛋白聚集体、脂蛋白等非囊泡污染物，且供体特征、细胞来源、培养条件与生产方案影响产量、货物与活性；MISEV2023要求单颗粒分析、拓扑学验证与相对纯度定量；规模化生产正通过中空纤维生物反应器、连续切向流过滤（TFF）与自动化色谱推进；EVs在监管框架中被分别归类为生物制品、细胞治疗或先进治疗药品（ATMPs），分类不确定性叠加临床试验设计局限仍待解决。
5. 未来方向：构建STS中整合式EV临床网络：通过路线图分析提出三阶段转化路径：短期（1-3年）聚焦与MISEV2023一致的STS血浆前分析标准操作规程（SOPs） harmonization及手术前后系列采样的前瞻性单中心试点队列，以界定基线EV清除动力学与信噪阈值；中期（3-5年）依托EURACAN、SARC等国际罕见病网络开展多中心前瞻验证，确认组织学特异的EV多组学面板；长期（>5年）将验证后的EV生物标志物动态整合为伞式与生物标志物驱动适应性试验的次要终点或分层参数，并推进表面工程化载药EV进入早期临床试验。配套需建设国家与欧洲EV生物样本库网络，结合回顾性与前瞻性纵向采样，并以人工智能与机器学习整合高维多组学与影像组学数据，用于分层、疗效预测与转移风险评估。
讨论与结论
综述在讨论中强调，EVs已从细胞碎片转变为有前景的治疗载体，但其临床转化仍处早期；当前证据高度依赖组织学亚型，多种罕见STS亚型表征不足或缺乏专用EV研究，不能推定全STS范围的广泛临床就绪性。克服方法学与标准化挑战将决定EVs能否实现其作为可靠诊断与治疗工具的潜力，进展取决于分离技术、分析方法、严谨临床验证及研究者、临床医生、产业界与监管机构的紧密协作。结论部分译为：细胞外囊泡已成为STS生物学的核心调控者，不仅作为TME通讯介质，也作为临床相关分子信息的载体。越来越多的证据表明，STS来源EVs通过传递亚型特异性核酸、蛋白质与信号分子，参与肿瘤进展、免疫调节、血管生成、转移播散与治疗耐药。这些生物学特性使EVs成为诊断与治疗应用的高度有吸引力的候选者。从临床角度看，EVs作为微创生物标志物具有重要前景，可支持液体活检用于实时疾病监测、患者分层与MRD检测；同时EV工程进展正促成化疗药物、RNA治疗与靶向分子干预的新型递送系统，为更精准和个体化的治疗策略铺路。尽管取得上述进展，EV技术常规整合入临床实践前仍存在实质性挑战：分离与表征方法的标准化、稳健肉瘤特异EV签名的确定、可扩展的GMP合规生产流程及严谨的临床验证是成功转化的必要前提。鉴于STS的罕见性与异质性，多中心协作、协调一致的生物样本库基础设施及人工智能分析工具的整合，对于生成临床实施所需的高质量数据集至关重要。总体而言，EVs代表了生物标志物发现与治疗创新之间的独特交汇点；EV生物学、生物工程与转化研究的持续进展，可能最终改变STS的管理，实现动态疾病监测与更有效、个体化的治疗干预，从而推动这些具有挑战性的恶性肿瘤迈向新一代精准医学方法。
