蜂毒活性成分作为多靶点抗炎治疗药物：分子机制、网络药理学、分子对接及纳米递送系统的综合评述

《Inflammopharmacology》：Bee venom bioactive compounds as multi-target anti-inflammatory therapeutics: a comprehensive review of molecular mechanisms, network pharmacology, molecular docking, and nano-formulated delivery

炎症是多种疾病的主要潜在病因之一。尽管现有的抗炎治疗药物如非甾体抗炎药（NSAIDs）和皮质类固醇能够有效治疗炎症，但这些药物在临床使用中因严重的副作用和特异性差而存在诸多问题。蜂毒（BV）因其抗炎和免疫调节特性而成为一种有前景的天然治疗手段，这归功于其所含的生物活性化合物，如蜂毒肽（melittin）和磷脂酶A₂（PLA₂）。BV通过抑制NF-κB激活、抑制MAPK信号传导、下调诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶-2（COX-2）、促进调节性T细胞（Treg）极化以及激活Nrf2/HO-1抗氧化通路来调节多种炎症信号通路。此外，BV通过巨噬细胞极化、调节NF-κB、MAPK、Nrf2/HO-1和ROS信号传导、抑制PI3K/Akt信号通路、抑制TGF-β诱导的促纤维化基因表达以及细胞因子调节来促进组织再生，从而增强伤口愈合。近年来纳米技术在提高稳定性、生物利用度、靶向递送和降低毒性方面的进展，使BV成分的治疗功效得到提升。在平行网络药理学背景下，PPI网络分析、GO富集、KEGG通路分析、分子对接研究和分子动力学模拟揭示了BV成分与各种炎症肽之间的相互作用。通过整合分子药理学、纳米医学和计算方法，本综述全面概述了BV生物活性化合物的治疗潜力，并强调了其作为多靶点抗炎候选药物开发的未来机遇。然而，仍需进一步的实验和临床研究来确定其疗效、安全性、药代动力学特征和治疗适用性。

引言部分指出，炎症是机体抵御组织损伤和感染的基本免疫反应，但慢性或失调性炎症是类风湿性关节炎、炎症性肠病和心血管疾病等多种衰弱性疾病的病理生理基础。传统抗炎疗法如非甾体抗炎药（NSAIDs）和皮质类固醇仍是临床治疗的基石，但其长期使用常因胃肠道、心血管、代谢及免疫抑制等不良反应而受限，凸显了开发更安全、更具靶向性治疗策略的必要性。蜂疗已有数千年历史，20世纪后半叶证实其药理活性成分具有治疗作用。蜂毒（BV）是由雌性意大利蜜蜂（Apis mellifera）毒腺产生的复杂生物分泌物，由肽类、酶类、生物胺和低分子量有机化合物组成的异质性混合物。其中，肽类成分尤其是蜂毒肽（melittin）和磷脂酶A₂（PLA₂）被认为是负责抗炎、镇痛、神经保护和抗癌活性的主要药理活性物质。尽管取得了这些令人鼓舞的药理学发现，粗制BV及其分离的生物活性化合物的临床转化仍受到其固有毒性和免疫原性的严重制约。蜂毒肽是一种强效膜作用肽，在高浓度下能够诱导溶血和细胞毒性。PLA₂是导致IgE介导的超敏反应和致敏个体危及生命的过敏反应的主要过敏原。为克服这些挑战，基于纳米技术的药物递送方法应运而生，以提高BV肽的治疗指数。多种纳米包封策略，包括脂质体、聚合物纳米粒、脂质基纳米载体（NPs）等，被用于递送蜂毒肽，以提高理化稳定性、延长循环时间和实现控制/持续释放。尽管在药物递送领域已取得进展，但生物信息学和计算药理学领域已彻底改变了天然产物的研究。网络药理学的应用偏离了传统的单靶点技术，能够从靶点预测、PPI网络生成和通路富集分析等方面系统阐明BV肽的药理活性。分子对接和分子动力学模拟进一步补充了这些系统级分析，提供了肽-蛋白质相互作用、结合稳定性以及涉及NF-κB、COX-2、TNF-α等关键炎症介质的构效关系的原子分辨率见解。本综述提供了BV肽药理学、纳米制剂策略、伤口愈合应用、网络药理学、分子对接和分子动力学分析的综合多学科概述。通过将机制见解与新兴纳米医学和计算方法相联系，本综述旨在建立一个转化框架，既突出治疗潜力，也指出推进蜂毒来源肽向下一代多靶点抗炎疗法发展所面临的剩余挑战。

蜂毒：组成及其生物效应部分指出，蜂毒是一种透明、微酸性（pH 4.5–5.5）的水性分泌物，其组成因物种、地理来源、季节和蜂群生理状态而异。生物活性化合物（肽类、酶类和生物胺）的原理、性质及其生物效应总结于表1、表2和表3中。表1列出肽类：低分子量生物活性多肽；表2列出酶类：高分子量催化蛋白；表3列出生物胺：低分子量信号分子。

蜂毒生物活性化合物抗炎活性的分子机制部分指出，蜂毒的抗炎活性归因于其多种生物活性化合物（包括肽类、酶类和其他低分子量成分）的协同作用。这些成分在相对丰度、分子结构和生物学功能方面存在差异，使其能够调节多种炎症信号通路和细胞因子网络。蜂毒的主要生物活性化合物及其在干燥蜂毒中的大致比例、分子特征和主要抗炎分子靶点总结于表4中。

蜂毒肽部分指出，蜂毒肽是蜂毒中含量最丰富的生物活性肽，被广泛认为是其抗炎活性的主要介质。尽管在高浓度下具有强效膜活性，但越来越多的证据表明，亚细胞毒性剂量的蜂毒肽通过同时靶向多种炎症信号通路发挥广泛的免疫调节作用。蜂毒肽抑制NF-κB信号通路，该通路是先天性和适应性炎症反应的中心调节因子。蜂毒肽干扰由Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）、脂多糖（LPS）共受体CD14、血小板衍生生长因子受体-β（PDGFRβ）和NF-κB必需调节因子（NEMO/IKKγ）启动的炎症信号传导。这种上游抑制阻止了IκB激酶（IKKα/β）复合物的磷酸化，导致抑制分子IκBα的稳定并使其免于被蛋白酶体降解。结果，NF-κB p65/p50异二聚体复合物被限制在细胞质中，不发生核转位以激活炎症基因。研究发现蜂毒肽能够与NF-κB复合物的p50分子结合并降低其对κB结合位点的亲和力。NF-κB信号传导的协调抑制导致多种炎症介质显著下调，包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、环氧合酶-2（COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS），最终减少一氧化氮（NO）和前列腺素E2（PGE2）的产生。蜂毒肽的主要抗炎机制如图1所示。图1展示了蜂毒肽抗炎作用的分子机制，包括抑制TLR2、TLR4和CD14受体以及PDGFRβ相关炎症信号传导、抑制IKK活性和IκBα的磷酸化与降解、抑制NF-κB p50与DNA结合及其核转位，以及由此导致的TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2、iNOS、NO和PGE2等炎症介质表达的降低。

磷脂酶A₂（bvPLA₂）部分指出，蜂毒中另一种重要的酶是磷脂酶A₂（PLA₂）。该酶根据其浓度发挥双重生物学功能，既是促炎过敏原，也是具有免疫调节特性的治疗剂。它是一种分泌型钙依赖性磷脂酶，通过水解膜磷脂sn-2位产生花生四烯酸和溶血磷脂，后者是促炎类花生酸生物合成的前体。因此，在较高浓度下，bvPLA₂参与急性炎症的启动。相反，越来越多的证据表明，低剂量bvPLA₂发挥强效抗炎和免疫调节作用，且这些作用在很大程度上独立于其催化活性。这种功能转换凸显了bvPLA₂药理学的复杂性，并强调了剂量和生物学背景在决定其治疗结果中的重要性。在机制上，bvPLA₂与树突状细胞上表达的甘露糖受体（CD206）结合，触发环氧合酶依赖性前列腺素E₂（PGE₂）的产生。PGE₂随后激活CD4⁺ T细胞上的EP2受体，促进其分化为CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Tregs），从而抑制过度免疫激活并促进炎症消退。此外，bvPLA₂上调免疫检查点分子细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA-4）和程序性细胞死亡蛋白1（PD-1），同时减少Treg群体内的凋亡信号，从而延长其存活时间并增强其免疫抑制功能。bvPLA₂的主要免疫调节和抗炎机制如图2所示。图2展示了蜂毒中磷脂酶A₂（bvPLA₂）的免疫学机制，阐明了其与CD206阳性树突状细胞的相互作用、COX依赖性PGE2合成、CD4⁺ T细胞上EP2受体的激活、分化为CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞、CTLA-4和PD-1表达增加、凋亡减少以及随后对过度免疫激活的抑制和炎症消退。

其他抗炎蜂毒肽部分指出，蜂毒明肽（apamin）具有显著的抗炎活性，能够抑制环氧合酶-2（COX-2）并减少主要炎症介质的产生，包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）和一氧化氮（NO）。在人角质形成细胞中，TNF-α和干扰素-γ（IFN-γ）的炎症刺激主要通过激活NF-κB和STAT信号通路诱导促炎细胞因子和Th2相关趋化因子的产生。蜂毒明肽处理通过抑制TNF-α和IFN-γ诱导的细胞因子和趋化因子产生以及下调NF-κB和STAT通路激活来减少这些反应。据报道，蜂毒明肽能够穿过血脑屏障并影响神经系统功能。在血管壁中，它通过抑制PDGF-BB诱导的Akt和Erk1/2磷酸化来抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移；抑制PDGF-BB/Akt/Erk通路可能使蜂毒明肽调节异常的血管细胞增殖和迁移。阿多拉平（adolapin）是一种由103个氨基酸残基组成的阳离子多肽，被认为是蜂毒中的生物活性肽之一。该多肽对炎症的作用主要归因于其阻断花生四烯酸介导的炎症的作用。阿多拉平作用于环氧合酶，从而阻止前列腺素的形成。还有证据表明阿多拉平抑制人血小板中的脂氧合酶作用并与磷脂酶A₂（PLA₂）相互作用。肥大细胞脱颗粒肽（MCD）或肽401是一种蜂毒肽，以浓度依赖性方式影响炎症反应。在低浓度（<0.1 mg/mL）下，MCD增强肥大细胞脱颗粒和组胺释放，导致蜂毒反应典型的红肿和炎症。该机制可能涉及IgE依赖性肥大细胞激活或直接与FcεRI受体结合，模拟IgE。此外，MCD的脱颗粒效应与细胞内Ca²⁺水平升高有关，促进肥大细胞激活。另一方面，高剂量MCD由于抑制组胺释放而引发抗炎反应。其机制被认为涉及MCD与IgE之间形成分子间键，导致构象改变抑制IgE作用，以及直接抑制IgE/FcεRI结合。在大鼠模型中，MCD抑制角叉菜胶诱导的足爪水肿和松节油诱导的关节炎症，表明其具有减弱急性炎症反应的强大能力。这些化合物的浓度低于蜂毒肽和bvPLA₂，但其互补的分子活性增强了蜂毒的整体抗炎功效。

蜂毒生物活性化合物的纳米颗粒介导递送部分指出，蜂毒肽的固有毒性和PLA₂的免疫原性对粗制BV或分离的生物活性成分的直接治疗使用构成了重大障碍。基于纳米技术的递送系统已成为克服这些限制的有前景的策略，通过改善BV衍生治疗剂的稳定性、生物分布和控制释放来实现。纳米包封可以将肽物理隔离在纳米载体内，减少非特异性膜相互作用，并可能最大限度地降低全身毒性。纳米载体表面的PEG化通过减少网状内皮系统的识别和清除来延长全身循环，而用特定靶向配体进行功能化可能促进在炎症或肿瘤部位的优先摄取。微环境的理化性质也可作为刺激响应性纳米载体的触发因素，这些纳米载体只能在特定的生物微环境（如炎症或肿瘤部位，其局部pH和/或氧化还原状态不同）中递送其有效载荷。已研究的用于递送BV及其生物活性成分的主要纳米载体系统及其关键特征和报道的治疗应用总结于表5中。表5列出蜂毒递送的纳米载体系统：性质、组成和抗炎结果。

蜂毒在伤口愈合中抗炎作用的分子机制部分指出，伤口愈合是一种复杂的生物学现象，通过协调的细胞和分子事件恢复组织结构。这涉及止血、炎症、增殖和重塑四个阶段的完成。这些阶段之间的过渡需要仔细调节炎症和再生反应，因为过度或持续的炎症可能阻碍后续的组织修复。蜂毒由至少18种药理活性成分组成。这些生物活性成分可能通过对炎症和再生过程的互补效应促进伤口愈合。BV的主要生物活性化合物及其在伤口愈合中的作用总结于表6中。此外，BV调节炎症和再生信号通路以加速伤口愈合的分子机制如图3所示。图3展示了蜂毒通过协调调节多种炎症和再生信号通路促进伤口愈合。它抑制NF-κB/MAPK信号传导，导致促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）产生减少。蜂毒还促进巨噬细胞从促炎M1表型向抗炎M2表型极化，通过减少活性氧（ROS）和增加谷胱甘肽（GSH）水平增强Nrf2/HO-1介导的抗氧化防御，并提高抗炎细胞因子IL-10。此外，PI3K/Akt和TGF-β/Smad通路的调节有助于平衡的组织重塑、增强再上皮化和加速伤口修复。

巨噬细胞极化（M1→M2转变）部分指出，巨噬细胞在伤口愈合中发挥双重作用，从早期阶段的促炎（M1）状态过渡到愈合进展中的抗炎和修复（M2）状态。该过程的失调是慢性不愈合伤口的特征。蜂毒及其主要成分蜂毒肽已被证明能极大影响这种平衡。蜂毒肽诱导巨噬细胞M2极化，高表达CD206和精氨酸酶I标记物，低表达CD16/32标记物。此外，蜂毒来源的磷脂酶A₂（bvPLA₂）已被证明通过靶向脂肪组织巨噬细胞并与CD206甘露糖受体相互作用来缓解M1/M2失衡，从而促进免疫调节效应。这种转变对于减少促炎细胞因子分泌和启动伤口愈合的增殖期至关重要。

NF-κB和MAPK信号调控部分指出，控制炎症发生和进展的两个主要通路是核因子-κB（NF-κB）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路。BV和蜂毒肽通过抑制巨噬细胞和皮肤细胞等多种细胞中的这两个通路发挥非常有效的抗炎作用。蜂毒肽通过阻断IκB降解和阻止p50和p65亚基核转位来抑制NF-κB激活。具体而言，蜂毒肽已被证明直接与NF-κB的p50亚基结合，从而失活iNOS和COX-2等炎症基因的转录。在MAPK通路中，蜂毒肽抑制细胞外信号调节激酶（ERK）、c-Jun N末端激酶（JNK）和p38 MAPK的磷酸化。这些抑制作用导致一氧化氮（NO）和前列腺素产生的显著减少，后者是伤口环境中组织损伤的主要介质。

Nrf2/HO-1和ROS调控部分指出，氧化应激以活性氧（ROS）的过度产生为特征，是伤口闭合的显著障碍。蜂毒肽刺激核因子红细胞2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路，该通路对抗炎作用至关重要。BV处理已被证明可减少多种模型（包括成纤维细胞系）中的ROS形成和氧化损伤。通过增加超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）等抗氧化酶的水平，BV有助于维持氧化还原平衡，从而保护细胞免受氧化诱导的凋亡并促进组织再生。

PI3K/Akt和TGF-β/Smad通路部分指出，磷酸肌醇3-激酶（PI3K）/Akt和转化生长因子-β（TGF-β）/Smad通路对细胞存活和组织重塑至关重要。蜂毒肽已被证明抑制PI3K/Akt信号传导，这有助于其抑制炎症反应的能力。在组织重塑和纤维化方面，BV成分发挥调节作用。这是因为蜂毒肽通过TGF-β引起的TGFβRII-Smad和MAPK通路干扰促纤维化基因的诱导。然而，另一方面，用BV治疗糖尿病伤口已被证明能增加通常较低的TGF-β水平，从而增加胶原蛋白和血管内皮生长因子（VEGF）的合成，两者对血管生成至关重要。

细胞因子调节部分指出，细胞因子协调可以说是BV影响伤口愈合的最直接方式。BV及其成分已被发现抑制促炎细胞因子如TNF-α、IL-1β和IL-6的表达。同时，BV免疫治疗已被证明能增强抗炎细胞因子IL-10的产生，进一步稳定促消退环境。趋化因子（如IL-8）的减少也限制了免疫细胞的过度浸润，防止不必要的组织破坏。

蜂毒在伤口愈合中的体内效应部分指出，近期研究通过不同方法进一步验证了BV加速伤口闭合的潜力。研究全蜂毒、分泌型磷脂酶（sPLA₂）和AcSecapin-1对大鼠皮肤伤口愈合的影响。蜂毒和sPLA₂显著减少炎症细胞浸润，表明其在伤口愈合早期炎症阶段的抗炎潜力。PLA₂还增加油酸水平，可能通过促进炎症消退有助于组织修复。AcSecapin-1增强IL-8和TGF-β1表达，表明其在调节炎症、细胞外基质重塑和组织再生中的作用。埃及的一项研究测试了负载蜂毒的PVA-壳聚糖水凝胶用于糖尿病伤口，该制剂加速伤口愈合，显示出与双氯芬酸相当的抗炎活性，伤口组织中IL-6较低，羟脯氨酸和谷胱甘肽较高。在一项2018年的研究中，评估了对照组、糖尿病组和蜂毒（BV）治疗糖尿病小鼠切除皮肤伤口的宏观变化。损伤后三天，所有组的伤口形态相当。然而，到第15天，BV治疗的糖尿病小鼠表现出与非糖尿病对照组小鼠相似的伤口闭合程度，而未治疗的糖尿病小鼠伤口愈合明显延迟。蜂毒治疗通过增强伤口组织内巨噬细胞募集和存活显著加速伤口闭合。在机制上，这些效应与Nrf2/Ang-1/Tie-2信号通路的恢复、巨噬细胞凋亡的抑制和血管生成的促进有关，从而改善糖尿病伤口的愈合。在一项体外研究中，评估了蜂毒对犬脂肪组织来源间充质干细胞（MSCs）在一系列浓度下的影响。蜂毒表现出剂量依赖性细胞毒性，20和40 ppm浓度显著降低细胞活力，而较低浓度也降低细胞代谢活性。划痕愈合实验表明，在测试剂量范围内蜂毒未增强MSC迁移或增殖，表明在该体外模型中无直接伤口愈合效应。作者认为，尽管先前体内研究已证明蜂毒通过增强胶原沉积、血管生成和抑制炎症介质对伤口愈合有益，但这些效应在分离的MSC培养中未能重现。他们提出需要进一步使用纯化蜂毒成分和体内模型进行研究，以更好地阐明蜂毒在组织再生和伤口修复中的作用。

网络药理学和分子对接揭示蜂毒的多靶点抗炎机制部分指出，对BV机制理解的进展在很大程度上依赖于几种生物信息学和计算方法的整合。网络药理学结合靶点预测、数据库挖掘和图论分析来表征BV肽等复杂天然药物的多靶点、多通路药理学。分子对接预测配体在蛋白质结合位点内的优选结合取向和亲和力。对于BV肽，由于是多肽而非小分子，标准小分子对接算法如AutoDock Vina必须辅以肽特异性对接方案。AutoDock Vina和LeadIT等工具已被用于证明蜂毒肽与TNF-α和IL-1β的稳定结合以及琥珀酸与bvPLA的相互作用。更先进的模拟如分子动力学（MD）用于评估这些复合物随时间的稳定性，通过结构分析确认蜂毒明肽和蜂毒肽等成分的抗炎潜力。

计算机数据来源和可视化工作流程部分指出，为评估蜂毒成分的靶点相互作用组和生物学通路，从先前验证的数据集中检索候选靶点。目标蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络被重建性建模，并使用配备CytoHubba插件的Cytoscape（v3.10.4）进行分析以提取网络拓扑特征。功能生物学过程注释和KEGG通路图通过Metascape和NDEx整合进行定制。主要蜂毒肽和蛋白质的结构渲染图基于UniProtKB独立使用PyMOL（v3.1.8）生成。

蛋白质-蛋白质相互作用网络分析和枢纽基因鉴定部分指出，精炼后的靶点集随后映射到由STRING（检索相互作用基因/蛋白质的搜索工具）构建的综合蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络上，该数据库整合了实验、计算和文献来源的相互作用数据并带有置信度评分。PPI网络将生物系统表示为图，其中节点表示蛋白质，边表示功能或物理相互作用。Shi等人研究了蜂毒的潜在药理作用，全面评估了赋予其抗癌、抗炎、抗感染、镇痛和神经保护特性的主要成分。作者利用生物信息学分析、KEGG通路分析和蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析预测了构成蜂毒重要分子药理学的机制作用和信号通路。通过网络药理学，该综述还提供了蜂毒可能治疗应用的全面总结。PPI网络使用STRING数据库构建，并使用Cytoscape 3.10.4可视化，以研究从NCBI、UniProt和DisGeNET收集的与蜂毒抗炎活性相关的基因/蛋白质之间的功能相互作用。鉴定的靶点枢纽基因表示为节点，蛋白质之间的相互作用表示为边。该网络突出了蜂毒介导的抗炎机制中涉及的关键分子靶点及其潜在调控关系。PPI网络中包含的基因如图4所示，节点数：18，边数：141。图4展示了智人（Homo sapiens）中蜂毒抗炎靶基因（STAT3、AKT1、TNF、JUN、EGFR、ACTB、IL1B、CASP3、MAPK3、RELA、CASP8、VEGFA、NFKBIA、MMP9、CCND1、MAPK1、PTGS2、CXCL8）的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络。该网络使用STRING v12.0重建，最低要求的相互作用评分为0.400（中等置信度），并使用Cytoscape v3.10.4可视化。靶点信息来自Shi等人和Yang等人。节点代表蛋白质，边代表蛋白质-蛋白质关联。PPI富集p值为9.22×10^?11。

功能富集分析：基因本体论和KEGG通路部分指出，鉴定的枢纽基因和完整靶点集进行功能注释，以系统地将分子相互作用与生物学过程和通路联系起来。基因本体论（GO）富集分析将基因分为三个正交系统：生物学过程（细胞和生物体水平的现象，如炎症反应、凋亡和免疫细胞激活）、分子功能（生化能力，包括蛋白质结合、激酶活性和转录因子活性）和细胞组分（亚细胞定位，包括细胞核、细胞质和细胞膜）。富集统计采用超几何分布检验来确定目标集中GO术语注释的观察频率是否显著超过背景期望，如图5所示。通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）进行的基于通路的富集分析将靶点置于已建立的信号级联和代谢网络中，识别被蜂毒显著调节的经典通路，如图6所示。Shi等人综述了蜂毒肽和bvPLA₂等BV成分被证明作用于AKT、MAPKs、NF-κB和Nrf2等枢纽，KEGG分析强调在PI3K-Akt、MAPK、TNF和NF-κB通路中的富集，支持BV抑制促炎细胞因子和氧化应激同时促进细胞保护反应的能力。补充于此，一项关于蜂毒肽在类风湿性关节炎中的网络药理学研究鉴定了蜂毒肽-疾病共享靶点，构建了PPI网络并进行了KEGG富集，揭示TNF和IL-17的显著参与，表明BV衍生肽通过多靶点、多通路机制调节关键炎症级联反应。图5展示了蜂毒靶基因（STAT3、AKT1、TNF、JUN、EGFR、ACTB、IL1B、CASP3、MAPK3、RELA、CASP8、VEGFA、NFKBIA、MMP9、CCND1、MAPK1、PTGS2、CXCL8）的基因本体论（GO）生物学过程富集分析。富集图谱使用Metascape基于Shi等人和Yang等人的数据集靶点生成。富集显著性使用累积超几何检验评估，术语保留标准为p<0.01、最小计数为3、富集因子>1.5。P值使用Benjamini-Hochberg程序进行多重检验校正。图6展示了KEGG信号通路整合图，说明与蜂毒抗炎机制相关的 principal 分子靶点。基于先前发表的研究中报道的与蜂毒介导的抗炎机制的关联，选择了13个关键靶基因（NFKBIA、IL1B、CASP3、JUN、PTGS2、TNF、RELA、MAPK3、CASP8、MAPK1、AKT1、MMP9和CXCL8）。通过NDEx平台鉴定了包含这些靶基因且与报道的炎症信号机制相关的KEGG通路。检索到的通路网络随后合并为单一整合图，保留重叠靶点以说明其跨通路的连通性。所得网络在Cytoscape v3.10.4中手动排列和自定义样式以进行可视化。

蜂毒生物活性化合物针对促炎靶点的分子对接和分子动力学分析部分指出，计算结构生物学的最新进展彻底改变了研究人员理解这些天然产物的方式。已发表的分子对接和MD研究已被用于原子水平探索蜂毒成分如何与人促炎蛋白靶点相互作用。这些计算机模拟预测可能的结合构象和相对相互作用评分；MD可以评估动态稳定性和分子间接触，这对简化药物发现过程至关重要。分子对接是预测BV生物活性化合物（配体）与蛋白质靶点结合时优选取向的主要工具；然而，其结果仍依赖于模型，在没有实验验证的情况下不应被解释为靶点结合、通路抑制、选择性或治疗功效的直接证据。BV生物活性化合物对促炎靶蛋白（包括TNF-α以及与NF-κB、MAPK和细胞因子介导信号通路相关的蛋白质）表现出良好的结合亲和力。表7总结了BV成分、报道的分子靶点、计算方法和预测的结合亲和力值。已发表的计算研究中讨论的BV生物活性化合物如图7所示。图7展示了代表性意大利蜜蜂蜂毒生物活性物质的三维分子表示。结构坐标从UniProtKB数据库检索，蜂毒肽（P01501）、肥大细胞脱颗粒肽（P01499）、蜂毒明肽（P01500）、Secapin（C0HLU0）、磷脂酶A₂（P00630）和透明质酸酶（Q08169），如计算文献所引用，并使用PyMOL（v3.1.8）为本综述独立渲染。

局限性部分指出，关于蜂毒（BV）分子作用机制、药效动力学和治疗效果的知识发展面临若干重大限制。主要问题之一与缺乏标准化的BV制剂有关，因为蜂毒的生化含量因蜜蜂种类、蜜蜂居住地、季节差异、蜂群状态、采集和加工方法以及储存条件等参数而非常异质。组成的异质性影响蜂毒肽和磷脂酶A₂（bvPLA₂）等重要生物活性剂的水平。此外，缺乏BV加工和表征的国际标准使得无法获得监管批准和开展临床试验。此外，另一个主要缺点是没有强有力的临床证据。尽管大多数研究报告了其在实验室环境中的抗炎和免疫调节活性的积极效果，但随机对照临床试验形式的科学研究很少。缺乏任何证据使得无法了解治疗炎症状况的最佳剂量、治疗持续时间、有效性和安全性。此外，没有比较研究使用BV衍生的生物制药与其他众所周知的抗炎剂如NSAIDs和针对TNF-α和IL-6的生物制剂治疗炎症。安全性问题对药物的临床应用构成额外限制。蜂毒肽的特征是高膜扰动和溶血活性，而bvPLA₂是导致IgE介导的超敏反应的重要过敏原，可能导致致命的过敏性休克。尽管纳米载体技术等进步可能降低毒性和增加选择性，但生物相容性、生物降解性、免疫原性和良好生产规范（GMP）标准下生产过程的可重复性等问题仍然存在。需要药代动力学和毒性研究。对BV的机制理解仍不完整，网络药理学增强了对BV肽多靶点作用的认识。然而，许多分析依赖于需要严格实验验证的计算预测。分子对接提供配体-蛋白质相互作用的静态估计，但其计算限制可能影响所观察动力学的生物学相关性。重要的是，良好的预测并不总是与生物学功效一致，表明需要结合计算和广泛实验研究的综合方法。在理解肽协同作用、药代动力学、药物基因组学变异和个体化反应方面存在显著差距，遗传多态性和疾病变异性等因素在很大程度上未被探索。解决这些差距对于开发安全有效的BV衍生治疗剂至关重要。

未来展望部分指出，未来的研究方向应整合分子药理学、纳米医学、系统生物学和计算药物发现的进展。蜂毒采集、纯化和质量控制方案的标准化对于确保结果的可重复性和促进监管机构接受临床试验至关重要。肽工程和结构生物学的进步为增强从蜂毒中分离的生物活性化合物（包括蜂毒肽和bvPLA₂）的治疗功效提供了机会，通过修饰其性质以改善抗炎效果并降低细胞毒性和过敏性。将人工智能和机器学习整合到肽工程中将有助于更好地理解肽，从而帮助识别新靶点，作为开发具有增强药理学特征的下一代治疗剂的一部分。纳米技术对于通过创建靶向、刺激响应性药物递送系统来控制释放和降低毒性以改善患者护理至关重要。可生物降解聚合物、脂质载体和多功能混合材料的进步将增强治疗效果。将网络药理学与现代分析技术如转录组学和蛋白质组学相结合将有助于揭示蜂毒的复杂免疫调节功能。新的计算机药物发现策略，特别是分子对接和动力学模拟，将为识别有效的治疗肽铺平道路。为评估蜂毒成分的临床使用，需要超越仅评估功效。临床试验应包括长期药代动力学和安全性特征的调查。这将需要具有对照和统一结果及生物标志物测量方法的大型试验。研究人员、行业专家和监管机构之间的合作和知识共享将是开发制造程序和获得监管批准的关键。

结论部分指出，蜂毒是一种由生物活性成分组成的复杂混合物，具有潜在的药理效应，其组成受物种、地理和生理状态影响而变化。其主要生物活性成分蜂毒肽在实验研究中已证明通过稳定IκBα、抑制NF-κB核转位和减少炎症细胞因子发挥抗炎作用。其他成分如磷脂酶A₂根据浓度发挥双重作用，低水平促进调节性T细胞分化，高水平促进促炎反应。纳米包封技术的进步，使用PEG化脂质体和PLGA纳米粒，旨在增强疗效同时最小化毒性。在伤口愈合中，据报道蜂毒通过多种信号通路影响巨噬细胞极化和减少氧化应激。网络药理学分析了蜂毒的多靶点抗炎格局，突出了关键相互作用和潜在治疗通路。已发表的分子对接和分子动力学（MD）模拟研究展示了蜂毒成分针对TNF-α的结合相互作用和稳定性的原子水平预测。MCD肽显示出最高的结合亲和力，而蜂毒肽对多种炎症靶点表现出良好的亲和力，支持其抗炎应用的潜力。然而，这些发现主要仍处于临床前和计算阶段，不应被视为临床验证的治疗功效的证据。需要进一步的实验和临床研究来确定蜂毒基干预措施的疗效、安全性、药代动力学特性和治疗适用性。