《Animals》：Wildlife Surveillance in North-Eastern Italy: Diagnostic Insights and Viral Detection in Gray Wolves and Golden Jackals
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摘要专业翻译
人类、野生动物与家养动物之间的界面是传染病出现与传播的关键热点。灰狼（Canis lupus）与亚洲胡狼（Canis aureus）是意大利正在扩张的野生犬科动物种群，其与人类改造环境的日益重叠可能促进病原体传播。本研究调查了意大利东北部野生犬科
摘要专业翻译
人类、野生动物与家养动物之间的界面是传染病出现与传播的关键热点。灰狼（Canis lupus）与亚洲胡狼（Canis aureus）是意大利正在扩张的野生犬科动物种群，其与人类改造环境的日益重叠可能促进病原体传播。本研究调查了意大利东北部野生犬科动物中哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus，MRV）、轮状病毒A（rotavirus A，RVA）、犬冠状病毒（canine coronavirus，CCoV）、犬细小病毒2型（canine parvovirus type 2，CPV-2）及猫泛白细胞减少症病毒（feline parvovirus，FPV）的流行情况。通过被动野生动物监测获得的101具尸体（83只灰狼和18只亚洲胡狼）接受了尸检。研究人员采用分子检测方法对组织样本和拭子进行筛查，并对阳性样本进行特征鉴定和病毒分离试验。MRV在灰狼（27.7%）和亚洲胡狼（33.3%）中均有检出，这是首次在两种物种中报道并成功分离该病毒。RVA在灰狼中的检出率为60.2%，在亚洲胡狼中为61.1%。CCoV仅在灰狼中检出（12.5%）。CPV-2在灰狼中的检出率为10.8%，在亚洲胡狼中为35.3%，其中FPV占CPV-2阳性亚洲胡狼样本的66.7%。这些发现为MRV、RVA、CCoV和CPV-2/FPV在自由放养灰狼和亚洲胡狼中的流行提供了有价值的数据，并突显了被动监测在“一体化健康”（One Health）框架下的整体价值。
论文解读
一、研究背景与研究目的
人类、野生动物与家养动物之间的接触界面是病原体出现和跨物种传播的关键热点区域。在意大利阿尔卑斯山区，生态系统恢复促进了野生有蹄类和食肉动物的重新定殖，重塑了野生动物与人类的互动格局，也为病原体传播创造了新机会。灰狼和亚洲胡狼作为正在向人类改造景观扩张的野生犬科动物，其与家养动物和人类活动的接触日益频繁，成为研究病原体交换的理想模型。意大利灰狼种群曾因栖息地丧失、猎物减少和人为迫害而在1973年降至约102头的最低点，但近几十年来已显著恢复，2020—2021年全国监测估计约有3307头灰狼，其中阿尔卑斯地区约952头。亚洲胡狼自20世纪80年代进入意大利后，分布范围持续扩大，广泛占据从低地湿地到山区的各类栖息地，并善于利用郊区和城郊环境中可获得的人类食物资源。家犬因其与野生犬科动物密切的分类学关系及其在自然环境中的频繁出现，可能充当桥接宿主，促进病原体在野生动物与人类相关环境之间交换。然而，目前对扩张中的野生犬科动物种群中病毒流行情况的认知仍然有限，相关研究少且往往过时。鉴于野生动物—家养动物界面上潜在流行的病原体范围广泛，本研究聚焦于哺乳动物正呼肠孤病毒（MRV）和轮状病毒A（RVA）这两种公认的人畜共患病原体，同时纳入犬冠状病毒（CCoV）和犬细小病毒2型（CPV-2）等家犬最常见的病毒病原体。研究旨在评估通过被动野生动物监测收集的野生犬科动物尸体，在官方监管和法医病理检查支持下，能否作为评估扩张中野生食肉动物种群内选定病毒病原体流行的合适且信息丰富的来源。
二、主要技术方法
研究人员在意大利威尼托大区及特伦托和博尔扎诺自治省开展研究，通过被动野生动物监测计划，在2024年5月至2026年1月期间收集了101具野生犬科动物尸体（83只灰狼和18只亚洲胡狼）。所有动物在尸检前均经狂犬病病毒阴性检测。研究人员采用标准化尸检方案确定死亡原因，并采集口咽拭子、直肠拭子以及肺、脾、回肠和肠系膜淋巴结组织样本。分子检测方面，研究人员采用多重实时荧光定量逆转录PCR（RT-qPCR）方法同时检测MRV和RVA，使用商品化RT-qPCR试剂盒检测CCoV，采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测CPV-2/FPV共有的VP2基因保守区域。对CPV-2阳性样本进一步采用双荧光熔解曲线分析（FMCA）进行变异分型，对鉴定为原始CPV-2的样本通过常规PCR和Sanger测序区分犬细小病毒2型与猫泛白细胞减少症病毒（FPV）。此外，对所有MRV阳性样本尝试在Vero细胞上进行病毒分离。
三、研究结果
研究人群特征：83只灰狼中，大部分来自威尼托大区（55.4%），其次为特伦托自治省（36.1%）和博尔扎诺自治省（8.4%）；雄性占63.9%，以亚成年个体为主（53.0%）。18只亚洲胡狼中，博尔扎诺自治省和威尼托大区各占一半；雄性占55.6%，同样以亚成年个体为主（50.0%）。
大体病理学发现：研究人员记录了胃肠道系统的大体发现，包括肠内容物性状、淋巴组织改变和肠道绦虫感染情况。但统计分析未发现病毒阳性与大体病理改变之间存在显著关联，这主要归因于被动监测的便利抽样、车辆碰撞导致的频繁多发伤、尸体回收前的长时间死亡间隔以及尸检前常规?20 °C冷冻等因素对病理评估质量的严重影响。
病毒分子检测结果：MRV在灰狼中检出率为27.7%，在亚洲胡狼中为33.3%，阳性矩阵包括回肠、肠系膜淋巴结和直肠拭子。RVA在灰狼中检出率为60.2%，在亚洲胡狼中为61.1%，主要阳性矩阵为回肠和肠系膜淋巴结。CCoV仅在灰狼回肠样本中检出（12.5%），所有肺样本及亚洲胡狼的所有样本均阴性。CPV-2在灰狼中检出率为10.8%，在亚洲胡狼中为35.3%。变异分型结果显示，灰狼样本中检出CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c和原始CPV-2等多种变异体，而所有成功测序的亚洲胡狼样本均被鉴定为FPV。统计检验未发现各病原体在物种、年龄组、性别、淋巴结反应性和肠内容物方面的显著分布差异。
MRV分离结果：研究人员对所有MRV阳性样本尝试病毒分离，成功从一只灰狼（回肠、肠系膜淋巴结和直肠拭子多个矩阵）和一只亚洲胡狼（肠系膜淋巴结）中分离出MRV，这是首次从这两种野生犬科动物中报道并成功分离MRV。灰狼来源分离株在第三代传代后出现细胞病变效应（CPE），亚洲胡狼来源分离株在第二代即出现明显CPE。
病例报告：案例1为一只来自维罗纳省的亚成年雄性灰狼，尸检发现严重弥漫性肺水肿和充血，胃肠道充满红色至砖红色液体至黏液样内容物，黏膜弥漫性充血，肠系膜淋巴结严重充血肿大。分子检测鉴定出回肠中存在RVA、CCoV和CPV-2b的病毒共感染，支持急性出血性胃肠炎继发分布性休克的诊断。案例2为一只来自博尔扎诺自治省的亚成年雌性亚洲胡狼，尸检发现严重血胸和肺出血，与多发伤一致，提示低血容量性休克伴急性呼吸衰竭为直接死因；分子检测在回肠、肠系膜淋巴结、肺和口咽拭子中检出RVA，表明死亡时存在RVA的全身性播散。
四、讨论与结论
讨论部分指出，MRV在两种野生犬科动物中的检出代表了该病毒的首次报道，阳性矩阵分布提示病毒主要涉及胃肠道循环并随后累及相关淋巴组织。RVA的高检出率表明这种人畜共患病毒在野生犬科动物中的流行比此前认识到的更为广泛。CCoV仅在灰狼中检出，而亚洲胡狼中未发现感染证据，但样本量过小无法可靠估计无感染概率。CPV-2变异分型揭示了灰狼中多种变异体并存，提示家养与野生犬科动物种群之间存在频繁的病毒交换；亚洲胡狼样本中检出FPV进一步支持该病毒感染非猫科食肉动物宿主的能力。研究局限性包括被动采样的固有偏差、样本量有限以及灰狼与亚洲胡狼样本数量显著不平衡等。
研究结论指出，本研究记录了意大利东北部扩张中野生犬科动物种群中多种病毒的流行情况，表明在法医大体病理支持下的被动监测是监测自由放养食肉动物病毒流行的可靠且信息丰富的工具。研究首次提供了灰狼和亚洲胡狼感染MRV的证据并成功分离病毒，RVA的高检出率提示这种人畜共患病毒在野生犬科动物中的流行程度超出此前认知。CCoV的检出、灰狼中多种CPV-2变异体以及亚洲胡狼中FPV的发现，突显了野生动物—家养动物界面上复杂的病毒动态。尽管存在被动采样和尸体保存相关的局限性，这些发现强调了野生动物健康监测的价值，并需要在“一体化健康”框架内持续开展监测和分子特征鉴定，特别是针对MRV和RVA等人畜共患病原体。
