北美新大陆锈菌Puccinia impatientis-elymi的物种地位确立：新选模式、生活史阶段形态与ITS-28S-EF1-α系统发育证据

《Canadian Journal of Plant Pathology》：Fungi canadenses No. 355 PUCCINIA IMPATIENTIS-ELYMI

　　

Puccinia impatientis-elymi Arthur in Kleb.（作为'impatienti-elymi'发表），Die wirtswechselnden Rostpilze: 292 (1904)，新名称（nom. nov.）。 ≡ Aecidium impatientis Schwein., Schriften Naturf. Ges. Leipzig 1: 41 (1822) ≡ Caoma（Aecidium亚属）impatientatum (Schwein.) Schwein., Trans. Am. Phil. Soc., New Series 4(2): 293 (1832) [1834] ≡ Dicaeoma impatientis (Schwein.) Arthur, Résultats scientifiques du Congrès international de botanique, Vienne 1905 = Wissenschaftliche Ergebnisse des Internationalen botanischen Kongresses, Wien 1905: 344 (1906) ≡ Puccinia impatientis (Schwein.) Arthur, Bot. Gaz. 35: 19 (1903)，不合法名称（nom. illegit.）（Art. 53.1）；（非 Pu. impatientis Ficinus & C. Schub., Fl. Geg. Dresd. 2: 252 (1823) = Pu. argentata (Schultz) G. Winter） ≡ Puccinia rubigo-vera f. sp. impatientis (Schwein.) Mains [作为'(Arth.), nov. comb.']，Pap. Mich. Acad. Sci. 17: 377 (1933) [1932] ≡ Puccinia elymi-impatientis Davis, nom. nov., Trans. Wis. Acad. Sci. Arts Lett. 19(2): 677 (1919) 新选模式（此处指定，MycoBank, MBT 10034232）：USA, Indiana, Tippecanoe Co., south of West Lafayette，寄生于Impatiens capensis，1920年6月9日，H.S. Jackson（DAOM 23034）。GenBank ITS = PZ273000。 性孢子器（PYCNIA）叶面生或两面生，淡黄色至红褐色，常呈圆形群集，着生于浅色或褐色病斑上。春孢子器（AECIA）叶背生，在褪绿斑上呈圆形群集，若存在性孢子器则环绕其分布，有时亦叶面生，可沿叶脉或于叶柄、茎上簇生，杯状或有时圆筒状，白色至乳白色或淡黄褐色，包被向外反卷且顶部稍撕裂，包被细胞无色，菱形。春孢子（AECIOSPORES）无色，球形至椭球形，(17.2–)20.7–25.1(?27.4) × (14.8–)18.6–23.1(?26.2) μm，平均22.9 × 20.9 μm（n = 500），表面具细疣状纹饰，并具大小不等的丰富孔塞，成熟时脱落而留下光滑环痕（tonsure）。夏孢子堆（UREDINIA）叶面生或两面生，淡黄色至肉桂褐色，长圆形，长0.2–0.5 mm。夏孢子（UREDINIOSPORES）淡黄褐色，椭球形至倒卵形，(17.8–)19.6–25.8(?30.2) × (16.0–)18.0–22.8(?26.2) μm，平均22.9 × 20.3 μm（n = 210），均匀具刺，孔不明显。冬孢子堆（TELIA）叶背生，黑色，椭圆形至长圆形，多长0.3–0.4 mm，或融合成长达0.8 mm的条状，长期被表皮覆盖。冬孢子（TELIOSPORES）淡栗褐色，2细胞，形态多变但多为长圆形或长圆-棍棒形，(26.9–)30.1–50.2(?68.7) × (9.0–)10.5–15.29(?18.1) μm，平均38.2 × 12.5 μm（n = 170），隔膜处不缢缩或稍缢缩，顶端钝圆或平截，顶壁厚1.6–6.1 μm，柄极短。 寄主：0、I 毛茛科：Clematis ligusticifolia Nutt.；凤仙花科：Impatiens capensis Meerb.（= I. biflora Walter, I. fulva Nutt.）、Impatiens pallida Nutt.（= I. aurea Muhl. ex Hitchc.）、Impatiens noli-tangere L.（= I. occidentalis Rydb.）。II、III 禾本科：Elymus canadensis L.、Elymus hystrix L.（= Hystrix patula Moench）、Elymus virginicus L.、Hordeum jubatum L.、Poa compressa L.。 分布：CANADA Alberta, Manitoba, Ontario, Québec。USA Illinois, Indiana, Missouri, Pennsylvania，以及依据文献报道的Delaware, New Jersey, Wisconsin。 检查标本：CANADA，Alberta，N of Spruce Grove，寄生于Impatiens sp.，1958年7月5日，E.H. Moss 11087（DAOM 97499，GenBank ITS = PZ282852，EF1a = PZ284972，CO3 = PZ284977）；Taber，寄生于C. ligusticifolia，1947年6月24日，T. Johnson & W.J. Cherewick（DAOM 153212，GenBank ITS = MT955228）；Manitoba，Brandon，寄生于Ho. jubatum，1917年7月，W.P. Fraser培养（DAOM 114611，GenBank ITS = PZ282853）；Brandon，寄生于Ho. jubatum，1918年8月13日，W.P. Fraser培养（DAOM 114608，GenBank ITS = PZ282854）；Dauphin，寄生于I. capensis，1918年7月15日，W.P. Fraser（DAOM 237560）；Riding Mountain National Park，14 km N bison enclosure Strathclair Trail，寄生于I. capensis，1979年7月11日，J.A. Parmelee 5083等（DAOM 181412，GenBank ITS = PZ282855，EF1a = PZ284973，CO3 = PZ284978）；Riding Mountain National Park，Moon Lake，寄生于I. occidentalis，1979年7月17日，J.A. Parmelee 5174等（DAOM 177435，GenBank ITS = PZ282856）；Riding Mountain National Park，Moon Lake，寄生于I. occidentalis，1979年7月17日，J.A. Parmelee 5182等（DAOM 181411）；Ste.-Rose-du-Lac，寄生于Ho. jubatum，1921年7月28日，G.R. Bisby 1057（DAOM 204857a）；Ontario，Harrow，寄生于E. virginicus，1950年8月25日，J.A. Parmelee（DAOM 25443，GenBank ITS = PZ282857）；Ottawa，寄生于E. virginicus，1929年10月13日，I.L. Conners（DAOM 1310）；Vineland，寄生于I. capensis，1939年6月17日，L.T. Richardson, C.F. McKeen（DAOM 6829，GenBank ITS = PZ282858）；Wellington Co., Puslinch Twnp.，寄生于Impatiens sp.，1946年7月3日，W.D. Sutton 368（DAOM 132499，GenBank ITS = PZ282859，EF1a = PZ284974）；Québec，Hudson，寄生于E. canadensis，1914年8月，W.P. Fraser（DAOM 12875，GenBank ITS = PZ282860）；Hudson，寄生于E. virginicus，1913年，W.P. Fraser（DAOM 12878）；Hudson，寄生于I. fulva，1914年，W.P. Fraser（DAOM 12880）；Rouville Co., Rougemont，寄生于Hy. patula，1954年7月17日，Lionel Cinq-Mars（DAOM 45936，GenBank ITS = PZ282861）；Rouville Co., Rougemont，寄生于I. capensis，1954年7月17日，Lionel Cinq-Mars（DAOM 46011，GenBank ITS = PZ282862）；Rouville Co., Abbotsford，寄生于Hy. patula，1936年7月31日，D.B.O. Savile（DAOM 3949，GenBank ITS = PZ282863，EF1a = PZ284975，CO3 = PZ284979）；Rouville Co., Abbotsford，寄生于I. pallida，1936年6月9日，D.B.O. Savile（DAOM 190820，GenBank ITS = PZ282864）；USA, Illinois，Carroll Co., Savanna, Mississippi Palisades State Park，寄生于E. canadensis，1995年9月20日，A.P. Roelfs & J.W. McCain（PUR N1447，GenBank ITS = JX533589）；Indiana，Tippecanoe Co., S of West Lafayette，寄生于E. virginicus，1920年8月23日，H.S. Jackson（DAOM 23033，GenBank ITS = PZ282865，EF1a = PZ284976，CO3 = PZ284980）；Tippecanoe Co., Lafayette, 40.41667, ?86.87528，寄生于Po. compressa，1956年4月30日，M.P. Britton（PUR N5352，GenBank ITS = HM057157）；Missouri，St. Louis Co., Creve Coeur Creek, end of Ladue Rd.，寄生于Impatiens sp.，1942年5月9日，G.D. Darker 7303（DAOM 84412，GenBank ITS = PZ282866）；Pennsylvania，West Chester，寄生于I. pallida，1882年6月，Everhart, Haines, Jefferis, Gray（DAOM 982597）。 注：Schweinitz（1822，1832）在美国东部卡罗来纳地区采集标本的重要出版物中记录并首次描述了该锈菌寄生于Impatiens L.。随后出现了春孢子阶段的扩展描述（Burrill 1885；Saccardo 1888）。Arthur（1903）通过将来自I. aurea（现名I. pallida）的春孢子接种于E. virginicus的成功实验，发现了其转主寄主。他1903年提出的名称不合法（为Puccinia impatientis Ficinus & C. Schub.的晚出同名），但替代名称Puccinia impatientis-elymi Arth.于一年后发表（Klebahn, 1904），并补充说明其夏孢子和冬孢子与Puccinia rubigo-vera (DC.) G. Winter相似。该新名称亦由Saccardo（1905）记录。其他地区的观察报道支持Arthur（1903）的观点，即该种在美国东部Impatiens上常见，即Illinois（Burrill 1885）、Indiana（Jackson, 1915[1916]，作为Dicaeoma impatientis (Schwein.) Arthur）、Delaware（Jackson, 1917[1918]）、New Jersey（Schwarze 1917）和Wisconsin（Davis 1919）。Davis（1919，p. 677）亦提供了替代名称Puccinia elymi-impatientis，使用"我建议"（'I suggest'）的措辞，此处被认定为异名。Arthur（1903，1904，1905，1910）、Fraser（1919）和Mains（1933）的接种研究证据将寄主范围扩大到本研究确认之外，包括Agropyron tenerum Vasey（= E. trachycaulus (Link) Gould subsp. trachycaulus）。Fraser的研究（1919）将已知分布扩展到加拿大（Manitoba和Quebec）。 Schweinitz（1822）或Arthur（1903）均未指定主模式，也未引证原始材料。因此，此处指定新选模式DAOM 23034（图1A,E,G），选择原因是其同时具有形态学数据和ITS DNA序列，且由H.S. Jackson于1920年采自Impatiens，地点（Lafayette, IN）与Arthur（1904，p.11）用于其首次接种研究的采集地点相同。DAOM 23033（图1H,M）由Jackson同年同地采自E. virginicus，亦被检查和测序，为寄主关联提供了额外确认。另有两份标本最初被考虑为潜在新选模式材料但未被选中。在Arthur和Bisby（1918）对Schweinitz（1822，1832）两篇著作的注释翻译中，提供了Schweinitz为该种采集并保存的一份标本的详细信息（l.c. p. 224）。该标本的元数据似乎对应于BPI 1049275（United States National Fungus Collections, Beltsville, MD；未见），但没有日期且引证了两个地点（Salem NC和Bethlehem PA）。Saccardo（1888）列出一份干燥标本集标本，Ellis North American Fungi #1001（DAOM 982597，图1D），1882年采自West Chester, PA，本研究对其进行了检查但未能成功测序。 图1 侵染于Impatiens capensis（A, C–G）、Impatiens pallida（B）、Elymus virginicus（H, L, M）、Elymus hystrix（I）、Hordeum jubatum（K）或Poa compressa（J）。（A）叶背面环绕性孢子器的春孢子器，DAOM 23034（新选模式）；（B）一个春孢子器的SEM，示春孢子及包被细胞（箭头），DAOM 12880；（C）一个春孢子的SEM，示疣状表面、脱落的孔塞（箭头）和光滑环痕（星号），DAOM 237560；（D）叶表面春孢子器特写，DAOM 982597（NAF 1001）；（E）具表面孔塞的春孢子，DAOM 23034（新选模式）；（F）示大小变异的春孢子，DAOM 181412；（G）包被细胞，DAOM 23034（新选模式）；（H）叶背面冬孢子堆，DAOM 23033；（I）叶正面夏孢子堆，DAOM 45936；（J）夏孢子，PUR N5352；（K）冬孢子堆横切面，示由不育细胞（箭头）分隔的冬孢子，DAOM 114611；（L）具短柄相连的冬孢子簇，DAOM 25443；（M）示形态变异（尤其长度）的冬孢子，DAOM 23033、25443和1310。比例尺：D为0.5 mm，H和I为1 mm，A为2 mm，C为5 μm，B为10 μm，E–G、J–M为25 μm。 该种描述基于所引证的检查标本，与既往描述吻合良好，尽管Arthur（1934）报道的夏孢子和冬孢子大小范围略小。共检查26份标本（14份春孢子阶段/12份夏孢子或冬孢子阶段），其中19份测序了nrDNA内转录间隔区1和2（ITS），或仅ITS2，以及部分大亚基区域（28S），一个子集测序了延伸因子1-α（EF1-α）和细胞色素c氧化酶亚基3（CO3）。方法遵循Hambleton等（2025）用于标本检查和rDNA/EF1-α测序的方法，以及Vialle等（2009）用于CO3的方法。各基因区域序列间差异极小（相似性99–100%）。代表产地和寄主多样性的序列已存入GenBank。对选定标本，寄主属的鉴定通过寄主DNA的ITS测序确认。尽管该锈菌在20世纪初即被认定为独立分类单元，但后来被归入Pu. rubigo-vera的亚种水平，作为f. sp.（forma specialis）impatientis（Mains 1933）或var. impatientis（Arthur 1934；Arthur and Cummins 1962）。Puccinia rubigo-vera随后被处理为Puccinia recondita Roberge ex Desm.广义（s.l.）的异名，后者是包括Elymus L. spp.在内的野生和栽培禾本科植物上褐叶锈菌的多样复合群（Cummins 1971）。拼接的ITS-28S-EF1-α DNA序列分析支持将Pu. impatientis-elymi认定为完整物种，并确认其与Pu. recondita复合群其他成员的关系（图2）。这些结果与对部分纳入的GenBank序列（JX533528/JX533472和JX533584/JX533456）的既往分析一致，后者亦在Pu. recondita复合群内形成独立分支，命名为Clade I（Liu et al. 2013；Hambleton et al. 2025），与仅已知于北美特定Leymus Hochst.或Elymus寄主的Clade II和III亲缘最近。 图2 基于ITS-28S和EF1-α拼接序列的RAxML系统发育树，示Pu. impatientis-elymi作为独立物种位于Pu. recondita物种复合群其他成员之中，标注为Liu等（2013）的分支命名。? = 新选模式。显示大于90的自举值，来自500次快速RAxML推断。序列标注为ITS/EF1-α GenBank登录号 | 寄主 | 国家（2字母代码）及省/州缩写（如适用）| 凭证ID。 该锈菌种与Pu. recondita复合群其他成员的显著差异在于其春孢子为类型3，而非类型1或2（Savile 1973）。类型3被描述为具疣状纹饰，但亦具大小不等的孔塞（小板），成熟时脱落，露出下方光滑表面（图1C），而类型1为更均匀的疣状，类型2为双带纹饰。此外，夏孢子和冬孢子大小范围通常小于整个复合群所报道的范围（Cummins 1971）。另外两种重要的Impatiens锈菌病原为Puccinia argentata (Schultz) G. Winter和Puccinia komarovii Tranzschel ex P. Syd. & Syd.。两物种彼此系统发育密切相关（Tanner et al. 2015），但与Pu. impatientis-elymi关系较远，BLASTN结果显示ITS2-28S区域相似性低，例如JX533589与KC466553（Pu. komarovii；88%，1093/1237）相比。尽管Pu. argentata亦发生于I. capensis和I. noli-tangere（Arthur 1934；Moss 1951），但其夏孢子/冬孢子阶段发生于这些寄主上，春孢子阶段与Adoxa L. spp.交替。Puccinia komarovii为同主寄生，在变种水平上对Impatiens parviflora DC.或Impatiens glandulifera Royle寄主专一（Baturo-Cie?niewska et al. 2023），春孢子器发生于茎上引起肿胀而非叶上（Sydow 1935），且春孢子具刺而无孔塞（Sydow and Sydow 1903[1904]）。 Puccinia impatientis-elymi为新大陆物种，发生于北美原生寄主上。Impatiens capensis、I. pallida和I. noli-tangere，分别称为spotted jewelweed、pale jewelweed和western jewelweed，为常见于荫蔽潮湿生境的年生野花。很可能北美标本馆中有许多该锈菌种的采集标本被归入Pu. recondita或Pu. impatientis之下，例如被引证为Pennsylvania首次报道Pu. recondita寄生于I. capensis的标本（Harvey et al. 2024），其以28S序列数据为代表但无ITS2或EF1-α数据，而后者可区分Pu. impatientis-elymi与Pu. recondita复合群其他成员（Liu et al. 2013；Hambleton et al. 2025）。值得注意的是，I. noli-tangere亦原产于欧洲，而I. capensis自19世纪引入以来在欧洲被视为已建立、归化或入侵，视地区而定（Rewicz et al. 2022）。禾本科寄主均广泛分布，其中Elymus和Hordeum L.物种原产于但不仅限于北美。 致谢：研究人员感谢Ottawa Research and Development Centre的Quinn Eggertson和Molecular Technologies Laboratory（MTL）的技术协助，Canadian National Mycological Herbarium（DAOM, Ottawa, Canada）的Jennifer Wilkinson处理标本，Purdue University（West Lafayette, IN, USA）的Arthur Fungarium（PUR）出借标本，Agriculture and Agri-Food Canada的Scott Redhead和Miao Liu分别提供命名建议和投稿前意见。 利益冲突声明：作者未报告潜在利益冲突。

研究背景与问题：Puccinia impatientis-elymi Arth. 是一种转主寄生锈菌，春孢子阶段发生于凤仙花属（Impatiens L.）植物，夏孢子与冬孢子阶段发生于禾本科（Poaceae）的Elymus L.、Hordeum L. 和Poa L. 等属。该分类单元自Schweinitz（1822）首次描述以来，命名历史复杂：Arthur（1903）提出的Puccinia impatientis为晚出同名而不合法，1904年以Puccinia impatientis-elymi作为替代名称发表；Davis（1919）又提出Puccinia elymi-impatientis作为替代名称。此后该锈菌长期被降级处理为Puccinia rubigo-vera (DC.) G. Winter的专化型（f. sp. impatientis，Mains 1933）或变种（var. impatientis，Arthur 1934；Arthur and Cummins 1962），而Pu. rubigo-vera又被视为Puccinia recondita Roberge ex Desm. 广义（s.l.）的异名，后者是野生与栽培禾本科植物上褐叶锈菌的多样复合群（Cummins 1971）。由此产生的问题是：该分类单元究竟应作为独立物种还是复合群内的种下单元；同时，Schweinitz（1822）与Arthur（1903）均未指定主模式（holotype），亦未引证原始材料，模式化问题悬而未决。此外，该种在形态上具有特殊性——其春孢子属于Savile（1973）划分的类型3，即具疣状纹饰并具大小不等的孔塞（platelets），成熟后孔塞脱落而露出光滑表面，与复合群内类型1和类型2明显不同，且夏孢子与冬孢子尺寸范围通常小于复合群整体报道值（Cummins 1971）。因此有必要通过模式指定、形态学复核与多基因系统发育分析，重新界定该分类单元的分类地位。

研究内容与结论：研究人员检查了26份标本（14份春孢子阶段、12份夏孢子或冬孢子阶段），对其中19份进行nrDNA ITS（内转录间隔区，internal transcribed spacer）及部分28S（大亚基，large subunit）区域测序，并对一个子集测序延伸因子1-α（EF1-α）与细胞色素c氧化酶亚基3（CO3），同时通过寄主DNA的ITS测序确认寄主属的鉴定。基于形态学与分子证据，研究人员指定DAOM 23034为新选模式（neotype，MycoBank MBT 10034232），该标本1920年由H.S. Jackson采于美国Indiana州Lafayette附近，寄生于Impatiens capensis，兼具形态学数据与ITS序列，且采集地点与Arthur（1904）首次接种研究所用采集地相同。拼接的ITS-28S-EF1-α序列分析支持将Pu. impatientis-elymi恢复为完整物种，其在Pu. recondita复合群内形成独立分支，即Liu等（2013）命名的Clade I，与仅已知于北美特定Leymus Hochst. 或Elymus寄主的Clade II、Clade III亲缘最近。该研究的重要意义在于：澄清了长期存在的命名与分类争议，为该新大陆物种提供了模式依据与分子界定标准，并提示北美标本馆中大量被归入Pu. recondita或Pu. impatientis的标本可能实属该种，需以ITS2或EF1-α数据加以区分。

关键技术方法：研究以腊叶标本为材料来源，标本来自加拿大国家真菌标本馆（DAOM, Ottawa, Canada）、美国Purdue大学Arthur Fungarium（PUR）以及美国国家真菌保藏中心（BPI, Beltsville, MD，该份未直接观察），另含Ellis North American Fungi干燥标本集第1001号。形态学观察采用光学显微镜与扫描电镜（SEM），测量春孢子（n = 500）、夏孢子（n = 210）与冬孢子（n = 170）的尺寸并统计均值。分子方面，对nrDNA ITS1、ITS2及部分28S区域测序，子集测序EF1-α与CO3；标本检查与rDNA/EF1-α测序方法遵循Hambleton等（2025），CO3方法遵循Vialle等（2009）；寄主鉴定通过寄主DNA的ITS测序确认；系统发育分析采用RAxML，基于ITS-28S与EF1-α拼接序列构建，进行500次快速自举推断并显示大于90的自举值；序列相似性以BLASTN比较。

研究结果：

物种描述与模式指定：通过对所引证标本的形态测量与观察，确认该种描述与既往描述吻合良好，但Arthur（1934）报道的夏孢子与冬孢子尺寸范围略小。春孢子无色、球形至椭球形，平均22.9 × 20.9 μm，表面具细疣并具丰富孔塞，成熟脱落留下光滑环痕；夏孢子淡黄褐色、均匀具刺，平均22.9 × 20.3 μm；冬孢子淡栗褐色、2细胞，平均38.2 × 12.5 μm，隔膜不缢缩或稍缢缩，顶壁厚1.6–6.1 μm，柄极短。因Schweinitz（1822）与Arthur（1903）均未指定主模式，故指定DAOM 23034为新选模式；同地同年采于Elymus virginicus的DAOM 23033亦经检查与测序，为寄主关联提供额外确认。另有两份标本曾被考虑为潜在新选模式材料但未获选；BPI 1049275的元数据与Arthur和Bisby（1918）注释翻译中所述Schweinitz标本相符，但无日期且引证两个地点，未直接观察；DAOM 982597（Ellis North American Fungi #1001）经检查但未能成功测序。

寄主与分布：寄主范围包括春孢子阶段的毛茛科Clematis ligusticifolia Nutt. 与凤仙花科Impatiens capensis、I. pallida、I. noli-tangere，以及夏孢子与冬孢子阶段的Elymus canadensis、E. hystrix、E. virginicus、Hordeum jubatum与Poa compressa。分布记录于加拿大Alberta、Manitoba、Ontario、Québec，美国Illinois、Indiana、Missouri、Pennsylvania，并据文献报道见于Delaware、New Jersey、Wisconsin。基于接种研究的既往证据（Arthur 1903、1904、1905、1910；Fraser 1919；Mains 1933）曾将寄主范围扩展至Agropyron tenerum Vasey（= E. trachycaulus (Link) Gould subsp. trachycaulus），Fraser（1919）并将分布扩展至加拿大。

系统发育分析：基于ITS-28S与EF1-α拼接序列的RAxML分析显示，Pu. impatientis-elymi在Pu. recondita复合群内构成独立且高支持的分支，即Clade I，与Clade II、Clade III亲缘最近，后两者目前仅已知于北美特定Leymus或Elymus寄主。各基因区域在种内序列间差异极小（相似性99–100%），代表产地与寄主多样性的序列已存入GenBank。

形态鉴别：该种与复合群其他成员的显著区别在于春孢子为类型3而非类型1或2，即具疣状纹饰并具大小不等的孔塞，成熟后孔塞脱落露出光滑表面；此外夏孢子与冬孢子尺寸范围通常小于复合群整体报道值。与另两种凤仙花锈菌的比较显示：Puccinia argentata虽亦发生于I. capensis与I. noli-tangere，但其夏孢子与冬孢子阶段发生于这些寄主上，春孢子阶段与Adoxa L. 属交替；Puccinia komarovii为同主寄生，在变种水平对Impatiens parviflora DC. 或I. glandulifera Royle寄主专一，春孢子器生于茎上引起肿胀而非生于叶上，春孢子具刺而无孔塞。BLASTN结果显示Pu. impatientis-elymi（JX533589）与Pu. komarovii（KC466553）在ITS2-28S区域相似性仅88%（1093/1237），支持二者关系较远。

讨论与结论：该种为新大陆物种，发生于北美原生寄主；I. capensis、I. pallida与I. noli-tangere分别称为spotted jewelweed、pale jewelweed与western jewelweed，为常见于荫蔽潮湿生境的年生野花。研究人员指出，北美标本馆中可能有许多该种标本被归入Pu. recondita或Pu. impatientis，例如被引证为Pennsylvania首次报道Pu. recondita寄生于I. capensis的标本（Harvey et al. 2024），其仅有28S序列数据而无ITS2或EF1-α数据，而后者可区分该种与复合群其他成员。此外，I. noli-tangere亦原产于欧洲，I. capensis自19世纪引入后在欧洲依地区被视为已建立、归化或入侵（Rewicz et al. 2022）；禾本科寄主均广泛分布，Elymus与Hordeum物种原产于但不仅限于北美。研究结论为：形态学与多基因系统发育证据支持将Puccinia impatientis-elymi认定为Puccinia recondita复合群内的独立物种（即Clade I），并为其指定新选模式DAOM 23034，从而解决该名称长期缺乏模式与分类地位不清的问题。