E3泛素连接酶WWP1会加重CD样结肠炎中的肠道炎症：揭示KLF5泛素化介导的NF-κB信号调控机制

《Journal of Molecular Histology》：E3 ubiquitin ligase WWP1 aggravates intestinal inflammation in CD?like colitis: insights into KLF5 ubiquitination?mediated NF?κB signaling regulation

　　

摘要

在克罗恩病（CD）中，E3泛素连接酶WWP1的表达和功能以及转录因子KLF5的翻译后修饰作用很少受到系统的研究。我们建立了一种由TNBS诱导的类似克罗恩病的结肠炎小鼠模型和一种由LPS刺激的肠道上皮细胞模型。通过组织病理染色、Western blot、qPCR和免疫荧光技术检测了结肠组织中WWP1、KLF5及其与NF-κB通路相关蛋白的表达和分布。通过共免疫沉淀（Co-IP）和泛素化相关信号检测方法研究了KLF5的蛋白质共沉淀现象及其泛素化信号。同时利用CCK-8、ELISA、qPCR和Western blot技术评估了细胞活力、炎症细胞因子的分泌以及NF-κB的激活情况。我们还进行了KLF5过表达拯救实验以阐明WWP1与KLF5之间的调控关系。在患结肠炎的小鼠结肠组织中，WWP1的表达水平增加了3.46倍，而KLF5的表达水平降低了0.47倍；促炎因子TNF-α和IL-6的水平分别升高了2.81倍和3.06倍，并伴随着明显的NF-κB通路激活。共免疫沉淀实验显示这两种蛋白质存在于同一免疫沉淀复合物中。WWP1的过表达导致KLF5的泛素化信号发生改变、KLF5蛋白含量发生变化，并加剧了LPS诱导的炎症反应，而KLF5的异位过表达则部分缓解了这种促炎表型。免疫荧光结果表明WWP1和KLF5在小鼠结肠黏膜细胞中处于共定位状态。本研究提示，WWP1可能通过调节KLF5从而加剧类似克罗恩病的肠道炎症，进而引发NF-κB信号通路的下游变化。这项工作为类似克罗恩病的结肠炎机制提供了额外的认识，并为进一步的临床前研究确定了潜在的中介因子。