熊果酸通过DPP4-PAR2通路调节狼疮性肾炎中肾小球系膜细胞的行为及铁死亡过程

《Molecular & Cellular Toxicology》：Ursolic acid modulates glomerular mesangial cell behavior and ferroptosis in lupus nephritis through the DPP4-PAR2 pathway

　　

摘要

目的

研究熊果酸（UA）对狼疮性肾炎（LN）中肾小球系膜细胞行为和铁死亡（ferroptosis）的影响，并确定二肽基肽酶-4（DPP4）-蛋白酶激活受体-2（PAR2）通路的相关性。

方法

SV40-MES-13细胞暴露于脂多糖（LPS）中，并分别用UA、铁死亡抑制剂Fer-1或利那格列汀进行处理，同时根据需要过表达DPP4或PAR2。通过CCK-8、Transwell和TUNEL实验、生化测定以及BODIPY 581/591 C11染色来评估细胞活力、迁移能力、凋亡情况、铁积累、氧化应激和脂质过氧化。利用生物信息学分析和分子对接技术鉴定UA的潜在作用靶点。通过qRT-PCR和Western blot检测DPP4-PAR2信号通路、铁死亡调节因子SLC7A11和GPX4，以及与凋亡、增殖和迁移相关的蛋白质。采用MRL/lpr小鼠模型在体内评估肾功能、组织病理损伤、凋亡、Fe²⁺积累以及肾脏中的DPP4和PAR2表达情况。

结果

LPS降低了细胞活力和迁移能力，增加了凋亡、Fe²⁺积累、活性氧（ROS）、MDA、4-HNE和脂质过氧化。UA显著减弱了这些由LPS引起的改变。Fer-1和UA均提高了细胞活力，并降低了BODIPY 581/591 C11的绿色荧光强度与红色荧光强度的比值，其中Fer-1对细胞活力的恢复作用更为显著。UA和利那格列汀均增加了SLC7A11和GPX4的表达；这些效应分别被DPP4和PAR2的过表达所逆转。UA还降低了caspase-3和Bax的表达水平，同时提高了Bcl-2、MMP2和MMP9的表达水平，但PCNA的表达并未显著恢复。在MRL/lpr小鼠中，UA和利那格列汀改善了肾功能，减轻了组织病理损伤，减少了凋亡和Fe²⁺积累，并降低了肾脏中的DPP4和PAR2表达。

目的

研究熊果酸（UA）对狼疮性肾炎（LN）中肾小球系膜细胞行为和铁死亡（ferroptosis）的影响，并确定二肽基肽酶-4（DPP4）-蛋白酶激活受体-2（PAR2）通路的相关性。

方法

SV40-MES-13细胞暴露于脂多糖（LPS）中，并分别用UA、铁死亡抑制剂Fer-1或利那格列汀进行处理，同时根据需要过表达DPP4或PAR2。通过CCK-8、Transwell和TUNEL实验、生化测定以及BODIPY 581/591 C11染色来评估细胞活力、迁移能力、凋亡情况、铁积累、氧化应激和脂质过氧化。利用生物信息学分析和分子对接技术鉴定UA的潜在作用靶点。通过qRT-PCR和Western blot检测DPP4-PAR2信号通路、铁死亡调节因子SLC7A11和GPX4，以及与凋亡、增殖和迁移相关的蛋白质。采用MRL/lpr小鼠模型在体内评估肾功能、组织病理损伤、凋亡、Fe²⁺积累以及肾脏中的DPP4和PAR2表达情况。

结果

LPS降低了细胞活力和迁移能力，增加了凋亡、Fe²⁺积累、活性氧（ROS）、MDA、4-HNE和脂质过氧化。UA显著减弱了这些由LPS引起的改变。Fer-1和UA均提高了细胞活力，并降低了BODIPY 581/591 C11的绿色荧光强度与红色荧光强度的比值，其中Fer-1对细胞活力的恢复作用更为显著。UA和利那格列汀均增加了SLC7A11和GPX4的表达；这些效应分别被DPP4和PAR2的过表达所逆转。UA还降低了caspase-3和Bax的表达水平，同时提高了Bcl-2、MMP2和MMP9的表达水平，但PCNA的表达并未显著恢复。在MRL/lpr小鼠中，UA和利那格列汀改善了肾功能，减轻了组织病理损伤，减少了凋亡和Fe²⁺积累，并降低了肾脏中的DPP4和PAR2表达。

结论

UA通过抑制DPP4-PAR2通路并恢复SLC7A11/GPX4介导的抗氧化防御机制，在一定程度上保护了肾小球系膜细胞，减轻了MRL/lpr小鼠的狼疮性肾炎（LN）症状。研究结果表明，该模型中同时存在铁死亡和凋亡两种损伤机制，且两者均受UA的抑制作用。