环介导等温扩增技术检测布鲁氏菌属血液样本的临床诊断效能评估

《BMC Microbiology》：Comparison of loop-mediated isothermal amplification and conventional methods for rapid diagnosis of Brucella species

摘要

背景

布鲁氏菌病对直接接触牲畜的人群构成了重大威胁。传统的诊断方法依赖于分离和培养，这通常耗时较长。LAMP（环介导等温扩增）和其他分子技术的发展为更快、更高灵敏度和特异性的诊断提供了可能，相比之下，传统基于培养的方法效率较低。本研究的目的是评估LAMP技术在检测患者血液样本中是否存在布鲁氏菌属（Brucella spp.）方面的实用性。

方法

共有60名表现出布鲁氏菌病临床症状且初次血清学检测结果呈阳性的患者参与了本研究。在无菌条件下从每位患者体内采集了10毫升血液：其中5毫升用于血液培养，5毫升用于分子分析（添加EDTA处理）。培养样本被接种到BACTEC需氧培养瓶中，并在仪器提醒后转移到Brucella琼脂（Merck，德国）培养基上进行培养，培养温度为37°C，最长培养时间为一周。使用针对Brucella的特异性引物对部分样本进行了LAMP检测，以便在恒定温度下实现快速检测，结果在60分钟内出稿。此外，还从外周血样本中提取DNA，进行了针对Brucella特异性基因的常规PCR检测。采用了Bioneer公司（韩国）的商用试剂盒进行DNA提取，并确认了Brucella DNA的存在。扩增产物通过凝胶电泳或实时检测进行分析。记录了每位患者的培养、LAMP和PCR检测结果，并使用SPSS 17版软件比较了诊断一致性、灵敏度和特异性。

结果

在通过培养方法检测的60份血液样本中，9份（15%）呈阳性，51份（85%）呈阴性。PCR和LAMP检测分别显示出38份（63.33%）和47份（78.33%）的样本对Brucella属呈阳性。假设培养和PCR方法是金标准，并使用Stata/MP v17.0软件及95%置信区间进行计算，LAMP方法相对于PCR方法的预测临床灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确率分别为86%、36.36%（95% CI：14.49%-58.23%）、70.21%（95% CI：51.67%-88.75%）和61.54%（95% CI：33.92%-89.16%）、68.33%（95% CI：56.49%-80.17%）。

结论

LAMP检测是一种高度特异和灵敏的方法，可用于检测临床样本中的Brucella菌株。鉴于早期诊断和适当治疗布鲁氏菌病的重要性，LAMP技术为识别血液样本中的Brucella物种提供了一种更快、更灵敏且更具成本效益的方法。

图形摘要