PCR扩增的blaKPC-2激活引发的Cas12a效应，与DNA立方体限制下的Fc报告基因切割机制结合，在Ti3C2/CsPbBr3@PDA@Au/GCE双模式ECL/SERS界面上进行实验。现已可供购买

《Analytical Methods》：PCR-amplified blaKPC-2-triggered Cas12a activation coupled with DNA cube-confined Fc reporter cleavage on a Ti3C2/CsPbBr3@PDA@Au/GCE dual-mode ECL/SERS interfaceAvailable to Purchase

【字体：大中小】 时间：2026年11月07日 来源：Analytical Methods 3

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　　打开图形查看器快速可靠地检测抗生素耐药基因对于指导抗菌治疗和控制碳青霉烯类耐药病原体的传播至关重要。在此，我们开发了一种基于PCR扩增子激活的CRISPR/Cas12a调控的双模式电化学发光/表面增强拉曼散射生物传

快速可靠地检测抗生素耐药基因对于指导抗菌治疗和控制碳青霉烯类耐药病原体的传播至关重要。在此，我们开发了一种基于PCR扩增子激活的CRISPR/Cas12a调控的双模式电化学发光/表面增强拉曼散射生物传感器，用于灵敏地检测blaKPC-2耐药基因。通过PCR扩增含有选定TTTG PAM区域的特定blaKPC-2片段，并将其用作crRNA/Cas12a复合物的双链DNA激活剂。目标识别后，激活的Cas12a会切割集成到Ti₃C₂/CsPbBr₃@PDA@Au纳米复合材料界面上的DNA立方体支架中的Fc标记报告基因片段。在初始状态下，Fc位于Ti₃C₂/CsPbBr₃@PDA@Au改性的玻璃电极（GCE）表面附近，导致ECL信号减弱和强SERS发射。当Cas12a切割暴露的单链DNA报告基因片段时，含有Fc的片段从界面释放，从而导致ECL信号恢复和SERS信号减弱。因此，这一过程实现了ECL信号开启与SERS信号关闭的反相关转换，比率值R = I_ECL/I_SERS用于定量分析。浓度依赖性响应在10–10⁷拷贝/微升范围内进行了经验拟合，而10⁸拷贝/微升的样本组表现出较高的响应压缩。边界反计算表明需要进一步进行定量验证。空白响应的反向预测给出了一个模型依赖的等效浓度，约为1.06拷贝/微升；泊松采样给出了95%分子采样阈值，约为3.0拷贝/微升（对于1.0微升的输入）。这两个参数都不是实验确定的检测或定量限。该平台对其他耐药基因和非靶标细菌基因组DNA也表现出良好的选择性，并且在10%稀释的血清（作为模型生物基质）中具有满意的重复性、可重现性、稳定性以及良好的干扰恢复性能，提供了基质耐受性的初步证据，而非临床验证。这项工作提供了一种自校准的双模式抗生素耐药基因检测策略，但在临床应用之前，还需要使用细菌裂解物、提取的细菌基因组DNA和临床分离株进行进一步验证。qPCR支持10–10⁷拷贝/微升范围内的线性扩增；在10⁸拷贝/微升范围内仍可观察到终点响应，但定量分辨率降低。