《International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife》：Distribution and ecology of
Ornithodoros phacochoerus in the Coutada 9 Game Reserve in Central Mozambique
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软蜱（soft ticks）在疣猪（*Phacochoerus africanus*）洞穴中栖息，是非洲猪瘟（ASF）病毒的储存宿主和传播媒介，同时也是导致人类蜱传回归热（TBRF）的*Borrelia duttonii*的传播媒介。*Ornithodoros
软蜱（soft ticks）在疣猪（*Phacochoerus africanus*）洞穴中栖息，是非洲猪瘟（ASF）病毒的储存宿主和传播媒介，同时也是导致人类蜱传回归热（TBRF）的*Borrelia duttonii*的传播媒介。*Ornithodoros moubata*种复合体包含三个地理上离散的与猪科动物相关的种（*O. moubata*、*O. porcinus*、*O. waterbergensis*和*O. phacochoerus*）以及*O. compactus*，后者传统上被认为与南非的陆龟相关。*Ornithodoros phacochoerus*主要与普通疣猪相关，分布于南非东部和埃斯瓦蒂尼王国。在Bakkes等（2018）的分类修订之前，关于ASF软蜱媒介的文献仅识别了两个种：*O. moubata*和*O. porcinus*，后者根据其与猪科动物或人类住所的关联分别被区分为*O. porcinus porcinus*或*O. porcinus domesticus*。随后一项分子系统发育研究基于16S rRNA测序辨别出南部和东非与疣猪相关的*Ornithodoros*蜱的三个离散地理谱系，且不支持亚种命名，结合形态学和形态测量学，最终确认了南部非洲两个进化谱系的全新种地位。*O. moubata*种复合体的*Ornithodoros*软蜱无眼、避光，在宿主上短时间吸血。它们为内栖性，生活在动物洞穴以及提供沙质或粉尘基质的建筑缝隙中。庇护性动物栖息地提供的固有微气候条件有利于其生存。这一特点使物种分布建模变得复杂，因为与硬蜱不同，其栖息地部分缓冲了用于预测建模的外部环境变量。迄今为止，软蜱分布建模研究主要在区域尺度上基于仅存在数据进行。在局部尺度上，报道仅限于蜱存在和数量与环境条件关系的观察记录。关于影响软蜱分布因素的定量评估普遍缺乏，特别是南部非洲*Ornithodoros moubata*复合体的蜱。与硬蜱相比，软蜱吸血时间短；成虫和若虫通常为15至60分钟，幼虫为12小时至数天，取决于物种。它们以栖息地中可用的不同宿主为食。在南部非洲，多种宿主包括疣猪、豪猪和土豚利用洞穴作为庇护所，是驻留软蜱的潜在血餐来源。软蜱可在长时间不吸血的情况下存活。蜱所吸食的宿主可通过血餐分析进行鉴定。这些分析可追溯至20世纪40年代，当时使用了沉淀素试验等血清学方法。近年来，稳定同位素和基于PCR的方法使得能够在多种节肢动物物种（包括蜱）中鉴定宿主血餐。软蜱已知存在于莫桑比克，但关于该国境内物种和分布的详细信息匮乏。2018年，Quembo及其同事发表了关于戈龙戈萨国家公园（索法拉省）及周围野生动物-家养动物交界区ASFV的*Ornithodoros*软蜱媒介的首次广泛评估，共从洞穴和猪圈中采集了1,658只软蜱。莫桑比克其他地区（包括中部马尼卡省）缺乏类似评估。因此，本研究旨在通过对疣猪偏好的地下和地表休息点进行蜱采样，识别有利于*Ornithodoros*软蜱在莫桑比克中部分布的因素。此外，研究人员通过PCR扩增和Sanger测序物种信息性线粒体基因靶标，鉴定了饱血蜱的血餐和蜱种。
**研究背景**
软蜱（soft ticks）隶属于*Ornithodoros moubata*种复合体，栖息于疣猪（*Phacochoerus africanus*）洞穴中，是非洲猪瘟（African Swine Fever, ASF）病毒的储存宿主和传播媒介，同时也是引发人类蜱传回归热（Tick-Borne Relapsing Fever, TBRF）的*Borrelia duttonii*的传播媒介。*O. moubata*种复合体包含与猪科动物相关的三个地理离散种（*O. moubata*、*O. porcinus*、*O. waterbergensis*和*O. phacochoerus*）以及传统上与陆龟相关的*O. compactus*。*O. phacochoerus*主要与普通疣猪相关，分布于南非东部和埃斯瓦蒂尼王国。此前Bakkes等（2018）基于16S rRNA测序和形态测量学对*O. moubata*复合体进行了分类修订，确认了南部非洲两个进化谱系的全新种地位。软蜱为内栖性、无眼、避光，生活在动物洞穴及建筑缝隙中，其栖息地部分缓冲了外部环境变量，使得物种分布建模较硬蜱更为复杂。目前软蜱分布建模研究主要在区域尺度上基于仅存在数据（presence-only data）进行，局部尺度的定量评估普遍缺乏，特别是南部非洲*O. moubata*复合体。莫桑比克虽有软蜱存在的报道，但物种和分布的详细信息匮乏。2018年Quembo等在戈龙戈萨国家公园开展了该国首次ASFV软蜱媒介广泛评估，但莫桑比克其他地区（包括中部马尼卡省）缺乏类似研究。因此，开展本研究以填补这一空白。
**研究内容与结论**
研究人员在莫桑比克中部马尼卡省Coutada 9禁猎区（Macossa禁猎区，面积4,333 km2）开展了软蜱分布与生态学研究。2020至2023年间共进行四次采集（三次在旱季末的9-10月，一次在雨季后的5-6月），覆盖140个采样点，共采集4,195只软蜱，侵染率为71.4%（95% CI [63.2–78.7]）。统计分析表明，蜱的存在/缺失无法由所测试的任何变量解释；但蜱采集率（每单位采样时间的蜱数）受栖息地类型和土壤质地显著影响——花岗岩巨石休息点的采集率约为疣猪洞穴的两倍（IRR = 2.05, 95% CI [1.25–3.34], p = 0.005），细质地土壤的采集率显著高于中等质地土壤（IRR = 1.79, 95% CI [1.13–2.82], p = 0.013）。NDVI和调查时期对蜱数量无显著影响。空间自相关分析（Moran's I）未检测到一致的空间结构。16S rRNA基因测序（84只蜱，代表18个侵染采样点）确认该地区物种为*O. phacochoerus*，所有序列在约270核苷酸区域完全一致（GenBank登录号PZ949050），与GenBank最接近匹配（KJ133597）的成对序列一致性为99.61%。细胞色素b（cyt b）基因测序对136只饱血蜱进行血餐分析，8只（5.88%）成功鉴定宿主，共鉴定出四种脊椎动物宿主：疣猪（*Phacochoerus africanus*，5份）、人类（*Homo sapiens*，1份）、家犬（*Canis lupus familiaris*，1份）和陆龟（*Kinixys zombensis*，2份），其中一份样品检测到家犬主要序列和疣猪次要序列的混合。该研究首次在莫桑比克中部确认了*O. phacochoerus*的存在，揭示了栖息地类型和土壤质地是影响其采集率的关键因素，血餐分析表明该蜱种非宿主特异性，对ASF和TBRF的流行病学监测具有重要意义。
**关键技术方法**
研究人员在Coutada 9禁猎区140个采样点（疣猪/土豚洞穴和花岗岩巨石休息点）进行手动采集软蜱，记录采样持续时间以标准化采样努力量。采用广义线性模型（二项分布）分析蜱存在/缺失，采用负二项回归（NB1参数化）以对数采样时长为偏移量分析蜱计数，通过AICc模型选择和全模型平均评估各环境变量的相对重要性，并以Moran's I检验空间自相关。蜱种鉴定采用16S rRNA基因（约313 bp）PCR扩增和Sanger测序；血餐鉴定采用线粒体细胞色素b（cyt b）基因（629 bp）通用脊椎动物引物PCR扩增和Sanger测序，序列经BLAST比对GenBank数据库进行物种鉴定。蜱DNA提取前经1%次氯酸钠和超纯水清洗以去除外部污染物。
**研究结果**
*软蜱分布*：在140个评估点中100个采集到软蜱，侵染率71.4%。蜱的存在/缺失无法由任何测试变量解释。模型选择鉴定出16个ΔAICc < 4的候选模型，变量重要性权重显示土壤质地（w = 0.93）和栖息地类型（w = 0.91）获强支持，NDVI（w = 0.59）和调查时期（w = 0.49）获中等支持，湿度、海拔和土地覆盖支持可忽略。模型平均表明花岗岩巨石休息点采集率约为洞穴的两倍，细质地土壤采集率显著高于中等质地土壤。NDVI和调查时期对蜱计数无显著影响。Moran's I在k = 3至20最近邻方案下未检测到一致的空间自相关。
*软蜱物种鉴定与血餐分析*：84只蜱的16S rRNA基因序列在约270核苷酸区域完全一致，系统发育分析确认Coutada 9存在的物种为*O. phacochoerus*。部分16S rRNA基因系统发育分析确认*O. phacochoerus*存在于三个南部非洲国家，全基因组、完整16S rRNA基因和部分16S rRNA基因序列的比较分析能够区分*O. moubata*复合体内的各种。136只饱血蜱中8只（5.88%）血餐鉴定成功，鉴定出疣猪（5份）、人类（1份）、家犬（1份）和陆龟（2份）四种宿主，序列相似性为97.18%至99.74%。携带人血的蜱因16S rRNA PCR扩增失败未能确认蜱种，但匀浆前照片确认为*Ornithodoros*蜱。
**讨论与结论**
讨论部分指出，本研究中洞穴侵染率（69.7%）低于此前*O. phacochoerus*的研究报道，可能归因于局部环境差异或采样方法（特别是采样时长）的不同。在该空间尺度上，所研究的解释变量均未对蜱存在发挥作用，但标准化蜱计数依赖于栖息地类型和土壤质地。湿度、海拔、植被指数和土地覆盖在本研究背景下未显示显著效应。调查时期不影响蜱数量，但因2023年雨季末仅采样一次，采样时期与年份混杂，无法得出季节效应结论。细质地土壤比中等质地土壤更有利于蜱计数，细质地土壤可能更便于蜱隐藏和钻洞，提供更有利的微栖息地。花岗岩巨石休息点采集率高于洞穴，可能反映巨石休息点更易采样，且可能被更多潜在蜱宿主访问。血餐分析鉴定出疣猪、陆龟、家犬和人类四种宿主，与软蜱非宿主特异性的既往研究一致。高比例PCR阴性结果最可能归因于血餐消化影响DNA完整性。疣猪在5份血餐样品中检出，符合预期。陆龟作为*O. phacochoerus*血餐来源的发现与南非陆龟感染软蜱的报道一致。人类和家犬序列分别从相距约28.62 km的55号和69号洞穴采集的蜱中回收，研究区域为禁猎区，有狩猎和露营活动，可解释人类和伴侣动物血餐的检出。研究结果为初步性，旨在为未来短扩增子宏条形码研究奠定基础。研究结论：本研究证明栖息地和土壤类型在*O. phacochoerus*于莫桑比克中部分布中发挥作用，探索性血餐分析检测到四种脊椎动物宿主DNA分类群。
