泛素介导的血小板功能调控机制解析

《Platelets》：Mechanistic insights into ubiquitin-mediated regulation of platelet function

　　

血小板功能受复杂的信号通路网络调控。虽然磷酸化是最广为人知的调控方式，但包括乙酰化和泛素化在内的其他翻译后修饰也参与调节血小板信号传导和活化。越来越多的证据表明，血小板活化会改变血小板蛋白的泛素化谱并增强蛋白酶体活性，这支持了泛素-蛋白酶体机器参与调控血小板功能反应的假说。与此同时，针对泛素通路靶向疗法用于治疗多种疾病的研究日益受到关注，这凸显了这些机制在更广泛的生理和临床层面的相关性。在本综述中，研究人员将探讨目前对泛素介导的血小板信号传导和活化调控的认识，重点介绍新兴的机制性见解和未来研究的关键领域。通俗语言摘要：背景是什么？血小板活化和功能反应通过内部信号通路网络进行调控。细胞内信号传导涉及一系列蛋白质之间的相互作用。这些蛋白质可以通过不同方式被修饰，从而改变其行为方式并进而影响血小板的行为。本综述讨论了一种翻译后修饰——泛素化，即泛素蛋白被附着到其他靶蛋白上。这种附着可以引导蛋白质走向降解（导致功能丧失）并改变下游信号传导。关于血小板中这一过程的信息有限，本综述汇集了当前证据以展示泛素化如何影响血小板执行其功能。新发现是什么？现有文献表明，当血小板被活化时，整体泛素化水平升高，表明泛素化在血小板功能调控中发挥作用。与泛素化相关的疾病，如VEXAS综合征，以及临床上使用的泛素通路靶向疗法，均与血小板计数异常和止血功能异常相关，进一步支持了泛素化在血小板中的重要性。研究还表明，泛素化在血小板的产生和随时间衰老的过程中发挥作用。一些机制性研究报道了泛素化通路的特定组分如何直接调控主要血小板信号通路中的蛋白质。影响是什么？泛素化已被证明是血小板活化和信号传导的主要调节因素。这表明泛素通路组分可能成为未来靶向血小板治疗的潜在靶点。已识别出当前研究中的空白，并建议进一步研究以增进对这些通路的理解。关键词：血小板；蛋白酶体；信号传导；泛素化

引言

翻译后修饰（PTMs）调控蛋白质的功能、稳定性和定位。在血小板中，PTMs在调节血小板活化和血栓形成中发挥关键作用。鉴于血小板缺乏转录能力，与有核细胞相比，血小板可能更依赖于PTMs来快速调控蛋白质信号反应和细胞功能。在多样化的PTMs中，泛素化已成为止血和血栓形成的关键调节因素，影响静息和活化血小板中的蛋白质周转和信号通路。血小板拥有活跃的泛素-蛋白酶体系统，由蛋白酶体活性、泛素E1、E2和E3酶以及去泛素化酶（DUBs）组成。在本综述中，研究人员讨论支持泛素-蛋白酶体系统在血小板信号通路和功能反应调控中作用的新兴证据。

泛素化

泛素化是一种可逆的翻译后修饰，其中76个氨基酸的蛋白质——泛素通过共价键附着到靶蛋白的赖氨酸残基上。泛素转移通过泛素激活酶（E1）、泛素结合酶（E2）和泛素连接酶（E3）的顺序作用发生，而DUBs去除泛素以维持细胞泛素池（图1）。泛素由E1酶通过ATP依赖性反应激活，转移至E2酶，随后通过E3连接酶附着到底物蛋白上。在人类中，该系统仅包含两种泛素特异性E1酶、约40种E2酶和600–700种E3连接酶，在泛素化级联中提供递增的底物特异性水平。泛素可以以单体形式附着到靶蛋白上，或通过泛素的七个赖氨酸残基（K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63）中的任何一个或其N端甲硫氨酸（M1）组装成多泛素链，不同的连接类型编码不同的细胞结局。K48连接的链经典地通过26S蛋白酶体靶向蛋白质进行降解，而K63链参与形成参与细胞信号传导的蛋白质复合物。其他连接类型，包括K33，已被牵涉到非降解性功能中，如调节AMPK相关蛋白活性和细胞内蛋白质运输。泛素系统已被其他研究组更详细地综述，可在此处查阅。

血小板表达泛素机器

蛋白质组学和生化研究表明，血小板表达两种E1泛素激活酶UBA1和UBA6，以及至少13种E2泛素结合酶、32种E3连接酶和15种DUBs（图2）。对公开可用的人类和小鼠血小板蛋白质组的比较鉴定出至少70种两个物种共有的泛素酶（图2A）。虽然小鼠血小板整体表达更多数量的泛素酶，但表达模式在很大程度上是保守的（图2B–E）。UBA1似乎是两个物种中表达量最高的E1酶，而UBE2N、UBE2V1、UBE2L3、UBE2O和UBE2D3是表达量最高的E2酶。表达量最高的E3泛素连接酶和DUBs在物种间似乎有所不同，尽管E3泛素连接酶CBL、HECTD3、RBX1和TRIM25，以及DUBs OTUB1、USP5和UCHL3在人类和小鼠血小板中均显示相对较高的表达（图2B–E）。除了泛素酶和DUBs的表达外，血小板还表达构成26S蛋白酶体的亚基（图3A–E），包括催化活性20S亚复合物和19S调控碱基和盖亚基。有趣的是，大多数蛋白酶体亚基的蛋白质拷贝数在小鼠血小板中更高，然而，人类和小鼠血小板中的相对表达模式相似。

血小板具有活跃的泛素化组

研究血小板泛素化的调查表明，血小板泛素机器在功能上是活跃的。在静息血小板中，广泛的泛素化是明显的，有来自691种蛋白质的1,643个泛素化肽段，且超过一半在GPVI刺激后增加两倍。对这些泛素化肽段的分析鉴定出多种多泛素链类型的增加，包括K6、K11、K27、K48和K63连接，表明泛素化在信号传导和蛋白质周转中均有作用。此外，DUB抑制剂可快速增加静息血小板中的泛素化，表明血小板蛋白质组经历持续的泛素化和去泛素化循环。ADP刺激后血小板的时间磷酸化蛋白质组学鉴定出E3连接酶HACE1、HUWE1、MYCBP2和ANKIB1的差异性磷酸化，而清道夫受体CD36的泛素化与表面表达降低和信号传导减弱相关。在同一研究中，观察到多泛素处理可减弱血小板聚集反应。这些观察进一步支持泛素介导的机制在调节血小板信号反应和活化中的作用。

泛素酶对血小板生物学的贡献

E1泛素激活酶

E1泛素激活酶UBA1和UBA6参与催化泛素的ATP依赖性激活，通过形成高能硫酯中间体并将泛素转移至E2酶。在血小板中，使用药理学E1酶抑制剂PYR-41的研究表明，整体E1酶活性是血小板活化和血栓形成所必需的，用PYR-41预处理后，对多种血小板激动剂（ADP、胶原和凝血酶）的血小板聚集、黏附和颗粒分泌显著减少。未来的研究可以使用更新的更特异性UBA1抑制剂（如TAK-243）来复现这些实验，并利用UBA1和UBA6功能缺失实验来进一步验证这些药理学发现并确定它们在血小板信号传导和功能中的各自作用。有趣的是，UBA1的突变导致VEXAS综合征，这是一种X连锁综合征，与血小板减少和血栓形成均相关，可能暗示UBA1参与调节血小板生成和功能。虽然血栓形成可能由全身性炎症、凝血因子改变和血管功能障碍驱动，但血小板减少的机制尚不清楚，尽管异常巨核细胞生成和骨髓衰竭可能有所贡献。需要进一步研究来确定UBA1的血小板特异性功能下游靶点。

E2泛素结合酶

E2酶在泛素化级联中作为中间体，促进泛素通过E3连接酶附着到靶蛋白上，并有助于确定泛素链连接和结构。尽管在血小板蛋白质组中鉴定出多种E2酶，但只有少数与血小板功能有机制性关联。一项针对纤维蛋白介导的血凝块回缩的小分子抑制剂药理学筛选揭示，UBE2N抑制剂NSC697923是血小板驱动的血凝块回缩（血栓稳定的关键过程）的强效抑制剂。同样，BAY11-7082现被认为是一种UBE2N抑制剂（对NF-κB具有潜在脱靶效应），可减少胶原刺激的血小板聚集、P-选择素暴露和板状伪足形成。这些观察可能与增强的抑制性信号传导有关，因为观察到BAY11-7082处理增加了cAMP水平和VASP磷酸化，表明蛋白激酶A（PKA）激活。UBE2N是K63连接泛素链组装的公认决定因素，但在血小板中，需要进一步研究来确定这些功能观察是否与UBE2N活性或NF-κB的非特异性抑制剂作用相关。UBE2O是一种具有E3样活性且泛素连接特异性未定的E2酶，已被牵涉到慢性肾病（CKD）中血小板寿命和计数降低。Lan等人发现，在体内人和小鼠血小板中，UBE2O与抗凋亡蛋白Bcl-xL的相互作用增加，Bcl-xL的K48连接泛素化和降解增加，而蛋白酶体抑制剂MG132可减弱这一效应，支持蛋白酶体降解的作用。虽然这些发现暗示E2酶参与调节血小板存活，但UBE2O驱动Bcl-xL泛素化和降解的直接证据仍然有限，值得通过功能缺失研究进行调查。其他细胞类型的研究表明，其他E2酶可能通过与Cbl和CHIP等E3连接酶的相互作用来调节血小板信号事件，尽管等效机制尚未在血小板中得到证实。UBE2D3和UBE2N/UBE2V1通过激活E3连接酶Cbl来调节Syk，而UBE2D3、UBE2L3和UBE2N选择性 interacting with CHIP，后者已被证明在血小板信号传导中发挥作用，将在下一节中进一步详细讨论。在理解血小板E2酶功能方面仍存在重大空白。确定它们的E3结合伙伴、底物和泛素链连接特异性对于理解降解性和非降解性泛素化如何调节血小板信号传导至关重要。

E3泛素连接酶

E3泛素连接酶在泛素-蛋白酶体系统中赋予底物特异性，促进泛素转移到靶蛋白上，从而调节其降解活性、定位或与结合伙伴的相互作用。通过确定哪些蛋白质被泛素化，鉴定关键的血小板E3连接酶因此将提供关于泛素化如何调节血小板信号传导和功能的关键机制性见解。E3连接酶广泛分类为RING指蛋白、RING-between-RING（RBR）、U-box蛋白和HECT结构域（与E6相关蛋白C端同源）蛋白，这些类别的成员在血小板中表达（图2）。HECT和RBR E3连接酶通过形成泛素-E3中间体的催化半胱氨酸残基催化泛素转移，而RING指和U-box E3连接酶作为分子支架，促进泛素从E2酶直接转移到靶蛋白。Cullin-RING连接酶（CRLs）是最大的E3泛素连接酶家族，在血小板中表达。Cullin-5最近已被牵涉到巨核细胞生成的调控中，然而CRLs对血小板信号传导和功能的贡献仍未被探索。E3连接酶在调节血小板ITAM、GPCR和NF-κB连接信号通路中的作用将在下文讨论（图4）。

E3连接酶与ITAM信号传导

ITAM和半ITAM受体包括GPVI、FcγRIIA和CLEC-2受体，通过酪氨酸激酶连接信号通路调节血小板活化。Syk是ITAM和半ITAM信号传导的关键介质，已被证明受Cbl家族血小板RING指E3泛素连接酶（c-Cbl、Cbl-b和Cbl-c）的调控。c-Cbl被认为以非降解方式负调控Syk，调节血小板对GPVI的功能反应。c-Cbl缺陷小鼠血小板显示FcRγ链、Syk和PLCγ2磷酸化增加，与WT对照相比血小板聚集反应增加。机制上，c-Cbl依赖性的Syk泛素化促进包括TULA2在内的磷酸酶募集，以去磷酸化并下调Syk活性。相反，Cbl-b通过促进BTK和PLCγ2正向调节GPVI信号传导，可能作为支架分子发挥作用，Cbl-b缺陷小鼠血小板表现出受损的血小板聚集、颗粒分泌、钙动员和血栓稳定性。有趣的是，最近一项研究表明，接受抗坏血酸治疗的移植患者血小板中Cbl-b表达增加、c-Cbl磷酸化降低，与凝血时间缩短和血凝块硬度增加相关，尽管需要更多证据来支持该表型依赖于Cbl家族。总之，这些研究确定Cbl家族E3连接酶是血小板信号传导和止血的关键调节因子，介导对GPVI依赖性通路的正向和负向控制，并提供直接机制证据表明泛素化通过非降解通路调节Syk信号传导。CLEC-2是一种血小板半ITAM连接受体，是U-box E3酶CHIP在HEK293T细胞中的靶标，其中CHIP介导的K48连接泛素化促进受体降解以下调CLEC-2信号传导。鉴于CLEC-2在血栓炎症反应中的作用，这些观察提供了泛素依赖性受体周转可能影响血小板功能的证据。结合GPVI刺激后观察到的ITAM连接信号蛋白的广泛泛素化，这些发现表明泛素化作为ITAM依赖性信号通路的关键调节因子，通过降解性和非降解性机制发挥作用，调节受体丰度和下游激酶活性及信号事件。然而，许多活化诱导的泛素化 event 的功能重要性及其相关的泛素链连接仍然未知。

E3连接酶与GPCR信号传导

包括ADP、血栓烷A2和凝血酶在内的激动剂下游GPCR信号传导通过激活G蛋白（主要为Gq、Gi和G12/13）和调节钙动员和环核苷酸信号传导的下游信号通路来调节血小板活化。来自其他细胞类型的证据指向泛素介导的蛋白酶激活受体PAR1受体表面表达和下游信号传导的调控。使用表达突变PAR1受体的细胞的研究表明，受体在K421和K422残基处的泛素化阻止受体内化并维持受体可供激活。此外，在内皮细胞中，HECT结构域E3连接酶NEDD4-L促进PAR-1的K63连接泛素化，促进衔接蛋白TAB2（通过其NZF结构域）和TAB1的募集以诱导p38/MAPK信号传导。由于p38/MAPK促进血小板活化的多个方面，包括黏附、颗粒分泌和血栓烷A2合成，类似的机制可能在血小板中运作。NEDD4-L是否参与血小板中的PAR-1或p38/MAPK信号传导仍有待研究。这些观察表明泛素化可能作为PAR1和其他潜在GPCR连接信号传导的关键调节因子，通过控制受体定位和信号复合物组装的非降解性机制发挥作用。未来研究需要确定类似的泛素依赖性信号网络是否在血小板中运作，并鉴定涉及的E2和E3酶。

E3连接酶与NF-κB信号传导

在血小板中，NF-κB信号传导通过快速（非基因组/非经典）细胞质信号机制运作，继发于IKKβ磷酸化、IκBα降解和p65磷酸化。几种血小板E3泛素连接酶已被牵涉到血小板中的NF-κB信号通路。RING指E3连接酶TRAF6被认为泛素化MALT1，通过K63连接泛素化激活IKK/NF-κB信号通路，而RNF181通过添加K48泛素连接参与IκBα蛋白降解。然而，功能意义仍有待研究。SHARPIN、HOIP和HOIL-1协作形成RING-between-RING线性泛素链组装复合物（LUBAC），在凝血酶和其他炎症激动剂（脂多糖和可溶性CD40配体）刺激血小板后泛素化（可能形成M1连接链）NF-κB蛋白包括NEMO（IKK复合物的关键调控亚基）。LUBAC活性也已被鉴定为促进NF-κB p65亚基的磷酸化，p65活性与巨核细胞和血小板中P2Y12受体表达增强相关。这些观察进一步支持不同泛素链连接在血小板中履行专门信号功能的观点，尽管各个链结构调节下游血小板信号传导和功能反应的机制仍未完全理解。

E3连接酶与整合素调控

整合素αIIbβ3信号传导对血小板黏附、聚集和外向内信号传导至关重要，促进细胞骨架重组。在人血小板中，RING指E3连接酶RNF181已被报道与αIIbβ3整合素相互作用，然而功能意义尚未被研究。此外，在使用血小板特异性SHARPIN缺陷小鼠的研究中，非催化衔接蛋白SHARPIN被鉴定为αIIbβ3整合素表达的负调控因子，SHARPIN缺陷血小板表现出对纤维蛋白原的黏附增加。然而，SHARPIN在血小板功能反应中的作用仍无定论，因为这些结果与另一项研究的结果相矛盾，在该研究中SHARPIN缺陷小鼠的血小板在CRP-XL和U46619刺激后表现出减弱的血小板反应，以及在流动条件下胶原上血栓形成减少。需要进一步的机制研究来确定所有参与整合素信号传导和功能反应的E3连接酶、底物和泛素连接。

Cereblon

Cereblon（CRBN）是CRL4-CRBN复合物的底物受体，在血小板中表达。免疫调节酰亚胺药物（IMiDs）的结合改变CRL4-CRBN底物特异性，促进靶底物的泛素化和降解。研究来那度胺治疗对多发性骨髓瘤患者血小板反应性影响的研究表明，在患者和离体处理健康血小板中，来那度胺治疗增加了血小板聚集、纤维蛋白原结合、α颗粒分泌和体外血栓形成。然而，将cereblon活性与血小板信号传导联系起来的分子机制仍未完全理解，应进一步研究。

DUBs在血小板功能和血栓形成中的作用

DUBs从蛋白质上移除单体和聚合泛素链，维持游离泛素池并控制泛素介导的反应和相互作用。许多DUBs还对特定泛素链连接显示偏好性，使得能够选择性调节降解性和非降解性泛素信号事件。有趣的是，最近一项研究鉴定出老年小鼠和人类血小板中泛素化水平降低，这与DUBs OTUB1（特异性靶向K48连接）和USP9X（对K11、K63和K48连接链显示特异性）表达增加相关。这些发现表明血小板衰老与泛素信号通路的选择性重塑相关，DUB活性增加可能影响降解性和非降解性信号通路。几种DUBs已被牵涉到血小板活化和聚集（图5），尽管当前证据大多来自药理学抑制研究，因此在得到互补遗传学方法支持之前应谨慎解释。使用泛DUB抑制剂PR619、USP14/UCHL5抑制剂b-AP15和USP25/USP28抑制剂AZ1抑制DUB活性均证明了DUBs和蛋白质靶向去泛素化在正向调节血小板功能中的作用。PR619处理增加血小板蛋白的泛素化，减弱血小板聚集，减少整合素活化并减少血栓形成。同样，使用b-AP15抑制蛋白酶体相关的USP14和UCHL5可减弱胶原和凝血酶介导的聚集反应并减少αIIbβ3整合素活化，与钙动员和Akt信号传导减少相关，有趣的是，这些效应似乎独立于Akt的蛋白质水平，表明一种不同于蛋白酶体降解的机制。最近对USP25（一种优先识别和水解K48连接多泛素链的DUB）的研究使用USP25缺陷小鼠和药理学USP25/USP28抑制剂AZ1证明USP25正向调节血小板活化。机制上，这归因于维持Talin-1表达，支持整合素介导的功能包括整合素活化、黏附、铺展、聚集和血栓形成。观察到小鼠血小板中USP25的抑制或基因缺失导致血小板Talin-1蛋白水平通过蛋白酶体靶向降解降低。这些发现确定USP25是血小板中降解性泛素信号传导的关键负调控因子，其功能是去除靶向蛋白酶体的K48连接泛素链。有趣的是，还观察到USP25?/?小鼠与WT对照相比血小板计数增加。虽然这与USP25在血小板生成中的潜在作用一致，但血小板寿命和清除的改变也是潜在机制。USP15缺陷小鼠表现出出血时间延长、血凝块回缩受损和血栓形成减少，表明USP15在血小板功能中的正向作用。USP15被提出调节FKBP5功能和αIIbβ3的活化。由于USP15缺陷不影响FKBP5表达水平，而是直接与FKBP5结合，潜在机制可能涉及FKBP5功能的翻译后调控而非控制其降解。这些观察表明USP15通过调节整合素活化所需的信号事件来促进血小板功能，尽管涉及的泛素化事件和底物仍有待确定。一项大型化合物筛选还鉴定出DUB抑制剂degrasyn（USP5、UCH-L1、USP9x、USP14和UCH37的抑制剂）是血凝块回缩和血小板铺展的强效抑制剂，这些功能高度依赖于血小板外向内信号传导和细胞骨架重排。这些发现进一步表明可逆泛素化参与调节血小板黏附和细胞骨架动力学。然而，由于degrasyn同时抑制多种DUBs，负责这些效应的特定酶、底物和泛素链结构仍未知，突显了未来研究的重要领域。这些发现证明可逆泛素化在调节血小板信号传导、蛋白质相互作用、细胞骨架重塑和血小板功能中的重要性。然而，大多数血小板DUBs靶向的底物和泛素链结构仍未鉴定，限制了去泛素化如何调节降解性和非降解性血小板信号通路并控制血小板功能的机制性理解。

蛋白酶体调控血小板功能和寿命

26S蛋白酶体靶向泛素缀合的底物进行蛋白水解，已在其他地方详细综述（图6）。在血小板中，蛋白酶体是组成性活跃的，响应血小板激动剂刺激（胶原、凝血酶和ADP）观察到蛋白酶体糜蛋白酶样活性增加高达10倍。有趣的是，几个蛋白酶体亚基（ADRM1、PSMA1、PSMC1、PSMC3、PSMC6、PSMD1和PSMD3）在静息血小板中被泛素化，表明额外的蛋白酶体调控水平。研究蛋白酶体抑制剂对血小板功能反应影响的研究已确定蛋白酶体活性是正常血小板功能所必需的。MG132是一种三聚体亮氨酰基蛋白酶体药理学抑制剂，已在多项研究中显示以剂量依赖性方式抑制多种血小板激动剂（胶原、凝血酶、ADP和U46619）引起的整合素αIIbβ3活化和血小板聚集。Gupta等人进一步证明MG132导致FeCl3损伤颈动脉中血小板积累减少，并在用离体MG132处理的血小板重建的小鼠中减少血栓形成后的血管闭塞。使用替代蛋白酶体药理学抑制剂硼替佐米也做出了类似观察。机制上，Gupta等人（2014）证明参与细胞骨架重排的Filamin A和Talin-1可能作为被泛素化的潜在靶标，表明抑制这些关键蛋白的降解会破坏血小板活化后发生的细胞骨架重排、形状改变、脱颗粒和微粒释放。此外，一项研究外泌体多泛素处理对血小板功能影响的研究表明，使用MG132抑制蛋白酶体能够恢复多泛素诱导的CD36表面表达减少，CD36是一种促进血栓形成的清道夫受体。这些发现强调蛋白酶体参与调节血小板功能和寿命（图6），然而负责这些效应的泛素依赖性降解通路在很大程度上仍未定义。几项研究还证明蛋白酶体调节血小板寿命。药理学抑制蛋白酶体使血小板半衰期减少约50%，伴随血小板凋亡标志物的变化，包括促凋亡BAX表达增加、线粒体跨膜电位降低和磷脂酰丝氨酸暴露增加。其他研究已证明与血小板衰老相关的血小板蛋白质组减少，血小板蛋白质含量随"年龄"而减少，"年老"血小板与"年轻"网状血小板相比蛋白质含量减少50%。观察到几种细胞骨架相关蛋白的蛋白质水平显著降低（图6）。虽然负责这一现象的机制尚不清楚，但其他细胞类型中细胞骨架相关蛋白及其调控因子（包括cofilin和RhoA）的泛素依赖性降解提出了泛素依赖性蛋白水解有助于血小板衰老过程中细胞骨架重塑和蛋白质丢失的可能性，尽管目前在血小板中缺乏直接证据。

泛素化的治疗性调控

泛素-蛋白酶体系统的组分包括蛋白酶体抑制剂（硼替佐米、卡非佐米、伊沙佐米）和靶向Cereblon的免疫调节酰亚胺药物（IMiDs）（来那度胺和泊马度胺）已在临床上被靶向。然而，在接受这些治疗的患者中已报道了血小板相关不良事件。蛋白酶体抑制剂治疗与血小板减少相关，可能由于抑制血小板生成（图6），而IMiD治疗与血小板减少和血栓栓塞风险增加均相关。虽然IMiD诱导的血小板减少与cereblon介导的芳香化酶降解和抑制前血小板形成相关，但血栓栓塞风险增加与血小板凝血酶敏感蛋白-1表达增加相关，后者抑制循环ADAMTS13。目前处于临床试验中的一种新兴治疗方法是蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs），能够通过将特定蛋白质带到特定E3连接酶的附近来靶向其降解。几项血小板研究已证明PROTAC介导的信号蛋白BTK和TEC的成功降解，导致血小板功能抑制，支持cereblon在血小板中的活性。PROTACs提供了一种有前景的方法，具有更高的选择性、更低的脱靶毒性和更持久的靶标降解。这些发现表明选择性操纵泛素依赖性通路可能为开发下一代抗血小板策略提供机会，实现比传统方法更高的特异性。对泛素通路调节剂开发的日益关注凸显了靶向泛素信号传导治疗血小板介导疾病的治疗潜力。然而，目前的大部分理解来自使用具有不同靶标选择性的抑制剂的研究，强调需要互补的遗传学和机制性方法来定义血小板泛素依赖性信号通路，这将支持新型抗血小板靶标的鉴定以及改善治疗相关止血并发症的预测和管理。

结论

泛素化已成为血小板信号传导、活化和血栓形成的关键调节因子。血小板拥有活跃的泛素-蛋白酶体机器，并表现出活化依赖性泛素化的快速变化，调节GPVI、NF-κB、整合素和细胞骨架信号通路。虽然几种E1、E2和E3酶以及DUBs已被与血小板功能调控相关联，但许多底物的身份仍然未知，不同泛素链拓扑结构对血小板信号传导的功能意义尚未被探索。需要更全面地理解泛素化如何与其他翻译后修饰交叉调节蛋白质稳定性、定位和信号级联动力学。应利用蛋白质组学和泛素化组学技术的进步来加速新型底物和调控通路的鉴定，提供对泛素介导的血小板生物学控制的更全面理解。解决这些知识空白对于鉴定新型血小板特异性治疗靶标以管理血小板相关出血和血栓性疾病至关重要。