《Aquaculture Reports》：Role of phycospheric bacteria: Promoting the growth of
Isochrysis zhanjiangensis and ammonia nitrogen removal in rearing water
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湛江等鞭金藻（Isochrysis zhanjiangensis）是双壳类幼虫人工培育中的关键饵料微藻。为解析藻菌互作功能，研究人员从该藻中分离出两株藻际细菌——Halomonas piezotolerans与Alteromonas abrolhosensis
湛江等鞭金藻（Isochrysis zhanjiangensis）是双壳类幼虫人工培育中的关键饵料微藻。为解析藻菌互作功能，研究人员从该藻中分离出两株藻际细菌——Halomonas piezotolerans与Alteromonas abrolhosensis，并评估其对藻体生长及养殖水体氨氮（NH??–N）去除的影响。结果表明两株菌均促进I. zhanjiangensis增殖，其中A. abrolhosensis效应更强：在10? cfu/mL接种量下，第10天藻细胞密度达1.082×10? cells/mL，较对照提高16.22%（p<0.05）；叶绿素a为4.985 μg/L（提升43.62%，p<0.05），总多糖达8.366 g/L（提升59.90%，p<0.05）。H. piezotolerans在10? cfu/mL时使可溶性蛋白提升4.65%（p>0.05），低接种量下更利于蛋白合成。氨氮去除实验中，H. piezotolerans表现更稳定持久，A. abrolhosensis亦有贡献。定量PCR显示：H. piezotolerans中nirB与nosZ基因上调，A. abrolhosensis中nirB、glnG、glnL、glnA表达增强，提示其参与氨氮转化。该研究证明藻际细菌可同步促进饵料微藻生长与育苗水体脱氮，为微生态辅助育苗提供新思路。
研究背景与立项依据
在双壳类人工育苗中，湛江等鞭金藻作为开口饵料微藻，其生物量与营养品质直接关系幼虫存活与变态。微藻在自然与工业扩培中并非纯培养，而是与周围细菌群落形成“藻际（phycosphere）”微环境，二者存在互利、竞争与代谢互补。已有研究多单独关注促藻或废水脱氮，少有将“藻菌互作—饵料品质—育苗水体氨毒害消减”贯通考察。养殖水体中氨氮（NH??–N）来自残饵、排泄与有机物分解，对D形幼虫等早期阶段具有免疫抑制与生长抑制风险。因此，甄别可同时促藻并降氨的藻际功能菌，是提升清洁育苗效率的关键科学问题。
研究人员以工业级扩培的湛江等鞭金藻为材料，通过梯度稀释涂布分离藻际可培养细菌，经16S rDNA鉴定获得Halomonas piezotolerans与Alteromonas abrolhosensis两株菌；利用抗生素处理获得无菌（axenic）藻种，排除本底菌群干扰，开展藻菌共培养与模拟蛤仔育苗水体试验，并结合qRT-PCR解析氮代谢功能基因响应，最终证实两株菌具“促生长+脱氨”双功能。
主要关键技术方法
研究人员首先建立无菌湛江等鞭金藻体系，样本藻源来自天津海升水产公司藻类车间；通过平板分离结合16S rDNA测序鉴定藻际细菌。共培养实验以无菌藻为基底，设不同菌浓度梯度，测定细胞密度、叶绿素a、可溶性蛋白与总多糖。育苗水体试验以菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）D形幼虫为生物模型，在过滤海水中投加无菌藻与单菌株，定期换水并检测NH??–N。脱氮机制验证采用含NH?Cl的2216E体系，联合生长曲线与qRT-PCR，以16S rDNA为内参，用2^-ΔΔCt法分析nirB、nosZ、glnG、glnL、glnA相对表达。
研究结果
3.1 藻际细菌分离与鉴定
经划线纯化与16S rDNA BLAST比对，获两株菌：H. piezotolerans（相似度99.58%，菌落白、圆、不透明）与A. abrolhosensis（相似度99.15%，略透明）；生化显示前者脲酶阳性，后者半固体与葡萄糖发酵阳性，确认分类与生理特征。
3.2 藻际细菌与I. zhanjiangensis共培养结果
抗生素处理后平板无菌，获得可用无菌藻。共培养10天显示：两菌均促增殖且效应随接种量升高增强。10? cfu/mL时，H. piezotolerans使密度增14.43%，A. abrolhosensis增16.22%；叶绿素a分别在第8天后持续上升，A. abrolhosensis最高4.985 μg/L（增43.62%，p<0.05）。蛋白方面，H. piezotolerans低浓度增4.65%（不显著），A. abrolhosensis略降；多糖普遍升高，A. abrolhosensis达8.366 g/L（增59.90%，p<0.05），说明碳代谢被显著激活。
3.3 两藻际细菌对育苗水体氨氮去除及基因表达
在蛤仔D形幼虫水体中，对照无去除，两菌均降氨：H. piezotolerans第4、6天达14.88%与7.79%（p<0.05），中期稳定；A. abrolhosensis第2天达8.94%（p<0.05），前期快但衰减。独立验证中，A. abrolhosensis 4小时去除率峰值36.81%（p<0.05）。基因层面，H. piezotolerans的nosZ显著上调9.00%，nirB略升；A. abrolhosensis的nirB显著升19.00%，glnG/glnL/glnA亦升，提示经同化（谷氨酰胺合成）与亚硝酸还原协同脱氮。
讨论部分总结
讨论指出，藻菌以游离共存为主，附着比例低；H. piezotolerans偏重氮代谢与持续反硝化（denitrification）潜力，A. abrolhosensis偏重快速同化吸收与碳水化合物积累。两者功能互补：前者稳水质，后者提饵料碳源品质。研究也承认仅测NH??，未量化NO??、NO??、N?O、N?，路径仍为“潜在”结论。该工作把工厂化饵料藻扩培与幼虫育苗链路打通，为益生菌（probiotics）辅助清洁育苗提供依据。
结论部分翻译
本研究从湛江等鞭金藻中分离鉴定两株藻际细菌H. piezotolerans与A. abrolhosensis，探明其对微藻生长与养殖水体氨氮去除的作用。结果显示：两菌均显著提升藻细胞密度、叶绿素a与多糖积累；H. piezotolerans低浓度促蛋白合成，A. abrolhosensis大幅增强多糖积累；水质端H. piezotolerans去除更稳更强，与其高效氮代谢相关。结论深化了育苗系统中有益藻菌互作认知，为“微生物辅助饵料提质+水体维稳”的可持续育苗策略奠定科学基础，后续需在商业化规模验证。
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