术前全身炎症综合指数与血清hsa_circ0076251联合预测Ⅱ/Ⅲ期结直肠癌根治术后2年复发的单中心研究

《Cancer Management and Research》：Preoperative Aggregate Index of Systemic Inflammation and Serum 3 Hsa_circ_0076251 are Associated with the 2- Year Recurrence of Stage II/III 4 Colorectal Cancer: A Single- Center

　　

本研究为单中心、回顾性队列研究，旨在评估术前全身炎症综合指数（Aggregate Index of Systemic Inflammation, AISI）和血清hsa_circ_0076251对Ⅱ/Ⅲ期结直肠癌（colorectal cancer, CRC）患者根治术后2年复发的预测价值。研究人员回顾性分析了156例患者，其中148例至少接受24个月无复发生存随访，或在2年内经历复发/死亡，并被纳入2年无复发生存（recurrence-free survival, RFS）分析。AISI由术前血常规计算，hsa_circ_0076251通过定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR）进行定量。采用多因素Cox回归和受试者工作特征（receiver operating characteristic, ROC）曲线分析确定独立预测因子并评估诊断性能。多因素分析中将辅助化疗作为协变量纳入。通过Bootstrap重抽样和10折交叉验证进行内部验证。51例患者（32.7%）发生复发。在调整T分期、N分期、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）和辅助化疗后，高AISI（≥520；风险比（hazard ratio, HR）=2.71，95%置信区间（confidence interval, CI）：1.58–4.66，P<0.001）和低hsa_circ_0076251（<0.65；HR=2.29，95% CI：1.32–3.95，P=0.003）仍是预后不良RFS的独立预测因子。联合模型的表观曲线下面积（area under the curve, AUC）为0.82（95% CI：0.75–0.88），通过Bootstrap重抽样进行内部验证后乐观校正AUC为0.78（95% CI：0.70–0.85）；这些结果在临床应用前仍需外部验证。通过高AISI联合低血清hsa_circ_0076251识别的高危患者，其2年无复发生存率显著低于低危患者（45.2% vs 88.9%；P<0.001）。这些发现在考虑任何临床应用前均需外部验证。术前AISI和血清hsa_circ_0076251是协同的独立生物标志物，可能有助于改善CRC的早期复发风险分层。然而，目前模型仍处于研究阶段，在独立、前瞻性、多中心队列验证之前，不应被用于指导辅助治疗或监测决策。这些发现是初步且具假设生成性的；在常规临床应用前，需要前瞻性、多中心、经外部验证的研究。

结直肠癌（colorectal cancer, CRC）仍是全球重大健康问题。Ⅱ/Ⅲ期患者虽接受根治性切除，复发率仍较高，驱动着更优预后工具的持续研究。目前主要风险分层工具美国癌症联合委员会（American Joint Committee on Cancer, AJCC）TNM分期系统依赖解剖学范围，但未能充分反映肿瘤生物学行为与宿主免疫反应，导致各分期内预后存在显著异质性。现有基于指南的风险分层主要依赖TNM分期、错配修复状态及特定临床病理特征，但这些指标无法完全捕捉宿主全身炎症状态或肿瘤来源分子异质性。全身炎症作为癌症的关键特征，显著影响肿瘤微环境并驱动复发转移。衍生于常规血液检测的全身炎症指数，如中性粒细胞/淋巴细胞比值（neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR）和血小板/淋巴细胞比值（platelet-to-lymphocyte ratio, PLR），在CRC中具有预后意义。其他复合指标如全身免疫炎症指数（systemic immune-inflammation index, SII）和预后营养指数（prognostic nutritional index, PNI）亦与CRC预后相关。AISI与这些指标的区别在于同时纳入中性粒细胞、单核细胞、血小板和淋巴细胞，从而捕获更广泛的先天免疫激活、血小板增多和淋巴细胞减少。然而，AISI与SII、PNI在Ⅱ/Ⅲ期CRC中的直接比较研究仍然有限。与此同时，液体活检生物标志物，特别是稳定的循环非编码RNA环状RNA（circular RNA, circRNA），为了解肿瘤生物学提供了微创窗口。hsa_circ_0076251来源于ANKRD12基因座，初步证据提示其在CRC组织中下调，可能通过海绵化吸附致癌性miR-942-5p抑制肿瘤生长与侵袭，但现有证据有限且需独立验证。该circRNA具有明确的宿主基因座、CRC中的初步功能证据及血清中可检测表达，但其在Ⅱ/Ⅲ期CRC术前血清中的预后价值尚未确立。因此，本研究旨在调查术前AISI和血清hsa_circ_0076251对Ⅱ/Ⅲ期CRC根治术后2年复发的个体及联合预测价值。

本研究为单中心、回顾性队列研究，于2020年1月至2023年12月在上海松江区中心医院及九亭分院开展。研究人员回顾性分析了156例接受根治性切除（R0）的Ⅱ/Ⅲ期结肠或直肠腺癌患者，排除标准包括：诊断时同步远处转移（M1）、既往5年内其他恶性肿瘤病史、接受新辅助化疗或放疗、活动性感染、自身免疫性疾病或术前1个月使用抗炎药物、因梗阻/穿孔/大出血的急诊手术，以及临床资料不全或术前血清样本缺失。148例患者因至少24个月无复发随访或2年内复发/死亡而被纳入2年RFS分析。主要技术方法包括：基于术前1周内静脉血常规，按公式（中性粒细胞计数×单核细胞计数×血小板计数）/淋巴细胞计数计算AISI；采用qRT-PCR检测血清中hsa_circ_0076251表达，以cel-miR-39为内参，通过2^?ΔΔCt法相对定量；运用多因素Cox比例风险回归筛选独立预测因子，辅助化疗作为协变量纳入；通过ROC曲线分析评估各指标及联合模型的诊断效能；采用maximally selected rank statistics确定最佳截断值；通过Bootstrap重抽样（1,000次重复）和10折交叉验证进行内部验证，并生成风险评分及列线图（nomogram）。

基线患者特征
最终队列156例，中位随访27.8个月。51例（32.7%）在2年内复发。复发组T分期更晚、N分期更晚、术前CEA更高。112例（71.8%）接受辅助化疗，其中54例接受氟尿嘧啶类单药，58例接受奥沙利铂联合方案。

术前生物标志物水平
复发组中位AISI（735.4 vs 452.1）、NLR、PLR均显著更高，血清hsa_circ_0076251表达显著更低（0.42 vs 1.05，均P<0.001）。

最佳截断值确定
通过maximally selected rank statistics确定AISI预测2年复发的最佳截断值为520，hsa_circ_0076251为0.65。

单因素和多因素生存分析
单因素分析显示T分期、N分期、CEA≥5 ng/mL、高AISI（≥520）及低hsa_circ_0076251（<0.65）均为预后不良RFS的显著预测因子。多因素分析调整T分期、N分期、CEA及辅助化疗后，高AISI（HR=2.71，95% CI：1.58–4.66，P<0.001）和低hsa_circ_0076251（HR=2.29，95% CI：1.32–3.95，P=0.003）仍为独立预测因子，且二者效应在纳入辅助化疗后几乎不变。辅助化疗在多因素模型中与RFS无显著关联（HR=0.88，95% CI：0.54–1.43，P=0.598）。

生物标志物诊断性能
联合模型（表观AUC=0.82，95% CI：0.75–0.88）判别性能优于单独AISI（AUC=0.76，95% CI：0.68–0.83）或单独hsa_circ_0076251（AUC=0.80，95% CI：0.73–0.87）。内部验证后，Bootstrap重抽样乐观校正AUC为0.78（95% CI：0.70–0.85），10折交叉验证AUC为0.77。24个月时间依赖ROC显示联合模型AUC为0.81，高于单独AISI（0.75）和hsa_circ_0076251（0.79）。Bootstrap重抽样评估显示模型校准度可接受。

风险分层与临床效用
基于多因素模型生成风险评分，将156例患者分为高危组（n=59，高AISI且低hsa_circ_0076251）和低危组（n=97）。高危组2年RFS率为45.2%，显著低于低危组的88.9%（log-rank P<0.001）。整合N分期、CEA、AISI状态及hsa_circ_0076251状态的列线图总分范围为0–100分，对应2年复发概率0%–80%，但该工具仅供研究参考。

讨论指出，本研究首次将宿主全身炎症指数AISI与肿瘤来源循环circRNA hsa_circ_0076251联合用于Ⅱ/Ⅲ期CRC术后早期复发预测，符合现代肿瘤学“种子与土壤”假说，旨在同时评估宿主允许性全身环境与肿瘤内在恶性潜能。AISI通过同时纳入中性粒细胞、单核细胞、血小板和淋巴细胞，可捕获更广泛的先天免疫激活、血小板增多及淋巴细胞减少，其乘法公式可能放大多面性协同促转移的炎症信号。本研究在非转移性CRC中确立的AISI截断值520具有强生物学合理性。hsa_circ_0076251的低表达作为强独立预测因子，拓展液体活检在早期CRC预后中的应用，其闭环结构赋予的循环稳定性使其成为理想候选标志物，且本研究证实了其在血清中的可检测表达及与复发风险的明确负相关。联合模型识别出2年复发风险超过50%的高危亚组，对未来研究（如标准辅助化疗充分性、新型辅助药物或强化监测策略）具有假设生成意义。

然而，作者强调当前临床意义为探索性和假设生成性。由于回顾性单中心设计、选择偏倚风险、样本量限制亚组分析、仅关注2年复发时间窗、单一circRNA检测、功能机制未明以及辅助化疗详细依从性和剂量强度数据缺失，模型尚不能用于指导治疗强化、降级或监测策略。此外，本研究未进行决策曲线分析（decision curve analysis），且模型需在接受新辅助治疗的患者中进一步验证。

研究结论部分指出：术前AISI和血清hsa_circ_0076251是独立的、协同的预测因子，在本回顾性队列中与Ⅱ/Ⅲ期CRC根治术后2年复发相关。其联合评估可能提供潜在的无创工具以增强传统临床病理因素之外的风险分层，但尚待证实。将该双参数模型整合入术前评估仍是研究假设，需前瞻性、多中心、经外部验证的研究确认其性能与临床效用。目前发现应视为假设生成性，而非治疗强化、降级或监测决策的依据；在独立前瞻性多中心队列验证之前，模型不应纳入常规临床实践。