《Materials Today Bio》：Nanotechnology-enabled construction of bispecific and multispecific antibody platforms for enhanced antitumor therapy
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难治性实体瘤以显著的抗原异质性、致密组织屏障和免疫抑制微环境为特征，限制了传统单特异性抗体所实现的肿瘤覆盖和持久免疫清除。双特异性抗体（bispecific antibodies, BsAbs）和多特异性抗体（multispecific antibodies,
难治性实体瘤以显著的抗原异质性、致密组织屏障和免疫抑制微环境为特征，限制了传统单特异性抗体所实现的肿瘤覆盖和持久免疫清除。双特异性抗体（bispecific antibodies, BsAbs）和多特异性抗体（multispecific antibodies, MsAbs）可识别两种或更多抗原或表位，从而在单一治疗系统中整合肿瘤靶向、免疫细胞招募和多条信号通路调控。然而，可溶性BsAbs和MsAbs仍受限于循环稳定性欠佳、在实体瘤中穿透和蓄积不足、对抗体化学计量和空间组织控制有限，以及全身免疫激活相关毒性。纳米技术为解决这些局限提供了工程框架。通过化学偶联、亲和标签介导组装、抗mPEG（methoxy poly(ethylene glycol)；甲氧基聚乙二醇）/mPEG锚定或Fc（fragment crystallizable region；可结晶片段）介导结合，纳米载体可在单一平台上整合多种抗体和治疗模块，同时实现多价展示、定向固定和组分比例控制。纳米颗粒还可改善药代动力学和肿瘤暴露；多价结合和免疫细胞-肿瘤细胞桥接可得到增强，并可通过价数控制、刺激响应性释放和治疗载荷共递送实现局部激活和联合治疗。本文综述纳米技术赋能BsAbs和MsAbs的主要构建策略。研究人员分析这些系统如何增强结合亲合力、改善体内递送、提高治疗安全性并增强多模式抗肿瘤活性。结合已批准双特异性抗体和早期临床研究，讨论质量控制、免疫原性和可规模化生产等转化考虑。
该综述发表于《Materials Today Bio》，作者为Sheyu Ye、Jiayue Zhang、Meixia Lv、Shuliang Niu、Yi Zhang和Hongyu Chu。研究背景在于难治性实体瘤具有显著抗原异质性、致密组织屏障和免疫抑制微环境，传统单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAbs；识别单一抗原表位）难以实现充分肿瘤覆盖和持久免疫清除；双特异性抗体（bispecific antibodies, BsAbs；识别两个不同抗原或表位）和多特异性抗体（multispecific antibodies, MsAbs；识别三个及以上抗原或表位）可在单分子中整合肿瘤靶向、免疫细胞招募和多通路调控，但可溶性BsAbs/MsAbs存在循环稳定性不足、实体瘤穿透和蓄积欠佳、抗体化学计量与空间组织控制有限以及全身免疫激活相关毒性（如细胞因子释放综合征，cytokine release syndrome, CRS），治疗窗受限。纳米技术提供可设计界面，可通过化学偶联、亲和标签组装、抗mPEG（methoxy poly(ethylene glycol)；甲氧基聚乙二醇）/mPEG锚定和Fc（fragment crystallizable region；可结晶片段）介导结合，实现多价展示、定向固定和组分配比控制。因此，研究人员系统综述纳米技术赋能BsAbs/MsAbs的构建策略、增效机制和转化问题。
该文为综述，未开展原始实验。其方法学核心是围绕四类构建体（I载体负载双特异性抗体分子、II多抗体共展示纳米平台、III载体靶向双特异性抗体、IV核酸编码双特异性抗体）进行文献归纳与比较分析，比较化学偶联、亲和标签介导组装、mPEG锚定和Fc介导定向固定等路线及载体材料，并从结合亲合力、药代动力学（pharmacokinetics, PK）、安全控制和联合治疗角度整合机制证据；临床转化部分引用已批准BsAbs资料及EDV（EnGeneIC Dream Vector）微细胞（28例）、MesomiR-1（26例）、复发性胶质母细胞瘤（14例）和BNT142（65例）等早期研究数据，未涉及原始样本队列。
研究结果如下。2.1 化学偶联策略：通过比较酰胺偶联与点击化学等研究，认为共价偶联可稳定整合抗体和载荷，但位点和取向异质性需控制。2.1.1 酰胺偶联：通过Emami等双受体PLGA（poly(lactic-co-glycolic acid)；聚乳酸-羟基乙酸共聚物）纳米粒、Xu等SS-Fc-HMRu等研究，显示双抗体或预组装BsAb可保留识别并实现刺激响应释放和深部球体穿透。2.1.2 点击化学：通过CD123/CD33脂质体、TRAFsome双Fab′脂质体及MINPs三抗体共展示等研究，表明硫醇-马来酰亚胺、无铜应变促进叠氮-炔环加成（strain-promoted azide-alkyne cycloaddition, SPAAC）等可调价组装并保留抗原结合，但需关注交换、铜残留和异质性。2.2 亲和标签介导组装：通过链霉亲和素-生物素和地高辛（digoxigenin, Dig）-抗Dig模块化研究，认为可即插即用组装、可交换识别模块并提高靶向蓄积，但免疫原性、内源竞争和非共价稳定性需评价。2.2.1 链霉亲和素-生物素介导组装：通过scFv-链霉亲和素融合蛋白预靶向研究，显示可提高肿瘤细胞摄取和瘤内蓄积。2.2.2 地高辛介导组装：通过Dig修饰脂质纳米颗粒（lipid nanoparticles, LNPs）与抗原×Dig BsAb研究，显示可降低siRNA半数抑制浓度并增强靶向沉默。2.3 mPEG介导锚定：通过双表位HER2纳米载体和三特异BiTEs-GSP-NCs研究，表明抗mPEG结构域可非共价锚定抗体并保留药物释放和细胞结合。2.4 Fc介导组装：通过PGLU-Fc-III-4C、抗Fc纳米支架、FcγRI膜包覆纳米粒及工程化外泌体研究，认为可定向固定完整IgG、快速组合多抗体并保留Fc介导识别。3.1 多价展示增强结合亲合力与靶向选择性：通过双抗体PLGA、PD-1/CTLA-4纳米复合物、biHSNPs及价数/间距研究，显示多价展示可提高亲合力、桥接和抑瘤效果，但价数过高可致提前内化和外周激活，存在优化窗口。3.2 纳米载体改善药代动力学与肿瘤蓄积：通过PEG化脂质体nanoBiTE/nanoMuTE及脑瘤粒径研究，表明PEG化延长半衰期、促进骨髓瘤灶蓄积和T细胞定位，粒径需匹配血管通透性。3.3 模块化设计提高可控性与安全性：通过CAP-TNE价数控制和可逆SiTE研究，显示可分离外周预结合与肿瘤局部激活，并可用小分子关闭开关调控活性和毒性。3.4 纳米载体实现多模式联合治疗：通过Tri-NAb、MnO
2/Co-DA@BiTE/HPT及STING（stimulator of interferon genes；干扰素基因刺激因子）激动剂共载研究，表明共展示检查点、共刺激、NK抑制解除和光热/免疫模块可协同增强先天与适应性免疫。4.1 已批准双特异性抗体的临床使用：通过已批准CD3×肿瘤抗原及双受体/双表位BsAbs的随机和关键试验，确认双靶识别和免疫重定向的临床价值，同时CRS、神经毒性和感染等风险需管理。4.2 纳米技术赋能双特异性抗体系统的临床转化：通过EDV微细胞、MesomiR-1、复发性胶质母细胞瘤和BNT142早期研究，发现前几类客观反应有限且毒性存在，BNT142的部分反应集中于卵巢癌，提示载体型和多抗体共展示平台尚缺人体数据。
讨论部分指出，临床转化的主要障碍是制造与质量评价：随机偶联导致抗体取向、载量和化学计量不均，质量控制需同时评价组成和功能；规模化数据多来自无表面抗体的LNPs，带表面抗体平台的放大证据不足；免疫原性应按组分评估，脱落检测需说明所测实体，因为载体、标签、抗体或载荷的释放具有不同后果。粒径与价数的联合优化尚缺同一平台数据，非共价组装在人血浆中的最低可接受脱落半衰期也未定义；与可溶性BsAbs或游离抗体组合的比较结果因体系而异，且载体材料内在属性尚未在同一方案下系统测量。
研究结论/展望（译自原文）：未来研究应超越治疗模块的简单共定位，转向结构、PK和免疫功能的整合设计；应推进位点特异性、生物正交和酶介导偶联，并将抗体价数、间距、载量比、结合位点可及性和体内脱落动力学作为关键质量属性，以降低产品异质性。可利用肿瘤酸性、蛋白酶或氧化还原条件构建刺激响应或条件激活系统，使免疫细胞桥接、检查点阻断或共刺激主要发生于肿瘤内；通过mRNA-LNP体内表达可减少对复杂重组蛋白持续生产的依赖，但组织选择性、表达持续时间和重复给药安全性仍需优化。转化研究应结合临床代表性肿瘤模型、空间组学和定量PK/PD分析，明确抗原表达、纳米颗粒蓄积和免疫应答的关系，并指导基于生物标志物的患者选择。
