基于重组蛋白rATP-β与rGroEL的ELISA在猫汉赛巴尔通体感染血清学诊断中的应用评价

《Animals》：Pharmacokinetics of Sulfasalazine and the Temporal Profiles of Sulfapyridine and Its Metabolites Following Nasogastric Administration in Six Healthy Adult Horses

巴尔通体属（Bartonella spp.）为小型、营养要求苛刻的革兰阴性胞内细菌，可感染包括猫、犬与人在内的多种哺乳动物。以培养、分子及血清学方法诊断犬、猫及人巴尔通体病仍具挑战性。猫巴尔通体病的准确血清学诊断具有临床、流行病学及人兽共患意义。汉赛巴尔通体（Bh）ATP合酶β亚基（ATP-β）与伴侣蛋白GroEL在猫巴尔通体病诊断中的效用此前尚未见报道。本研究目的是利用以下血清样本评估Bh重组蛋白ATP-β与GroEL的诊断效用：第I组为4只实验接种Bh或生理盐水的猫（n=24）；第II组为34只自然感染Bh的猫（n=34）；第III组为33只巴尔通体属qPCR阴性且IFA阴性的对照猫（n=33）；第IV组为16只血红支原体（Mycoplasma haemofelis）qPCR阳性的猫（n=16）。基于Bh rATP-β、rGroEL及rATP-β联合rGroEL ELISA结果，rGroEL获得最高受试者工作特征曲线下面积（AUC）0.84（95%CI 0.74–0.94），其次为rATP-β联合rGroEL，AUC为0.77（95%CI 0.65–0.89）。在OD临界值0.1时，rGroEL的敏感度与特异度分别为50%（95%CI 34–66%）与91%（95%CI 76–97%）；而rATP-β联合rGroEL ELISA（rATP-β与rGroEL联合）在OD临界值0.17时敏感度与特异度分别为71%（95%CI 54–83%）与85%（95%CI 69–93%）。Bh IFA与基于rGroEL的ELISA总体符合率为70%（95%CI 58–80%），Bh IFA与基于rATP-β联合rGroEL的ELISA总体符合率为78%（95%CI 66–86%）。基于rATP-β的ELISA的AUC较差（0.61（95%CI 0.47–0.75）），提示其对猫Bh感染血清学诊断的临床效用有限。上述发现提示，rGroEL及rATP-β联合rGroEL可作为猫巴尔通体感染血清学诊断的可靠ELISA抗原。本研究局限性包括样本量小、ELISA敏感度中等及其与Bh IFA和PCR结果不完全一致。今后对rATP-β与rGroEL抗原决定簇的定位及抗原区的生物信息学筛选，可能有助于开发较劳动密集的参考IFA更快、更实用且更经济的猫巴尔通体病血清学诊断替代方法。

巴尔通体属（Bartonella spp.）为小型、营养要求苛刻的革兰阴性胞内细菌，可感染人及包括猫、犬在内的哺乳动物。猫是三种人兽共患巴尔通体种——汉赛巴尔通体（Bartonella henselae，Bh）、B. clarridgeiae与B. koehlerae——的主要储存宿主。全球血清流行病学研究报道猫Bh血清阳性率为4%至80%，以温暖、潮湿及受跳蚤（Ctenocephalides felis felis）侵扰地区最高。猫感染后可维持长期复发性菌血症并持续数年，导致感染高发，尤其在受跳蚤侵扰的野猫中。Bh是感染猫、犬及人（猫抓病）最常见的巴尔通体种。人巴尔通体病与心脏病变（心内膜炎、心肌炎）、一系列神经表现（头痛、记忆丧失、神经视网膜炎、精神病、癫痫等）及风湿病症状（关节痛、肌肉痛、骨髓炎）相关。Bh经C. felis felis跳蚤在猫间传播，或经抓挠时接种感染跳蚤粪便而传播。猫向人传播发生于巴尔通体种经抓伤、咬伤或唾液通过破损皮肤传递之时。由于对猫、犬及跳蚤媒介的职业暴露增加，兽医保健人员为人巴尔通体病高危人群。作为在免疫受损与免疫正常人群中引起慢性、隐匿性感染的新发病原，人兽共患巴尔通体种由猫向人的传播构成严重公共卫生问题。及时诊断感染巴尔通体的猫对于管理、控制及预防偶然人类宿主感染至关重要。犬、猫及人巴尔通体病的诊断依靠培养、分子及血清学方法，各有优缺点。从血液及其他临床标本培养巴尔通体属耗时，确定性诊断可长达45天。血清学方法如间接荧光抗体试验（IFA）与酶联免疫吸附试验（ELISA）已广泛用于犬、猫及人巴尔通体病诊断。IFA为最常用血清学方法，其敏感度因实验室而异，取决于种、株、抗原制备及临界值。既往研究提示IFA显著低估猫巴尔通体属感染的真实血清阳性率。一项调查意大利流浪猫Bh流行率的研究建议联合使用血培养与血清学，因仅12.2%（65/531）的猫既菌血症又血清阳性；在531只猫中，115只菌血症猫中50只血清阴性，而416只非菌血症猫中139只血清阳性，提示菌血症与血清学结果不一致。另一综述猫、犬及人巴尔通体感染培养、ELISA、IFA及PCR诊断的研究强调这些方法敏感度低、缺乏检测标准化及血清学与分子方法不一致。据研究人员所知，Bh蛋白ELISA尚未针对其用于血清流行病学研究或猫巴尔通体病诊断进行严格研究。因此，开发并验证可靠的ELISA对评估猫暴露、疾病诊断及潜在人兽共患病风险具有One Health意义。与猫Bh感染相关的免疫反应蛋白信息有限。既往利用大规模Bh蛋白微阵列分析的研究鉴定出感染猫识别的若干免疫优势抗原，包括ATP-β、GroEL、VceA及LemA。其他研究发现rP26在猫中具免疫原性，基于Bh rP26的ELISA可能为诊断猫Bh感染暴露的有用工具。研究人员所在实验室既往利用自然及实验感染巴尔通体属的犬血清，鉴定Bh ATP-β与GroEL为相关免疫优势抗原。基于ATP-β或GroEL的ELISA在猫巴尔通体病中的效用此前尚未见报道。作为Bh的主要储存宿主，猫可能产生不同于犬（被视为偶然宿主）的免疫应答。犬暴露于巴尔通体属的免疫应答与抗原识别谱可能不反映猫的情况。因此，本研究对rATP-β与rGroEL作为猫诊断抗原进行初步评估。本研究目的是评估Bh重组蛋白rATP-β与rGroEL对猫巴尔通体病诊断的诊断效用。

研究人员利用北卡罗来纳州立大学兽医学院媒介传播疾病诊断实验室（NCSU-CVM-VBDDL）先前检测的107份存档猫血清进行ELISA检测，血清来自四组猫：第I组为2只实验接种Bh的猫与2只生理盐水接种对照（n=24份血清，每猫6份，接种前1份及接种后每周1份共5份）；第II组为34只Bh qPCR阳性且IFA阳性的自然感染猫；第III组为33只巴尔通体属qPCR阴性且IFA阴性猫；第IV组为16只血红支原体qPCR阳性猫。血清于2011至2016年提交NCSU-CVM-VBDDL诊断检测，初处理后等分保存于?80 °C。IFA血清阳性定义为滴度≥1:64，阴性为≤16、16或32。第I组4只成年雌猫来自既往实验感染研究，研究经High Quality Research（HQR，Fort Collins，CO，USA）批准（方案号#170.059）。四只猫在皮内接种Bh CSU-1株或生理盐水前Bh菌血症PCR阴性，接种前经BAPGM富集后qPCR/ddPCR、直接血qPCR/ddPCR或血琼脂平板分离均未检出巴尔通体。一只Bh接种猫与两只对照猫接种前Bh IFA阳性（滴度≥1:64）。基于富集血培养、16S-23S内转录间隔区（ITS）qPCR与ddPCR，两只Bh CSU接种猫在实验攻击后确认Bh菌血症。第II组34只猫均为Bh IFA血清阳性，且基于编码巴尔通体转移信使RNA（tmRNA）的ssrA基因扩增为Bh菌血症。第III组33份诊断血清均对三种巴尔通体种（Bh、B. vinsonii subsp. berkhoffii与B. koehlerae）IFA阴性（滴度≤1:32筛查稀释度），推测未暴露于巴尔通体属；这些猫用商品化ELISA（SNAP 4Dx+；Idexx Laboratories，Westbrook，MI）对无形体、伯氏疏螺旋体及埃立克体抗原血清阴性，且对巴尔通体、梨形体、埃立克体、无形体、立克次体及嗜血支原体qPCR阴性。第IV组16只猫均巴尔通体属qPCR阴性且IFA阴性、血红支原体qPCR阳性，对无形体、梨形体、伯氏疏螺旋体及埃立克体抗原血清阴性，且对巴尔通体、梨形体、埃立克体、无形体及立克次体qPCR阴性。rATP-β（WP_011181298.1；109至265 aa）与GroEL（WP_011181151.1；193至370 aa）选定区域用Champion^TM pET200 Directional TOPO^?表达试剂盒与大肠杆菌BL21（DE3）Star^TM系统克隆表达，区域基于生物信息学分析包括B细胞表位定位、表面可及性及抗原性选定。重组蛋白经HisPur^TM钴旋转柱纯化并透析入磷酸盐缓冲液（PBS）。pET200D/TOPO表达系统中编码Bh atp-β与groEL的框内DNA序列经Sanger测序确认，纯化蛋白经考马斯染色SDS-PAGE与WB确认。ELISA中每种重组蛋白以碳酸盐缓冲液（pH 9.6）包被（500 ng/孔）；联合ELISA将两蛋白混合至终浓度各5 μg/mL（共10 μg/mL），每孔包被100 μL（rATP-β与rGroEL各500 ng）。4 °C过夜包被后洗涤，用含3%脱脂奶粉的PBS室温封闭2 h，洗涤后加1:100稀释猫血清室温孵育1 h，洗涤后加HRP标记山羊抗猫IgG二抗（1:10,000稀释）室温孵育1 h，洗涤后加TMB底物室温15 min，2M H₂SO₄终止，450 nm测吸光度。以自然感染猫（IFA滴度1:1024）与qPCR阴性IFA阴性猫血清分别为阳性和阴性对照，仅含包被缓冲液孔为空白扣除背景，每样本三复孔均值计算。用Youden指数（J）确定最佳ELISA临界值。用受试者工作特征（ROC）分析计算敏感度、特异度及临界值（95%CI）；以Bh IFA为比较诊断试验计算ELISA敏感度与特异度；计算ELISA与IFA的阳性、阴性及总体符合率及Cohen's Kappa统计量；用GraphPad Prism 11.0.1生成散点图与ROC曲线；用Mann–Whitney U检验分析自然感染组与对照组ELISA IgG反应性差异，p<0.05为统计学显著。

结果如下。3.1 两只实验接种Bh猫与两只未接种对照猫中rATP-β、rGroEL及rATP-β联合rGroEL的反应性：基于IFA结果，一只Bh接种猫（#3320）与两只对照猫（#3363、#3508）可能既往暴露于巴尔通体种。实验Bh感染后，血清对所有蛋白（rATP-β、rGroEL及rATP-β联合rGroEL）的ELISA反应性增加两倍以上。猫#3320对rGroEL反应性在接种后天数（PID）21增加6倍、PID28增加14倍、PID37增加12倍；对rATP-β联合rGroEL反应性在PID28与PID37增加三倍以上，与IFA血清转换滴度一致（Bh IFA滴度从PID14的1:256升至PID21、PID28及PID37的1:1024）。另一Bh接种猫（#3711）血清对rGroEL及rATP-β联合rGroEL反应性至PID21增加四倍以上，rATP-β ELISA反应性在PID37增加七倍。对照猫（#3363、#3508）对所有蛋白ELISA血清反应性在任何接种后时间点均未超过两倍增加。上述结果表明实验接种猫中抗Bh rATP-β与rGroEL抗体在Bh接种后较对照猫增加。3.2 第II组（Bh qPCR阳性且IFA阳性自然感染猫）与第III组（巴尔通体属qPCR阴性且IFA阴性对照猫）中的反应性：基于阴性对照组ELISA血清反应性与ROC曲线分析计算最佳ELISA光密度（OD）临界值，并用Youden指数优化各重组蛋白敏感度与特异度。rATP-β与rGroEL ELISA最佳OD临界值为0.1，联合rATP-β联合rGroEL ELISA为0.17。基于第II组与第III组猫血清ELISA反应性，rATP-β ELISA在OD临界值0.1时敏感度44%（95%CI 29–61%）、特异度67%（95%CI 50–80%）；rGroEL ELISA在OD临界值0.1时敏感度50%（95%CI 34–66%）、特异度91%（95%CI 76–97%）。在较低OD临界值0.04（对应最大Youden指数）时，rATP-β ELISA敏感度85%（95%CI 70–94%）、特异度42%（95%CI 27–59%）；rGroEL ELISA在OD临界值0.03（最大Youden指数）时敏感度82%（95%CI 66–92%）、特异度88%（95%CI 73–95%）。较低OD临界值产生更高敏感度但更多假阳性导致特异度更低，因这些低OD值临床不可接受，本研究选择较高OD临界值0.1作为最终临界值以提高特异度。第II组34只自然感染Bh猫中，在OD临界值0.1时分别有19只与17只被rATP-β与rGroEL ELISA检测为阴性；第III组33只对照猫中分别有11只与3只被rATP-β与rGroEL ELISA检测为阳性。rATP-β ELISA的AUC为0.61（95%CI 0.47–0.75）；rGroEL ELISA的AUC为0.84（95%CI 0.74–0.94），提示第II组阳性与第III组阴性血清间良好区分。联合rATP-β与rGroEL后，在最高Youden指数对应的临界值0.17时，rATP-β联合rGroEL敏感度71%（95%CI 54–83%）、特异度85%（95%CI 69–93%）；24只（70.6%）第II组猫经该联合蛋白ELISA血清阳性，而第III组对照猫仅5只阳性。rATP-β联合rGroEL ELISA的AUC为0.77（95%CI 0.65–0.89），提示可接受的正负组区分能力。总体上，第II组感染猫对rGroEL与rATP-β联合rGroEL的反应性显著高于第III组对照猫（Mann–Whitney U检验，p<0.001）；但感染猫与阴性对照猫血清对rATP-β反应性无显著差异（p=0.1）。rATP-β、rGroEL及rATP-β联合rGroEL ELISA的敏感度与特异度随OD临界值变化，提示猫Bh暴露/感染诊断中敏感度与特异度间的权衡。3.3 IFA与ELISA间符合率与相关性：基于Youden指数与敏感度特异度权衡，选择rATP-β与rGroEL OD临界值0.1、联合rATP-β联合rGroEL 0.17为最佳，用于计算各ELISA敏感度、特异度及与IFA符合率。Bh IFA与基于rGroEL的ELISA呈中度符合（总体符合率70%；Cohen's kappa=0.41），Bh IFA与基于rATP-β联合rGroEL的ELISA呈中度符合（总体符合率78%，Cohen's kappa=0.55）；Bh IFA与rATP-β符合率轻微（总体符合率55%，Cohen's kappa=0.11）。Bh IFA与rGroEL ELISA呈中度相关（Spearman r=0.55，p<0.0001），Bh IFA与rATP-β联合rGroEL ELISA结果呈中度相关（Spearman r=0.49，p<0.0001）；Bh IFA与rATP-β ELISA结果无统计学相关（Spearman r=0.23，p=0.06）。因第II组猫Bh IFA与PCR均阳性、第III组猫巴尔通体属IFA与PCR均阴性，ELISA与PCR状态的符合率与上述ELISA与IFA符合率相同。上述发现提示Bh IFA/PCR与ELISA间符合不完全，且随所评估重组抗原而异。3.4 嗜血支原体qPCR阳性猫的ELISA血清反应性：为进一步评估试验特异度，研究人员用16只嗜血支原体qPCR阳性猫血清三复孔检测rATP-β、rGroEL及rATP-β联合rGroEL反应性。16只猫均巴尔通体属qPCR与IFA阴性，且方法部分所述NCSU-VBDDL猫综合检测阴性。在最佳OD临界值0.1时，6只猫对rATP-β血清阳性、3只对rGroEL血清阳性；3只rGroEL-ELISA阳性猫中仅1只同时对rATP-β血清阳性。用rATP-β联合rGroEL ELISA在最佳OD临界值0.17时，2只猫血清阳性，且这两只均rATP-β ELISA阳性但rGroEL ELISA阴性。

讨论部分总结如下：本研究报道两种Bh重组蛋白rATP-β与rGroEL用于猫巴尔通体感染血清学诊断的敏感度与特异度。据研究人员所知，Bh rATP-β与rGroEL此前未作为猫巴尔通体病潜在诊断候选被广泛研究。基于ELISA结果，rGroEL获得最高AUC（0.84），其次为rATP-β联合rGroEL（AUC 0.77），分别提示良好与可接受的阳阴组区分能力；但rGroEL ELISA在最佳OD临界值0.1时敏感度仅50%，提示其检测感染猫抗Bh抗体能力有限；rATP-β ELISA的AUC较差（0.61），提示其临床效用有限。在最佳OD临界值0.1时，rATP-β与rGroEL ELISA敏感度相似（44%与50%），但rATP-β特异度显著较低（67%对91%）。GroEL属Hsp60分子伴侣家族，ATP-β为利用质子梯度合成ATP的酶催化亚基，两者在真细菌中高度保守并可能与其他真细菌共享抗原表位；因此研究人员选择在Bh株间保守而其他细菌间更多变的ATP-β（aa 109–265）与GroEL（aa 193–370）区域。GroEL为Bh应激与感染时诱导的热休克蛋白，为公认免疫优势抗原；ATP-β为胞质膜相关蛋白，可能较少可及宿主免疫系统而诱导较弱抗体应答，且所选rATP-β区域可能在真细菌中高度保守导致交叉反应。用NCBI蛋白BLAST比对显示，rATP-β区域与血红支原体ATP合酶β亚基（GenBank: AEW44994.1）氨基酸一致性54%，而rGroEL区域与血红支原体无显著相似性（与另一支原体种GroEL序列一致性58%）。上述因素可能解释rATP-β ELISA诊断性能较低。因ELISA敏感度低，相当比例Bh感染猫可能检测阴性；假阴性可能延误诊断、治疗与疾病控制，导致猫因心内膜炎、心肌炎、葡萄膜炎及淋巴结病等并发症预后更差，并可能增加Bh猫间及猫向人传播风险，助长人兽共患传播。Bh为具One Health意义的人兽共患病病原，感染可引起人从轻微到危及生命的表现，包括杆菌性血管瘤病、杆菌性紫癜、心内膜炎、肉芽肿性肝炎、心肌炎及神经视网膜炎。准确及时诊断感染猫并结合治疗与跳蚤控制，有助于预防巴尔通体属猫间及猫向主人、兽医人员和其他猫接触者传播。rATP-β（aa 109–265）与rGroEL（aa 193–370）的诊断效用尚未在人巴尔通体病中评估；鉴于IFA诊断人巴尔通体感染的局限，这些抗原可能亦具人诊断应用潜力，但抗体应答可能随疾病表现、免疫状态及感染巴尔通体种而异，且猫、犬与人抗体可能识别同一蛋白的不同表位，故敏感度与特异度可能在宿主种间不同；因在猫中特异度高，rGroEL可能作为人其他血清学试验的辅助工具，需未来研究评估两抗原对人巴尔通体病的诊断性能。与研究人员既往犬巴尔通体病研究一致，rGroEL与rATP-β联合rGroEL总体结果优于rATP-β ELISA，提示rGroEL与rATP-β联合rGroEL ELISA在区分阳阴组方面表现良好；与既往报道ATP-β对犬巴尔通体病有前景的诊断效用不同，ATP-β未显示对猫巴尔通体病的最佳诊断价值，但进一步筛选与选择源自ATP-β与GroEL的其他抗原肽可提高各自诊断准确性，生物信息学分析、肽筛选与合成及后续评估可能增强其诊断潜力。既往用实验攻击Bh猫血清与601只收容所猫血清表征猫抗体应答的研究鉴定出至少24种Bh免疫优势蛋白，包括实验感染猫强识别的57 kDa蛋白；601只收容所猫中51与57 kDa蛋白为最常识别的Bh免疫优势蛋白；鉴于收容所与流浪猫报道的30%至>40% Bh菌血症流行率，这些由实验与自然感染收容所猫识别的51与57 kDa蛋白最可能为Bh免疫优势蛋白；基于可比分子量，这些蛋白可能对应ATP-β与GroEL，类似于研究人员既往犬血清研究中有犬巴尔通体病诊断效用的蛋白。既往利用人血清研究Bh蛋白质组亦鉴定ATP-β与GroEL为免疫优势蛋白；此外一项利用Bh全基因组蛋白阵列分析自然感染与未感染猫抗体应答的研究鉴定ATP-β（BH15320）与GroEL（BH13530）为差异反应抗原，其中GroEL反应性最强，与本研究发现一致，rGroEL似为猫巴尔通体病诊断最敏感特异的血清学靶标。既往比较Bh接种DH82细胞（犬单核-巨噬细胞系）48 h后转录组的研究显示groEL RNA转录本显著上调（2.5倍变化，p<0.05），提示groEL在初始感染时可能快速上调；该转录组数据与本研究中两只Bh实验攻击猫（#3320与#3711）血清反应性增加两倍以上一致。Bh实验接种猫接种后血清对Bh rATP-β与rGroEL蛋白ELISA反应性较接种前增加，表明rATP-β与rGroEL蛋白具免疫相关表位，能检测宿主免疫系统引发的抗Bh抗体，进一步支持其作为猫巴尔通体病诊断抗原的潜力；然而需用更多实验感染猫、确认阴性动物及其他感染猫的特征明确血清进行全面诊断评估以确定试验特异度、交叉反应及总体诊断准确性。尽管IFA被视为猫、犬及人巴尔通体感染诊断的金标准，本研究Bh IFA与ELISA比较仅记录中度相关：Bh IFA与rGroEL ELISA（Spearman r=0.55，p<0.0001）及与rATP-β联合rGroEL ELISA（Spearman r=0.49，p<0.0001）。两试验总体符合率变异可能由多种因素造成，包括IFA与肽抗原的选择与制备、试验主观性及宿主体液免疫应答差异。IFA以Bh接种的DH82细胞为抗原，而ELISA用纯化rATP-β、rGroEL或二者，故全细胞IFA检测针对广泛Bh抗原的抗体，而ELISA仅检测抗ATP-β与抗GroEL应答，后者可能因菌株差异或感染不同阶段宿主免疫应答而表达可变；主要针对其他Bh抗原产生抗体的猫会IFA阳性而ELISA阴性，未产生强抗ATP-β或抗GroEL应答的猫亦导致试验间不一致。本研究局限包括缺乏用于评估ELISA敏感度与特异度的诊断血清的临床与病史数据；自然感染猫（第II组，n=34）与阴性对照猫（第III组=33）样本量相对较小；尽管第III组对照猫巴尔通体属qPCR与IFA阴性，阴性qPCR与IFA不能排除既往或当前巴尔通体感染；因所有第II组与第III组血清均来自提交NCSU-VBDDL怀疑媒介传播病原（包括巴尔通体属）暴露的患病猫，部分被归类为对照的猫可能既往感染巴尔通体属而被误分类为"阴性"对照；既往研究在用于研究的无特定病原（SPF）猫犬中检出巴尔通体属DNA或特异性抗体滴度支持此可能。为评估特异度，研究人员评估了巴尔通体属qPCR阴性且IFA阴性、有 documented 嗜血支原体感染（qPCR阳性）猫中rATP-β与rGroEL的交叉反应与特异度；血红支原体为全球分布最常见的嗜血病原之一，故选择血红支原体qPCR阳性猫血清进行特异度检测。6、3与2只支原体qPCR阳性猫分别对rATP-β、rGroEL及rATP-β联合rGroEL反应；16只支原体qPCR阳性猫中6只rATP-β ELISA阳性，进一步突出需额外表位定位与仔细选择ATP-β区域以提高猫巴尔通体病诊断性能；这些支原体PCR阳性猫亦可能既往暴露于巴尔通体属，因阴性巴尔通体属PCR与IFA不一定排除既往暴露；此外不能排除Bh ATP-β与GroEL与支原体阳性猫抗体的交叉反应，所选rATP-β（aa 109–265）与rGroEL（aa 193–370）区域与其他细菌（包括血红支原体）相应区域的氨基酸序列相似性可能导致交叉反应；需用更大队列支原体qPCR阳性猫进一步评估潜在交叉反应以就这些抗原诊断特异度得出确定结论。尽管研究人员用支原体qPCR阳性猫血清评估rATP-β与rGroEL交叉反应，但未评估或验证与暴露于其他病原（如埃立克体属、博德特菌属及无形体属）猫血清的交叉反应，需进一步研究评估这些重组蛋白与暴露于媒介传播病原猫血清的潜在交叉反应。结论部分译文：总之，rGroEL及rATP-β联合rGroEL可作为猫巴尔通体感染血清学诊断的可靠ELISA抗原。rGroEL为猫巴尔通体病辅助血清学诊断的有前景抗原。尽管基于rGroEL及rATP-β联合rGroEL的ELISA显示有前景的诊断性能，仍需进一步优化与验证以增强其临床诊断效用，从而实现更高准确性与可靠性。rGroEL ELISA的敏感度与特异度可通过rATP-β与rGroEL抗原区的表位定位与生物信息学筛选进一步提高；选定的rATP-β与rGroEL抗原区可再与源自Bh免疫优势蛋白的其他相关肽组合。这种免疫蛋白质组学策略最终可能为猫巴尔通体病血清学诊断提供较劳动密集的参考IFA更快、更实用且更经济的替代方法。