《Vaccine》：Immunogenicity and safety of two priming doses of an MF59-adjuvanted cell-based H5N8 influenza vaccine in healthy persons aged ≥18?years
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禽流感向人类的传播可能导致H5大流行。MF59佐剂细胞培养H5N8疫苗在成人中引发稳健免疫应答。观察到18–64岁队列血清转化率为76%，≥65岁队列≥71%。大多数征集性不良事件（AEs）为轻度或中度，3天内缓解。数据支持将MF59佐剂H5N8疫苗用作公共卫
禽流感向人类的传播可能导致H5大流行。MF59佐剂细胞培养H5N8疫苗在成人中引发稳健免疫应答。观察到18–64岁队列血清转化率为76%，≥65岁队列≥71%。大多数征集性不良事件（AEs）为轻度或中度，3天内缓解。数据支持将MF59佐剂H5N8疫苗用作公共卫生干预措施。引言：近年来，H5禽流感从野生动物和家畜向人类的人畜共患传播有所增加。高致病性禽流感（HPAI）毒株，尤其是H5N1，历史上死亡率高达50%。鉴于全球人群缺乏预先存在的免疫力，这些病毒及其基因重配体构成严重的 pandemic 威胁。接种疫苗仍是减轻流感大流行相关发病率和死亡率的最有效策略。在宣布大流行后，制造和分发匹配的株特异性疫苗可能需要数月。储备大流行前疫苗可提供关键过渡，允许在疫情早期阶段向前线医护人员和高风险人群快速部署。目前大多数 licensed 季节性和大流行性流感疫苗使用鸡胚生产。该过程每年需要数十亿枚鸡蛋以满足全球需求，估计每剂需要1至2枚鸡蛋。在禽流感大流行期间，该供应链可能存在后勤挑战，威胁抗原生产的延迟。此外，在病毒繁殖过程中，血凝素（HA）蛋白常出现egg-adaptive突变，可能导致抗原不匹配并损害季节性流感疫苗接种的有效性。细胞培养生产避免了这些限制。当与角鲨烯基水包油乳剂MF59配合使用时，这些平台可实现抗原节约效应并拓宽交叉反应免疫应答——两者对于有效的大流行疫苗均至关重要。尽管MF59佐剂细胞培养H5N1疫苗（AUDENZ?）已被广泛研究并在国际上获得许可，但针对clade 2.3.4.4b H5N8病毒的MF59佐剂细胞培养疫苗的临床数据仍然有限。在本研究中，研究人员评估了MF59佐剂细胞培养H5N8疫苗（aH5N8c）在≥18岁成人中引发的安全性、反应原性和同源免疫应答。由于频繁接触野生和家禽增加人畜共患溢出风险，研究人员专门入组了一部分家禽工人（18–64岁）以确定既往暴露是否改变其对aH5N8c疫苗的免疫应答。方法：研究设计。这项2期、随机、观察者盲法、多中心免疫原性和安全性研究在美国9个中心进行，涉及≥18岁成人，在年龄队列（18–64岁和≥65岁）之间平均分配。试验入组发生于2023年6月至8月。方案还要求18–64岁队列包括一部分频繁接触家禽的人员（即"家禽工人"，定义为家禽养殖场和加工厂工人或定期接触家禽养殖场或加工厂的人员以及为个人使用/娱乐而饲养家禽的个体）。参与者按2:1:1比例随机分配接受两剂同源MF59佐剂细胞培养单价灭活亚单位H5N8（A/Astrakhan/3212/2020 IDCDC-RG71A；clade 2.3.4.4b）疫苗（aH5N8c）间隔3周接种，或两剂异源疫苗接种（第1天接种aH5N8c疫苗，第22天接种异源aH5N6c [A/Guangdong/18SF020/2018，clade 2.3.4.4h]疫苗，或第1天接种aH5N6c疫苗，第22天接种异源aH5N8c疫苗）。每剂疫苗配制为含7.5 μg H5 HA + 0.25 mL MF59。所有参与者计划在第202天接受aH5N8c加强疫苗接种，并在加强接种后随访6个月（第382天）。本文重点关注同源aH5N8c初免系列组第1天至第43天的结果；异源系列和加强疫苗接种的结果将另行报告。同源初免数据单独报告是因为它们解决了一个独特问题，即更新clade 2.3.4.4b株的免疫原性和安全性，并鉴于H5病毒人间病例和人畜共患传播持续增加而优先发表。异源初免和加强结果需要额外的跨clade抗体检测，正在进行中，完成后将报告。本研究按照国际人用药品注册技术协调会（ICH）良好临床实践（GCP）协调三方指南、适用当地法规以及赫尔辛基宣言规定的伦理原则设计、实施和报告。研究按照方案、GCP和适用监管要求进行。方案和知情同意书获得每个研究站点正式组建的机构审查委员会和/或伦理委员会批准，所有参与者提供书面知情同意。参与者：研究纳入≥18岁成人。育龄女性要求在首次疫苗接种前至少30天和末次疫苗接种后2个月内使用有效避孕方法；妊娠或哺乳期女性不符合条件。其他关键排除标准为进行性或未控制的临床状况、免疫系统功能异常或既往接种过H5流感疫苗。完整的纳入和排除标准列表见补充附录。随机化和盲法：入组时，符合条件的参与者在交互式应答技术系统中分配受试者识别号，然后按年龄（18–64岁和≥65岁）分层；较年轻年龄队列进一步按家禽工人状态（是/否）分层。参与者然后按2:1:1比例随机分配接受2剂同源aH5N8c疫苗间隔3周接种（A组）或2剂异源疫苗接种如上所述（异源组数据本文未报告）。疫苗由独立于数据收集和分析活动的研究人员在观察者盲法条件下接种。从纳入第22天和第43天符合方案集（PPS）的受试者中随机选择一部分参与者（研究人群的50%，按年龄组平衡）通过微量中和（MN）试验进行免疫原性检测。程序：疫苗肌肉内接种（优选三角肌）。每名受试者在第1天和第22天接受两剂初免疫苗接种。参与者在每次疫苗接种后在研究站点接受至少30分钟的医学监督，并在研究期间监测安全性（本文报告截至第43天的免疫原性和安全性数据）。在第1天和第22天疫苗接种前以及第43天从每名参与者采集15 mL血样用于免疫原性检测。与第202天加强剂量相关的额外样本采集（加强剂量数据本文未报告）。结局：主要结局是通过血凝抑制（HI）试验使用与研究疫苗株同源的细胞培养靶病毒（H5N8 A/Astrakhan/3212/2020 IDCDC-RG71A）检测所有参与者针对H5N8的抗体应答。主要免疫原性终点包括第1、22和43天的HI几何平均滴度（GMTs）；第22和43天HI滴度相对于基线（第1天）滴度的几何平均倍数增加（GMFIs）；第1、22和43天HI滴度≥1:40的参与者百分比；以及第22和43天实现HI血清转化（基线滴度≥1:10的参与者疫苗接种后HI滴度≥4倍增加，或基线滴度<1:10的受试者疫苗接种后滴度≥1:40）的参与者百分比。本文未报告的其他主要结局涉及对异源aH5N6c疫苗和加强剂量的应答。本文报告的次要免疫原性结局包括通过MN试验测量的初免疫苗接种在基线（第1天）、第22天和第43天的抗体应答。次要终点包括第1、22和43天一部分参与者针对H5N8的MN GMT、GMFI、血清转化率和MN滴度≥1:40。本文未报告的另一项次要结局是6个月和1年时HI和MN抗体应答的持续性。探索性免疫原性分析检查了按家禽工人状态和流感疫苗接种史定义的亚组中的HI抗体应答。次要安全性结局包括整个研究期间的征集性和非征集性不良事件（AEs）。征集性局部和全身AEs通过电子日记（eDiary）在每次疫苗接种后7天内收集。征集性局部AEs包括注射部位硬结、红斑和疼痛，而征集性全身AEs包括恶心、肌痛、关节痛、头痛、疲劳、寒战和发热（体温≥38.0 °C [≥100.4 °F]）。还记录了用于预防或治疗的镇痛或退热药物的使用。非征集性AEs包括严重不良事件（SAEs）、导致研究退出的AEs、特别关注的不良事件（AESIs）、就医不良事件（MAAEs）、相关合并用药以及本文报告的所有非研究疫苗接种，从第1天至第43天记录。本文未报告的其他次要安全性结局涉及第43天至研究结束（第382天，加强剂量后6个月）的安全性数据。统计分析：未计划正式假设检验。相反，样本量基于评估安全性、反应原性和抗体应答所认为适当的数量选择。假设由于方案偏差或提前终止等原因，分析中参与者排除率高达10%，本文报告的同源疫苗组预期包括约216名受试者（每个年龄队列108名，18–64岁和≥65岁）。免疫原性全分析集（FAS）包括所有随机化并接受至少一剂研究疫苗接种并提供至少一个评估时间点HI免疫原性数据的受试者。主要和次要HI免疫原性分析在每个采样日的PPS中进行。PPS包括免疫原性FAS中所有在计划时间点正确接受随机分配疫苗、无导致揭盲或分析前定义的排除的方案偏差、未因揭盲或分析前定义的其他原因被排除、第1天（首次疫苗接种前）有免疫原性结果并在计划访视周围方案定义窗口内相关时间点提供至少一个可评估血清样本、且在研究期间未揭盲（除非疑似非预期严重不良反应[SUSAR]）的受试者。个体HI（或MN）滴度低于定量下限（LLOQ）设为该限值的一半（即LLOQ/2）。高于定量上限（ULOQ）的滴度设为试验的ULOQ。如前所述，本文呈现同源aH5N8c初免系列组第1天至第43天的结果，这是整体研究进行的分析选择。因此，下述统计方法基于并与应用于完整研究数据集的方法一致，将另行报告。疫苗接种后时间点的GMTs使用应用于log10转化抗体滴度的通用线性模型（GLM）估计。模型包括疫苗组作为因子，年龄亚组、家禽工人状态和log10转化基线（第1天）抗体滴度作为协变量。第1天GMTs使用相同模型估计，排除log10转化基线（第1天）抗体滴度协变量。调整GMTs和相应95%置信区间（CIs）然后通过反转化（以10为底）拟合模型的最小二乘均值和置信限得出。按年龄亚组分层的分析使用相同建模方法，从模型中排除年龄亚组项。抗体滴度GMFIs使用类似模型估计。包括疫苗组作为因子，年龄亚组和家禽工人状态作为协变量。结局变量是log10转化抗体滴度倍数增加，定义为疫苗接种后log10抗体滴度减去基线（第1天）log10抗体滴度。调整GMFIs及其相应95% CIs通过反转化（以10为底）拟合模型的最小二乘均值和相关置信限得出。GLM模型应用于每次访视的每个指标，即第22天GMT和GMFI以及第43天GMT和GMFI的单独模型。二分类终点（实现血清转化和抗体滴度≥1:40的受试者百分比）按治疗组和年龄队列总结。结果报告双侧95% CIs，使用Clopper–Pearson方法计算。每次访视的每个终点单独分析。缺失免疫原性值视为完全随机缺失（MCAR），因此无信息性。因此，免疫原性分析仅包括完整病例分析，不引入任何偏倚。安全性数据按频率和百分比描述性报告，无正式统计比较。所有统计分析使用SAS 9.4版进行。本研究注册于ClinicalTrials.gov，NCT05874713。结果：在入组的479名成人中，239名随机接受两剂aH5N8c；230名参与者完成第43天访视，其中215名完成研究。研究人群其余部分随机分配至异源初免系列，接受一剂aH5N8c和一剂aH5N6c间隔3周以任一顺序接种。异源治疗组参与者的应答以及第43天以后的免疫原性和安全性数据将另行报告。同源aH5N8c初免组参与者的平均年龄为55.1 ± 18.5岁。大多数参与者为白人和非西班牙裔，略多于一半为女性。总体而言，239名参与者中136名（56.9%）在过去一年接种过流感疫苗；≥65岁者既往疫苗接种率（84/118 [71.2%]）高于18–64岁者（52/121 [43.0%]）。18–64岁亚组包括60名归类为家禽工人的个体。绝大多数参与者基线H5N8 HI滴度<1:10，尽管≥65岁参与者中19/118（16.1%）HI滴度≥1:10，而较年轻成人中仅5/121（4.1%）。图2显示第1、22和43天的HI数据。第22天，单剂aH5N8c疫苗接种使18–64岁亚组GMT增至19.6（95% CI，16.0–24.1），≥65岁亚组增至35.5（95% CI，26.6–47.5）。第43天，两剂aH5N8c后，18–64岁和≥65岁亚组HI GMTs分别为71.7（95% CI，56.7–90.5）和64.0（95% CI，47.1–87.1），相当于第1天GMFI分别为13.7（95% CI，10.9–17.4）和10.2（95% CI，7.4–14.0）。第43天，18–64岁和≥65岁参与者HI血清转化分别为75.8%（95% CI，66.1–83.8%）和71.0%（95% CI，61.1–79.6%），HI滴度≥1:40分别为75.8%（95% CI，66.1–83.8%）和73.0%（95% CI，63.2–81.4%）。MN试验测量的抗体应答模式与HI试验评估的应答相似，尽管MN应答通常更高。第43天，18–64岁参与者MN GMT滴度为157.6（95% CI，113.7–218.4），≥65岁者为141.3（95% CI，94.0–212.2），对应GMFIs分别为19.2（95% CI，13.8–26.7）和11.1（95% CI，7.4–16.6）。第43天血清转化率在18–64岁和≥65岁年龄组分别为80.6%（95% CI，68.6–89.6%）和70.0%（95% CI，56.8–81.2%），而MN滴度≥1:40的比率分别为83.9%（95% CI，72.3–92.0%）和86.7%（95% CI，75.4–94.1%）。家禽工人和非家禽工人之间H5N8基线HI滴度通常较低且相似，抗体应答按家禽工人状态无显著差异。过去一年接种季节性流感疫苗的参与者与未接种者之间的免疫应答也相似。大多数征集性AEs为轻度或中度，发生在疫苗接种后不久，并在3天内缓解。第二剂初免疫苗接种后征集性AEs发生率通常低于第一剂后。≥65岁参与者报告的局部和全身征集性AEs均少于18–64岁者。在两个年龄组中，最常见的征集性局部AE为注射部位疼痛，最常见的全身AE为疲劳。截至第43天，总体人群中239名中的40名（16.7%），包括18–64岁参与者21/121（17.4%）和≥65岁者19/118（16.1%），报告了非征集性AE。仅2名参与者（均来自≥65岁年龄组）在此期间报告SAEs，被认为与研究疫苗无关。18–64岁参与者中11/121（9.1%）和≥65岁参与者中17/118（14.4%）报告MAAEs；无相关SAEs、AESIs或死亡报告。18–64岁年龄组一名参与者因第1天轻度恶心退出，被认为可能与研究疫苗相关。讨论：在本研究中，间隔三周接种两剂aH5N8c引发通过HI和MN试验测量的稳健抗体应答。第1天至第43天之间，18–64岁和≥65岁年龄队列HI滴度分别增加13.7倍和10.2倍，相应血清转化率分别为75.8%和71.0%。较年轻和较年长队列之间免疫应答相似，也不受家禽工人状态或季节性流感疫苗接种史影响。在两个年龄组中，疫苗接种后MN滴度通常超过HI滴度，血清转化和达到滴度≥1:40的参与者比例的点估计相当或更高。aH5N8c的安全性与 licensed MF59佐剂H5N1流感疫苗一致。征集性局部和全身AEs主要为轻度或中度，其发生率在第二剂初免疫苗接种后较第一剂后下降。相关非征集性AEs不常见，未发生疫苗相关严重AEs、特别关注的不良事件或死亡。佐剂H5疫苗引发的抗体对异源H5株的交叉反应性已在多项研究中记录。在近期人畜共患H5N1疫情中，芬兰一项观察性研究评估了接种含A/Astrakhan/3212/2020（H5N8）样株（clade 2.3.4.4b）MF59佐剂疫苗的高危职业人群的免疫应答。该疫苗引发针对同源疫苗病毒和异源clade 2.3.4.4b H5N1病毒的稳健抗体应答，包括与2023年芬兰毛皮养殖场疫情和2024年美国奶牛疫情相关的毒株。一项使用研究性DNA H5N8疫苗的动物研究同样证明形成针对H5N1病毒的交叉中和抗体。除HA导向免疫外，对神经氨酸酶（NA）抗原的应答可能对预防感染有重要贡献。已发表数据显示MF59佐剂增强神经氨酸酶特异性应答。鉴于NA抑制抗体作为独立保护相关物的作用以及某些NA表位在相关H5Nx病毒间的相对保守性，这可能进一步支持对H5N1株的交叉反应性。A/Astrakhan H5N8株引发针对当前流行clade 2.3.4.4b H5N1病毒交叉中和抗体的能力支持其在大流行前储备策略中的潜在效用。然而，这些数据反映血清学交叉反应性而非证明对自然感染的临床有效性；针对人类H5感染的正式 efficacy 研究仍不可用。鉴于H5感染相关的总体高死亡率和病毒在哺乳动物宿主间的快速地理传播，维持稳健的大流行储备是全球防范的基石。MF59等佐剂对该策略至关重要；它们不仅实现抗原节约，允许有限抗原供应在宣布大流行后保护更大比例人群，还主动拓宽免疫库以识别漂移病毒变异体。本研究未针对正式组间比较进行 power 计算，结论因此受亚组内样本量限制。参与的家禽工人组在2024年美国奶牛场检测到感染之前入组。样本量可能太小，无法包括足够多的预先暴露受试者以显示家禽工人和非家禽工人之间免疫应答的显著差异。尽管如此，稳健的免疫原性和令人放心的安全性数据与MF59佐剂H5疫苗的历史评估一致。此外，这些结果强化了aH5N8c作为应对新兴禽流感威胁的有效对策的临床效用，印证了近期真实世界有效性数据。结论：两剂aH5N8c同源初免在第43天引发强H5N8 HI和MN抗体应答。这些应答无论年龄、家禽暴露或既往流感疫苗接种如何均持续稳健。总之，这些发现支持MF59佐剂细胞培养H5N8疫苗作为大流行防范策略的有前景选择。
研究背景：近年来，H5禽流感从野生动物和家畜向人类的人畜共患传播增加，高致病性禽流感（HPAI）毒株尤其是H5N1历史死亡率高达50%。全球人群缺乏预先存在免疫力，这些病毒及基因重配体构成严重大流行威胁。疫苗接种是减轻流感大流行相关发病率和死亡率的最有效策略，但宣布大流行后制造和分发匹配株特异性疫苗可能需要数月，储备大流行前疫苗可提供关键过渡。目前多数 licensed 季节性和大流行性流感疫苗使用鸡胚生产，每年需数十亿枚鸡蛋，禽流感大流行期间供应链存在后勤挑战，且病毒繁殖过程中血凝素（HA）蛋白常出现egg-adaptive突变导致抗原不匹配。细胞培养生产避免这些限制，与角鲨烯基水包油乳剂MF59配合可实现抗原节约和拓宽交叉反应免疫应答。尽管MF59佐剂细胞培养H5N1疫苗已广泛研究并国际许可，针对clade 2.3.4.4b H5N8病毒的MF59佐剂细胞培养疫苗临床数据仍有限。本研究评估MF59佐剂细胞培养H5N8疫苗（aH5N8c）在≥18岁成人中的安全性、反应原性和同源免疫应答，并专门入组家禽工人亚组以确定既往暴露是否改变免疫应答。研究开展：这项2期、随机、观察者盲法、多中心免疫原性和安全性研究在美国9个中心进行，入组≥18岁成人，按年龄（18–64岁和≥65岁）分层，18–64岁队列进一步按家禽工人状态分层。参与者按2:1:1随机分配接受两剂同源aH5N8c疫苗间隔3周接种或两剂异源疫苗接种。每剂含7.5 μg H5 HA + 0.25 mL MF59。本文报告同源初免组第1天至第43天结果。主要结局为HI试验检测针对H5N8的抗体应答，次要免疫原性结局为MN试验检测抗体应答，安全性结局包括征集性和非征集性不良事件（AEs）。结论：两剂aH5N8c同源初免在第43天引发强H5N8 HI和MN抗体应答，无论年龄、家禽暴露或既往流感疫苗接种如何均持续稳健。意义：支持MF59佐剂细胞培养H5N8疫苗作为大流行防范策略的有前景选择，强化其作为应对新兴禽流感威胁有效对策的临床效用。关键技术方法：采用2期随机观察者盲法多中心设计，在美国9个中心入组≥18岁成人（18–64岁和≥65岁队列），18–64岁队列包括家禽工人亚组；参与者按2:1:1随机分配接受两剂同源aH5N8c（A/Astrakhan/3212/2020 IDCDC-RG71A；clade 2.3.4.4b）间隔3周接种；每剂含7.5 μg H5 HA + 0.25 mL MF59；主要免疫原性通过血凝抑制（HI）试验使用细胞培养靶病毒检测，次要通过微量中和（MN）试验在随机选取的50%亚组检测；安全性通过电子日记收集7天征集性AEs及第1–43天非征集性AEs；统计分析使用通用线性模型估计GMTs和GMFIs。研究结果：免疫原性——第22天单剂aH5N8c使18–64岁和≥65岁亚组HI GMT分别增至19.6和35.5；第43天两剂后HI GMTs分别为71.7和64.0，GMFIs分别为13.7和10.2，血清转化率分别为75.8%和71.0%，HI滴度≥1:40分别为75.8%和73.0%。MN应答模式与HI相似但通常更高，第43天MN GMTs分别为157.6和141.3，GMFIs分别为19.2和11.1，血清转化率分别为80.6%和70.0%，MN滴度≥1:40分别为83.9%和86.7%。家禽工人与非家禽工人之间基线HI滴度相似，抗体应答无显著差异；既往季节性流感疫苗接种者与未接种者免疫应答相似。安全性——大多数征集性AEs为轻度或中度，发生在疫苗接种后不久并在3天内缓解；第二剂后征集性AEs发生率通常低于第一剂后；≥65岁参与者报告的局部和全身征集性AEs均少于18–64岁者；最常见的征集性局部AE为注射部位疼痛，全身AE为疲劳。截至第43天，16.7%参与者报告非征集性AE，仅2名≥65岁参与者报告SAEs（被认为与疫苗无关），无相关SAEs、AESIs或死亡报告；1名18–64岁参与者因第1天轻度恶心退出（被认为可能与疫苗相关）。讨论部分总结：间隔三周接种两剂aH5N8c引发稳健抗体应答，HI滴度分别增加13.7倍和10.2倍，血清转化率75.8%和71.0%，免疫应答在年龄队列间相似且不受家禽工人状态或季节性流感疫苗接种史影响。安全性 profile 与 licensed MF59佐剂H5N1流感疫苗一致。佐剂H5疫苗引发的抗体对异源H5株的交叉反应性已在多项研究中记录，芬兰观察性研究显示含A/Astrakhan/3212/2020（H5N8）样株MF59佐剂疫苗引发针对同源和异源clade 2.3.4.4b H5N1病毒的稳健抗体应答。除HA导向免疫外，NA应答可能对预防感染有重要贡献，MF59佐剂增强神经氨酸酶特异性应答。A/Astrakhan H5N8株引发交叉中和抗体的能力支持其在大流行前储备策略中的潜在效用，但这些数据反映血清学交叉反应性而非临床有效性。本研究未针对正式组间比较进行 power 计算，结论受亚组样本量限制；家禽工人组在2024年美国奶牛场检测到感染之前入组，样本量可能太小无法显示家禽与非家禽工人间免疫应答显著差异。尽管如此，稳健免疫原性和安全性数据与MF59佐剂H5疫苗历史评估一致，强化aH5N8c作为应对新兴禽流感威胁有效对策的临床效用。研究结论翻译：两剂aH5N8c同源初免在第43天引发强H5N8 HI和MN抗体应答。这些应答无论年龄、家禽暴露或既往流感疫苗接种如何均持续稳健。总之，这些发现支持MF59佐剂细胞培养H5N8疫苗作为大流行防范策略的有前景选择。
