黑曲霉异源蛋白质分泌阻滞与内质网定位的荧光可视化研究

《Annals of Microbiology》：Monitoring heterologous protein expression and trafficking in Aspergillus niger

【字体：大中小】 时间：2026年11月12日 来源：Annals of Microbiology 5.1

编辑推荐：

　　摘要像黑曲霉这样的丝状真菌由于其强大的分泌能力和进行翻译后修饰的能力，被广泛用作异源蛋白质生产的宿主。然而，重组蛋白质的分泌效率低下以及其在细胞内的滞留是一个主要挑战。因此，我们利用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告分子来监测黑曲霉中异源蛋白质的细胞内定位。我们使用了一

摘要

像黑曲霉这样的丝状真菌由于其强大的分泌能力和进行翻译后修饰的能力，被广泛用作异源蛋白质生产的宿主。然而，重组蛋白质的分泌效率低下以及其在细胞内的滞留是一个主要挑战。因此，我们利用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告分子来监测黑曲霉中异源蛋白质的细胞内定位。我们使用了一种重组菌株CSE3，该菌株表达了与合成信号肽融合的EGFP，并通过组成型PcitA启动子来表达这种融合蛋白。荧光显微镜检查未在培养上清液中发现分泌的EGFP荧光，但在真菌菌丝中观察到了明显的点状结构。为了研究EGFP融合蛋白的细胞内定位，我们使用了针对液泡、细胞核、线粒体和内质网的特异性染料。我们的观察结果表明，EGFP定位于内质网中。这项研究表明，基于荧光的可视化方法结合使用特异性染料，为监测丝状真菌中异源蛋白质的细胞内运输提供了一种实用的技术。识别这些分泌瓶颈将有助于提高在丝状真菌平台上异源蛋白质的表达效率。

图形摘要

像黑曲霉这样的丝状真菌由于其强大的分泌能力和进行翻译后修饰的能力，被广泛用作异源蛋白质生产的宿主。然而，重组蛋白质的分泌效率低下以及其在细胞内的滞留是一个主要挑战。因此，我们利用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告分子来监测黑曲霉中异源蛋白质的细胞内定位。我们使用了一种重组菌株CSE3，该菌株表达了与合成信号肽融合的EGFP，并通过组成型PcitA启动子来表达这种融合蛋白。荧光显微镜检查未在培养上清液中发现分泌的EGFP荧光，但在真菌菌丝中观察到了明显的点状结构。为了研究EGFP融合蛋白的细胞内定位，我们使用了针对液泡、细胞核、线粒体和内质网的特异性染料。我们的观察结果表明，EGFP定位于内质网中。这项研究表明，基于荧光的可视化方法结合使用特异性染料，为监测丝状真菌中异源蛋白质的细胞内运输提供了一种实用的技术。识别这些分泌瓶颈将有助于提高在丝状真菌平台上异源蛋白质的表达效率。