In-Cell Western 如此简单！一种无需裂解细胞、制胶、电泳、转膜的高通量Western Blot方法

In-Cell Western(ICW)是由美国LICORbio公司开发的一种直接在微孔板内进行的定量免疫荧光（IF）测定方法，该方法结合了Western Blot的特异性、ELISA的可重复性和高通量等特点。In-Cell Western无需进行细胞裂解、制胶、电泳、转膜等步骤，不仅节省了时间，而且大大提高了实验通量和重复性，能更好地应用于高通量药物筛选研究。

01.In-Cell Western实验流程

  ①以一定密度在96/384孔板上培养细胞；

  ②生长到合适密度后，加药物或其他处理；

  ③加入多聚甲醛进行固定；

  ④加入Triton X-100对细胞进行透化处理；

  ⑤封闭30 min；

  ⑥加入一抗孵育1h；

  ⑦加入荧光标记二抗孵育1h，洗涤，Odyssey 成像检测。

02. In-Cell Western重复性更高

用Western Blot方法分别在两张膜上检测GAPDH和PMLC20两种蛋白，每张膜各做13次重复，CV 值0.27；GAPDH和PMLC20通过In-Cell Western方法检测，做30次重复，CV值 0.08-0.16。

与传统Western Blot相比，In-Cell Western的通量更高，CV值更小，提高了实验结果的重复性和准确性。

与传统Western Blot相比，In-Cell Western 更快速便捷

03. In-Cell Western应用

In-Cell Western的应用举例-蛋白磷酸化研究

该实验利用In-Cell Western技术检测ERK蛋白的磷酸化水平。Total ERK蛋白（700 nm）作为参照蛋白，进行蛋白均一化。通过不同浓度的EGF(Epidermal Growth Factor，表皮生长因子）刺激细胞，来观察ERK蛋白磷酸化（800 nm）水平变化。

随着EGF的浓度逐渐增加，ERK蛋白磷酸化程度显著增加。加入100 ng/ml 的EGF比不加入EGF的ERK蛋白磷酸化高出16倍以上。

高通量快速的In-Cell Western已广泛应用到细胞自噬、凋亡、癌症、药物研究、信号转导、离子通道、基因表达等多个应用领域。

04. In-Cell Western优势

 优势总结

  ①高通量，一次可实现n*96/384样品检测；

  ②可用不同荧光标记二抗同时检测几种蛋白；

  ③可做大分子量细胞蛋白检测；

  ④特异性高、灵敏性好，

  ⑤重复性好、精确度好；

  ⑥简单快捷，无需细胞裂解、制胶、电泳以及转膜等步骤，减少误差，提高实验效率，节约时间。

In-Cell Western 技术是由LICORbio公司提出并优化而成的一种实验技术，配合Odyssey 家族成像系统使用，更专业、效果更好。

LICORbio公司的Odyssey® 家族成像系统可以实现定量Western Blot检测，具有重复性好、定量准确、 多色荧光成像、背景低、灵敏度高、可直接检测、应用范围广等多种优势，其不仅可以进行孔板的In-Cell Western检测，还可以实现近红外荧光Western Blot、可见荧光Western Blot 、组织切片成像、On-Cell Western、EMSA/凝胶迁移实验、荧光蛋白质芯片、荧光核酸芯片、考染胶成像、器官成像等多种应用。

丰富的应用

Odyssey家族

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