基于适配体微孔板检测技术的O型口蹄疫病毒VP1蛋白新型检测方法研究

《Scientific Reports》：Aptamer-linked immobilized sorbent assay for detection of VP1 of foot and mouth disease virus serotype O

针对口蹄疫传统诊断方法存在交叉反应性和成本问题，研究人员通过SELEX技术筛选出特异性靶向O型FMDV VP1蛋白的适配体（Kd=14±8.6 nM），开发出ALISA微孔板检测平台。该技术可实现0.50-5.0 ng/mL浓度范围的线性检测（R2=0.9354），LOD达1.3 ng/mL，且对非靶标无交叉反应，为FMDV监测提供高效低成本解决方案。

　　

口蹄疫（Foot and Mouth Disease, FMD）作为最具破坏性的动物疾病之一，其暴发往往导致生猪等易感动物出现水疱病变，造成大规模发病或群体扑杀。当前诊断主要依赖血清学及免疫学方法，但这些方法存在交叉反应性（cross-reactivity）和成本高昂的双重困境。特别是在O型口蹄疫病毒（FMDV）流行区域，缺乏快速、特异的现场检测工具已成为疫情防控的瓶颈。

为突破这一技术壁垒，研究人员在《Scientific Reports》发表的研究中，开创性地将适配体（aptamer）技术应用于FMDV检测领域。通过系统性进化配体指数富集技术（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment, SELEX），团队成功筛选出特异性靶向O型FMDV VP1病毒蛋白的新型核酸适配体，并将其整合至适配体连接固定吸附测定（Aptamer-linked Immobilized Sorbent Assay, ALISA）微孔板平台，建立了一种具有高灵敏度且成本效益突出的检测新方法。

关键技术方法包括：通过SELEX技术筛选VP1特异性适配体；采用表面等离子共振等技术测定适配体亲和力（K_d值）；建立ALISA微孔板检测体系并进行标准曲线验证；通过高浓度非靶标蛋白（500-2000 ng/mL）进行交叉反应性评估。

研究结果方面：

亲和力表征显示，筛选获得的FMDV Apt适配体与VP1蛋白具有强结合能力，解离常数（K_d）为14±8.6 nM。

检测性能验证表明，在0.50-5.0 ng/mL浓度范围内呈现良好线性关系（R²=0.9354），检测限（Limit of Detection, LOD）为1.3 ng/mL，定量限（Limit of Quantification, LOQ）约4 ng/mL。

特异性测试证实，该ALISA平台对高浓度非靶标蛋白无交叉反应，显示出优异的选择性。

研究结论强调，该适配体微孔板检测技术不仅解决了传统方法的特异性与成本问题，其便携式特性更适用于现场快速筛查。讨论部分指出，该平台可进一步拓展至其他血清型FMDV检测，为动物疫病防控提供新的技术支撑，对保障畜牧业生物安全具有重要意义。