《Journal of Immunological Methods》：Muscarinic 3 receptor antibodies in Sj?gren's disease: Evaluating assay variability and detection methods
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抗M3R受体抗体在干燥综合征中的诊断价值及检测方法差异研究。通过系统回顾分析发现，不同检测方法对anti-M3R抗体的灵敏度差异显著（0-100%），主要因试剂类型、肽构象及实验方法差异导致。建议采用标准化构象特异性检测方法以提高诊断准确性。
作者：Martha Tsaliki、Devavrat Dave、Biji T. Kurien、R. Hal Scofield
美国俄克拉荷马州俄克拉荷马市俄克拉荷马医学研究基金会关节炎与临床免疫学项目，邮编73104
摘要
干燥综合征（Sj?gren’s Disease, SjD）最常见的表现是眼睛和口腔干燥，这是由于泪液（干性角结膜炎）和唾液腺功能减退（口干症）所致。SjD的另一个特征是存在自身抗体。外分泌腺中的腺泡细胞表达毒蕈碱型3受体（Muscarinic-type 3 receptor, M3R），这些受体负责调节唾液分泌。研究表明，针对M3R的自身抗体与SjD患者的唾液分泌减少有关。早期研究提出，抗M3R抗体可能作为SjD的临床标志物和干燥症状的指标。虽然功能检测证实抗M3R抗体具有抑制作用，但其他检测方法对这些抗体的检测敏感性差异很大（0–100%）。检测类型、试剂或肽构象的差异可能是导致这种敏感性和特异性差异的原因。我们检索了PubMed/PubMed Central（截至2024年）的相关文献，以探讨这种差异的可能原因，并确定最佳的检测方法来筛查这些抗体。本文强调了构象检测的重要性，并建议进行标准化以提高诊断准确性。
引言
Sj?gren’s Disease (SjD) 可以表现为局部腺体受累或全身性免疫系统异常，最常见的症状是口腔和眼睛干燥（Vivino等，2019；Kyriakidis等，2014）。SjD是第二常见的风湿性疾病，影响约1%的人口，其发病率接近类风湿关节炎（RA）的一半（Sandhya等，2017；Carsons和Patel，2025）。SjD在女性中的发病率高于男性（男女比例为9:1），平均诊断年龄为56.8岁（Baldini等，2014；Brito-Zerón等，2016）。患者可能表现为单纯型SjD（无伴随疾病），也可能表现为重叠型SjD（伴有结缔组织疾病如RA或系统性红斑狼疮（SLE）（Vivino等，2019）。目前SjD的分类采用2016年美国风湿病学会-欧洲抗风湿联盟（ACR-EULAR）的标准，而临床诊断则没有特定的标准（Shiboski等，2017）。
自身抗体在SjD发病前就已存在，有研究显示这些抗体可在诊断和/或分类前6年就被检测到（Jonsson等，2013）。在SjD患者中最常见的自身抗体是抗Ro抗体（60%–80%的患者检测到）和抗La抗体（40%–60%的患者检测到）（Shiboski等，2017；Vitali等，2002）。抗Ro抗体是SjD的分类生物标志物（Shiboski等，2017；Vitali等，2002）。这两种生物标志物都与腺体功能障碍相关，包括更严重的外分泌腺损伤、反复发作的腮腺肿大以及小唾液腺中的淋巴细胞浸润（Fayyaz等，2016）。尽管抗Ro抗体在SjD中很常见，但它们并非SjD的特异性标志物，在其他自身免疫性疾病如SLE、系统性硬化症、炎症性肌炎和RA中也有发现（Yoshimi等，2012；Vilchez-Oya等，2022）。由于抗Ro抗体的疾病特异性较低，它们不适合作为准确分类或诊断SjD的理想标志物。
SjD患者的唾液腺中浸润有分泌抗体的细胞（antibody-secreting cells, ASC），这些细胞分泌的自身抗体在疾病发病机制中起重要作用（Maier-Moore等，2014）。先前的研究表明，SjD患者的抗体能够结合M3R的表位，并抑制与唾液分泌直接相关的途径，从而导致腺体功能受损（Fayyaz等，2016；Deng等，2015；Zuo等，2016；Lee等，2013；Dawson等，2005；Dawson等，2006；Jin等，2012a；Cavill等，2004；Naito等，2005；Nakamura等，2008；Scarselli等，2007）。除了参与唾液分泌外，M3R还参与瞳孔括约肌、尿道逼尿肌（促进排尿）和肠道平滑肌的收缩，以及抑制细胞凋亡（Matsui等，2000）。
尽管多项研究强调了抗M3R抗体在SjD进展中的重要性，但它们在疾病发病机制中的作用及其作为治疗靶点的潜力仍不确定（Deng等，2015；Zuo等，2016；Dawson等，2005；Naito等，2005；He等，2012；Iizuka等，2010；Park等，2011；Gao等，2004；Roescher等，2011）。抗M3R抗体在SjD中的检出率差异很大（1.92%至97%），这取决于所使用的检测方法（Mona等，2021a）。四十多年来，研究人员一直在讨论这些毒蕈碱抗体在SjD中的诊断价值（Deng等，2015）。然而，与其他类似疾病（如RA和SLE）相比，抗M3R抗体对SjD具有高度特异性（Deng等，2015；Zuo等，2016；Naito等，2005）。当使用不同的技术检测这些抗体时，检测结果存在不一致性。因此，重新评估目前使用的所有方法至关重要，以确定哪种方法具有最高的敏感性和特异性。尽管已经开发了多种检测抗M3R抗体的方法，但目前尚无全面的研究评估其有效性。本文旨在通过深入回顾这些方法来填补这一空白，并评估它们在疾病检测中的可靠性。
部分内容摘要
毒蕈碱型3受体（M3R）信号传导及其在唾液分泌中的作用
毒蕈碱受体家族包括五种G蛋白偶联受体（GPCR）亚型（M1R–M5R），它们在不同组织和器官中的表达存在差异，在副交感神经系统中发挥不同的作用（Lee等，2013）。作为GPCR受体家族的成员，这些受体包含7个跨膜结构域（Haga，2013）。
研究选择
我们进行了全面的PubMed搜索（1987–2025年），以识别描述用于筛查SjD患者M3R抗体的研究文章。初步搜索使用了“muscarinic 3 antibodies”、“Sj?gren’s”、“assays”和“autoantibodies”等关键词，共找到52篇论文。
结论
抗M3R自身抗体在SjD的发病机制中起关键作用，会干扰M3R介导的胆碱能信号传导，导致腺体功能障碍和自主神经症状。功能研究表明，这些抗体能够抑制钙离子流动（Tsuboi等，2010）、AQP5蛋白的运输（Lee等，2013）以及受体的内化（Jin等，2012a）；被动转移实验在动物模型中再现了唾液分泌、膀胱功能障碍（Wang等，2004）和胃肠道功能障碍（Park等，2011；Bacman等）。
作者贡献声明
Martha Tsaliki：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据验证、软件使用、项目管理、方法学设计、实验设计、数据分析、概念化。
Devavrat Dave：撰写 – 审稿与编辑、数据验证、软件使用、方法学设计、实验设计、数据分析。
Biji T. Kurien：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据验证、项目监督、方法学设计、实验设计、数据分析。
写作过程中使用生成式AI和AI辅助技术的声明
在准备本文时，作者使用了OpenAI的ChatGPT工具来总结与Sj?gren’s Disease中毒蕈碱型3受体肽相关的多项同行评审研究的结果。使用该工具后，作者对内容进行了必要的审查和编辑，并对出版物的内容负全责。
致谢
本研究的部分资金来自NIH（AR053483、AI082714、GM104938、AR060804、DE028001）以及Sj?gren’s Foundation的高影响力研究奖。MT还得到了Onassis Foundation的部分资助——奖学金编号：J ZK 011-2/2019-2020。
