用于定量达鲁鲁他胺中亚硝基杂质的分析型绿色和白色高效液相色谱（HPLC）方法，结合质谱/质谱（MS/MS）技术对降解产物进行表征，并通过计算机模拟（in silico）方法评估其毒性

《CHROMATOGRAPHIA》：Analytical Green and White HPLC Method for the Quantification of Nitroso Impurities in Darolutamide with MS/MS Characterization and In silico Toxicity Assessment of Degradation Products

绿色HPLC方法结合LC-MS/MS分析达鲁奥替尼降解产物，采用苯基-己基柱分离，流动相为乙醇-氨甲酸铵（55:45），UV检测238 nm。方法验证显示高灵敏度（LOD 0.015 μg/mL）、精密度（%RSD＜1.0%）及准确性（回收率99.4-101.1%）。强制降解表明酸/碱/氧化是主要降解途径，生成6个新DPs（DP1-DP6），其中DP1-2为硝基水解产物，DP3为醇氧化酮，DP6为酸催化脱水烯烃。结构鉴定与毒性预测（LD50 1000-2200 mg/kg）显示低急性毒性。AGREE评分0.83证明方法符合绿色分析标准，有效解决硝基杂质监管问题。

　　

摘要

本研究开发了一种绿色的、能够指示稳定性的高效液相色谱（HPLC）方法，并结合液质联用（LC–MS/MS）技术对达鲁托胺（darolutamide）的降解产物（Degradation Products, DPs）进行了表征。色谱分离使用的是苯基-己基柱（250 × 4.6 mm，5 μm），流动相为等度混合的乙醇和5 mM甲酸铵溶液，其中含有0.1%的甲酸（体积比55:45，pH 3.6），流速为0.8 mL/min，检测波长为238 nm。该方法能够获得清晰对称的色谱峰，达鲁托胺、硝基杂质以及硝基杂质1和2的保留时间分别为5.8 min、4.2 min、1.59 min和2.96 min。强制降解实验表明，达鲁托胺对酸、碱和氧化应力最为敏感。这些应力作用导致形成了六种新的降解产物（DP1-DP6）。通过LC–MS/MS对这些降解产物的结构进行解析，确认DP1和DP2是腈类化合物的水解产物（酰胺和羧酸衍生物）；DP3是由醇氧化生成的酮类化合物；DP6则是通过酸催化脱水反应生成的烯烃；而DP4和DP5则是由于酰胺键的连续断裂以及达鲁托胺侧链的丢失而产生的。基于计算机模拟的毒性预测，所有降解产物的毒性等级属于4–5级（LD?? = 1000–2200 mg/kg），具有较低的急性毒性。方法验证结果显示：该方法具有出色的线性（r2 > 0.996）、高精度（%RSD < 1.0%）、高准确性（回收率99.4–101.1%）、良好的稳健性以及极高的灵敏度（检出限低至0.015 μg/mL）。该方法的环境友好性和可持续性得到了验证，其AGREE评分为0.83，ComplexGAPI评分为80.1%，RGB白度评分为80.1%。本研究强调了该方法符合绿色和白色分析化学的原则。此外，该方法特别针对具有监管意义的硝基杂质进行了研究，表现出优异的环境和分析性能。总之，所提出的方法是一种可持续、可靠且符合监管要求的手段，适用于达鲁托胺的常规杂质分析和稳定性评估。

本研究开发了一种绿色的、能够指示稳定性的高效液相色谱（HPLC）方法，并结合液质联用（LC–MS/MS）技术对达鲁托胺的降解产物（Degradation Products, DPs）进行了表征。色谱分离使用的是苯基-己基柱（250 × 4.6 mm，5 μm），流动相为等度混合的乙醇和5 mM甲酸铵溶液，其中含有0.1%的甲酸（体积比55:45，pH 3.6），流速为0.8 mL/min，检测波长为238 nm。该方法能够获得清晰对称的色谱峰，达鲁托胺、硝基杂质以及硝基杂质1和2的保留时间分别为5.8 min、4.2 min、1.59 min和2.96 min。强制降解实验表明，达鲁托胺对酸、碱和氧化应力最为敏感。这些应力作用导致形成了六种新的降解产物（DP1-DP6）。通过LC–MS/MS对这些降解产物的结构进行解析，确认DP1和DP2是腈类化合物的水解产物（酰胺和羧酸衍生物）；DP3是由醇氧化生成的酮类化合物；DP6则是通过酸催化脱水反应生成的烯烃；而DP4和DP5则是由于酰胺键的连续断裂以及达鲁托胺侧链的丢失而产生的。基于计算机模拟的毒性预测，所有降解产物的毒性等级属于4–5级（LD?? = 1000–2200 mg/kg），具有较低的急性毒性。方法验证结果显示：该方法具有出色的线性（r2 > 0.996）、高精度（%RSD < 1.0%）、高准确性（回收率99.4–101.1%）、良好的稳健性以及极高的灵敏度（检出限低至0.015 μg/mL）。该方法的环境友好性和可持续性得到了验证，其AGREE评分为0.83，ComplexGAPI评分为80.1%，RGB白度评分为80.1%。本研究强调了该方法符合绿色和白色分析化学的原则。此外，该方法特别针对具有监管意义的硝基杂质进行了研究，表现出优异的环境和分析性能。总之，所提出的方法是一种可持续、可靠且符合监管要求的手段，适用于达鲁托胺的常规杂质分析和稳定性评估。