综述：TSZAF单体组合通过调节AKT/FOXO3A介导的糖酵解途径来抑制卵巢癌的进展

《Biological Procedures Online》：TSZAF Monomer Combination Inhibits the Progression of Ovarian Cancer Via Regulating the AKT/FOXO3A-mediated Glycolysis Pathway

TSZAF组合物通过抑制AKT/FOXO3A信号通路及糖酵解相关基因（HK2, PKM2, PFKM, GLUT1, LDHA），有效抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡，动物实验验证其体内抗肿瘤效果，且AKT激活剂SC79可逆转其作用。

　　

摘要

背景

调神治癌方（TSZAF）是一种用于临床治疗卵巢癌的中药复合处方。在本研究中，我们从TSZAF中选取了三种主要活性成分，并将它们组合成一种新的TSZAF单体组合（TSZAF mc），以探讨其在抑制卵巢癌增殖和诱导细胞凋亡方面的作用及机制。

方法

通过CCK-8实验、集落形成实验和凋亡实验，体外评估了TSZAF mc对卵巢癌HEY和SKOV3/IP1细胞增殖活性和凋亡的影响。利用微方法、流式细胞术和免疫荧光技术，研究了TSZAF mc对有氧糖酵解代谢物和线粒体膜电位的影响。通过定量实时PCR（RT-PCR）和Western blot（WB）检测了关键糖酵解基因的mRNA和蛋白质表达。使用SKOV3/IP1细胞在NOD-SCID小鼠体内建立了卵巢癌皮下肿瘤模型。通过连续腹腔注射给药TSZAF mc，并通过解剖观察、苏木精-伊红（H&E）染色和免疫组化（IHC）评估其体内抗肿瘤效果。进一步通过RT-PCR、WB和IHC验证了关键上游糖酵解基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。采用药物亲和力响应靶标稳定性（DARTS）和细胞热位移实验（CETSA）确认结合靶标。通过分子对接预测了单体与AKT之间的结合相互作用。最后，基于功能实验阐明了信号通路内的调控关系。

结果

TSZAF mc有效抑制了卵巢癌的增殖并诱导了细胞凋亡。它减少了乳酸和ATP的生成，降低了线粒体膜电位，并下调了包括HK2、PKM2、PFKM、GLUT1和LDHA在内的关键糖酵解基因的mRNA和蛋白质表达。在体内实验中，TSZAF mc抑制了卵巢癌的生长。此外，TSZAF mc在蛋白质和组织水平上均下调了磷酸化AKT（p-AKT）和磷酸化FOXO3A（p-FOXO3A）的表达。CETSA和DARTS实验表明TSZAF mc能够与AKT结合。AKT激活剂SC79逆转了TSZAF mc对卵巢癌增殖的抑制作用以及糖酵解蛋白的下调效应。

结论

TSZAF mc通过调节AKT/FOXO3A介导的糖酵解途径来抑制卵巢癌的进展，这可能是TSZAF在卵巢癌治疗中发挥临床疗效的机制之一。