“ Bushen Zhuyun 食谱”通过 Kruppel 类因子 4 介导的混合谱系白血病 1（MLL1）的招募来提高子宫内膜的接受性，从而激活 homeobox A10 基因的转录

《Phytomedicine》：Bushen Zhuyun Recipe improves endometrial receptivity through kruppel-like factor 4-mediated recruitment of mixed-lineage leukemia 1 to activate homeobox A10 transcription

Scopoletin抑制阿尔茨海默病5xFAD模型小胶质细胞炎症反应并改善认知功能，机制涉及Top2A和PP2A-NF-κB通路调节及Aβ沉积减少。

　　

欧阳晓燕|赵珍珍|侯一飞|王思辰|杨玉章|陈红专|徐建荣

中国上海中医药大学中西医结合医学院上海传染病与生物安全研究所传统中医研究中心

摘要

背景

:小胶质细胞驱动的炎症是阿尔茨海默病（AD）的关键病理特征。Scopoletin是一种来自Erycibe obtusifolia Benth的天然香豆素化合物，具有抗炎活性。然而，其在AD模型中对小胶质细胞炎症反应和认知功能的影响尚需进一步明确。

目的

:评估scopoletin对5xFAD模型中小胶质细胞炎症反应和认知功能改善的药理作用。

方法

:通过测量细胞因子和炎症标志物，在LPS刺激的BV2细胞和原代小胶质细胞以及LPS诱导的体内炎症模型中评估抗炎作用。在5xFAD小鼠中，检测炎症、Aβ负荷和认知行为。采用RNA测序、siRNA敲低和Western blot技术确定炎症调控途径。

结果

:Scopoletin显著降低了LPS刺激的BV2细胞中的IL-6和TNF-α水平，逆转了M1/M2极化，抑制了原代小胶质细胞的形态变化，并减轻了体内的LPS诱导炎症。Scopoletin处理减轻了海马体和皮层的炎症和Aβ沉积，改善了5xFAD小鼠的认知障碍。此外，转录组分析表明，scopoletin可能通过上调下游介质（如拓扑异构酶II Alpha（Top2A）和PP2A-NF-κB信号通路）来调节LPS刺激的BV2细胞中的炎症信号通路。

结论

:Scopoletin抑制了5xFAD小鼠的小胶质细胞炎症反应，改善了认知障碍，为AD改良疗法提供了新的候选化合物。

引言

阿尔茨海默病（AD）是最常见的神经退行性疾病，也是全球痴呆的主要原因（Kamatham等人，2024年），其特征是进行性记忆丧失和认知能力下降（Juul Rasmussen和Frikke-Schmidt，2023年）。AD的经典神经病理学特征包括细胞外淀粉样蛋白-β（Aβ）斑块的积累和细胞内由过度磷酸化的tau蛋白组成的神经纤维缠结（Chen等人，2023年）。虽然这些病变是AD病理的核心，但越来越多的证据表明炎症是疾病进展的关键驱动因素（Zhao等人，2025年），并显著促进神经元功能障碍和认知衰退（Zhang等人，2023年；Chen等人，2025年）。

小胶质细胞失调是AD炎症的主要驱动因素，导致Aβ积累和认知功能下降（Zubillaga等人，2025年）。脂多糖（LPS）常用于诱导小胶质细胞活化，导致IκB的磷酸化和NF-κB p65的核转位（Mao等人，2021年）。蛋白磷酸酶2A（PP2A）是这一过程的关键负调节因子，通过去磷酸化IκB和p65发挥作用（Neale等人，2025年）。然而，炎症刺激通过对其催化亚基的抑制性翻译后修饰抑制PP2A活性，导致NF-κB持续激活和小胶质细胞炎症反应增强（Yee等人，2021年）。这种PP2A和NF-κB调控轴的失调越来越被认为是与AD相关的炎症的关键因素（Shentu等人，2018年）。

Scopoletin（SP）是一种天然存在的香豆素衍生物，广泛存在于草药中，尤其是在Erycibe obtusifolia Benth中，已被证明具有抗炎和抗氧化活性（Parama等人，2022年）。先前的研究显示其能够抑制巨噬细胞和外周炎症模型中的炎症反应（Wan Osman等人，2017年）。然而，其在AD模型中对小胶质细胞和认知功能的影响及其机制仍不明确。

为了解决这些问题，我们采用了体外和体内相结合的研究方法。首先评估了scopoletin在BV2细胞和原代小胶质细胞中的抗炎作用，然后使用LPS诱导的急性炎症模型评估了其体内抗炎效果，并进一步研究了其对5xFAD转基因小鼠认知表现、Aβ病理和炎症的影响。最后，转录组分析及敲低实验表明Top2A可能参与了scopoletin在活化小胶质细胞中的保护作用。这些发现为进一步研究提供了机制基础，并支持scopoletin作为AD改良疗法候选物的潜力。

药物、试剂、抗体和实验仪器

Scopoletin购自MedChemExpress（HY-N0342；报告纯度≥98%）。化合物的鉴定和纯度通过供应商提供的UPLC–DAD色谱图、MS–光谱分析和¹HNMR光谱进行验证，详见补充图。

PluriSIn #2购自MedChemExpress（HY-111630）。依托泊苷购自MedChemExpress（HY-13629）。

本研究使用的所有药物、试剂、抗体、实验仪器和引物序列的完整列表见

Scopoletin减轻了LPS诱导的小胶质细胞活化及形态变化

为了评估scopoletin的抗炎作用，用LPS（100 ng/mL）刺激BV2小胶质细胞，并与scopoletin（10-50 μM）共培养。qPCR分析显示，与对照组相比，LPS使Il6、Tnf和Il1b的mRNA水平分别增加了842.0 ± 117.5、16.84 ± 1.88和89.36 ± 3.13倍，而50 μM scopoletin处理后这些值分别降低到232.1 ± 23.24、11.19 ± 1.16和32.06 ± 1.35倍（图1A-C）。相应地，ELISA检测也证实了这一结果

讨论

小胶质细胞是中枢神经系统的常驻免疫细胞，是神经组织内炎症环境的主要调节者（Wareham和Calkins，2025年）。小胶质细胞的形态与其活化状态密切相关，定量分析形态特征（如突起复杂性和分支模式）常用于反映生理和病理条件下的小胶质细胞活化变化（Taborda-Bejarano等人，2025年）。

结论

本研究表明，scopoletin通过重新编程小胶质细胞的转录组谱型，抑制了5xFAD小鼠模型中的炎症并改善了认知功能。其有益效果包括减少炎症细胞因子和保持小胶质细胞形态，这与Top2A相关信号通路的上调及PP2A–NF-κB通路的调节有关（见图9）。这些结果表明scopoletin是AD改良疗法的有希望的候选化合物。

资助

本研究得到了上海市科技重大项目（项目编号ZD2021CY001）和国家自然科学基金（项目编号82173798）的资助。

数据可用性

本研究中生成的RNA测序数据已存入NCBI序列读取档案（SRA），BioProject访问号为PRJNA1355541。所有其他支持本研究结果的数据可向相应作者索取。

作者贡献声明

陈红专：资金获取；监督。徐建荣：概念提出；监督；资金获取；手稿最终审核。欧阳晓燕：概念提出、实验设计、数据管理、可视化、初稿撰写。赵珍珍：实验设计、数据管理。侯一飞：实验操作。王思辰和杨玉章：实验流程。所有作者均已阅读并批准了手稿的最终版本，并对其内容表示同意。

作者贡献声明

欧阳晓燕：初稿撰写、可视化、实验设计、数据管理、概念提出。赵珍珍：实验设计、数据管理。侯一飞：方法学研究。王思辰：实验操作。杨玉章：实验操作。陈红专：监督、资金获取。徐建荣：监督、资金获取、概念提出。

利益冲突声明

作者声明没有已知的可能影响本文工作的财务利益或个人关系。

致谢

作者感谢资助机构提供的财务支持。同时感谢上海中医药大学的实验动物中心和仪器分析中心的技术协助，也感谢生物信息学核心设施在RNA测序和数据分析方面的支持。作者衷心感谢实验室所有成员对这项研究的宝贵贡献。