唾液中的病毒谱：HIV阳性和HIV阴性人群中多瘤病毒和疱疹病毒的检测

《Archives of Oral Biology》：Viral Landscape in Saliva: Polyomavirus and Herpesvirus Detection in HIV-Positive and HIV-Negative

本研究比较了HIV阳性和阴性人群唾液中六种HPyVs和五种HHVs的检出率及病毒载量，发现HIV阳性组HPyVs和HHVs检出率显著更高，且共感染更常见。首次证实HPyV miRNA可在病毒基因组阴性的唾液中存在，提示其潜在诊断价值。研究为评估口腔病毒作为HIV患者病理因素提供了基础。

　　

Shahnawaz Khijmatgar | Niccolò Cenzato | Maria Dolci | Francesco Carlo Tartaglia | Amid I Ismail | Marisol Tellez | Sara Casati | Evaldo Favi | Serena Delbue | Lucia Signorini

米兰大学生物医学、外科和牙科科学系，意大利米兰20122

摘要

背景

唾液是一种无创的研究口腔病毒的方法，但我们缺乏关于HIV阳性患者中人类多瘤病毒（HPyVs）和疱疹病毒（HHVs）的具体数据。目前，与健康个体相比，这一人群中的共感染模式和病毒载量尚未得到充分了解。我们的研究通过分析唾液中的这些病毒特征和微小RNA（miRNAs）来填补这一空白。这项工作有助于确立唾液作为这些感染可靠诊断方法的地位。

方法

一项横断面研究评估了从两个队列收集的唾液样本中六种人类多瘤病毒（HPyVs）和五种人类疱疹病毒（HHVs）的流行情况：20名接受抗逆转录病毒治疗（ART）的HIV阳性个体和37名HIV阴性个体。分子分析采用定量PCR（Q-PCR）技术，对病毒载量进行绝对定量，并检测JCPyV和MCPyV的微小RNA（miRNAs）。

结果

结果显示，HIV阳性组的HPyVs总体流行率（60% vs 32.4%）和HHVs流行率（75% vs 51.3%）均高于HIV阴性组。MCPyV和EBV是两个队列中检测到的最常见病毒，但其平均载量在HIV阳性组中显著更高。HIV阳性个体中的病毒共感染更为普遍（40.0% vs 32.4%），其中HPyV/HHV共感染占主导。值得注意的是，在对应病毒基因组阴性的样本中也检测到了HPyV的miRNAs。

结论

我们的研究结果证实了唾液在检测病毒共感染方面的有效性，并强调了确定口腔HPyVs和HHVs在HIV阳性患者中是作为 bystander（无害存在）还是病原体的必要性。

引言

口咽部是一个复杂的解剖结构，具有多种功能，它将外部环境与消化系统和呼吸系统连接起来。在正常情况下，口咽部被多种微生物定植，其中大多数为共生菌，不会产生任何致病作用。关于口咽部共存病毒群的流行病学数据以及这些病毒在口腔疾病发病机制中的作用证据仍然很少。 多项研究调查了HIV阳性患者中人类多瘤病毒（HPyVs）和人类疱疹病毒（HHVs）的流行情况和共感染模式（即同一个体同时感染两种或更多不同病原体），发现免疫功能低下者和免疫功能正常者之间存在显著差异。HIV阳性患者中HHVs的流行率较高。例如，一项研究发现89.3%的HIV阳性患者感染了HHVs，其中单纯疱疹病毒HSV-1最为常见（Ren等人，2020年）。71%的HIV阳性患者检测出多种HHVs，而对照组中这一比例为16%（Miller等人，2006年）。 BKPyV和JCPyV等HPyVs在HIV阳性患者中的流行率也更高。CD4+细胞计数较低的患者的BKPyV DNA阳性率显著更高，这表明病毒可能因免疫抑制而重新激活（Zhou等人，2020年）。 病毒感染对全球健康构成重大挑战，导致多种不同程度的疾病（Burrell等人，2017年）。人们对无创方法的兴趣日益增加，促使人们开始研究唾液等易于获取且对患者友好的生物样本，这些样本在采集简便性、成本效益和患者舒适度方面具有诸多优势。近年来，多项研究表明这些无创样本在检测特定病毒感染方面具有潜力，但涵盖多种病毒的比较分析仍然有限（Imbronito等人，2008年；Kim等人，1999年；Laxton等人，2023年；Zheng等人，2023年）。 HIV阳性患者的免疫抑制状态使得病毒重新激活更为常见且通常更严重。HIV引起的免疫抑制，尤其是CD4+ T细胞的减少，在这些病毒的重新激活中起着重要作用。抗逆转录病毒治疗（ART）有助于减少重新激活的频率，但无法完全消除它。在唾液中可能存在的病毒中，HPyVs和HHVs值得特别关注，因为越来越多的文献表明它们与多种慢性疾病和恶性肿瘤有关（Jeffery-Smith和Riddell，2021年；Prado等人，2018年）。 HPyVs是一种普遍存在的无包膜病毒，具有环状双链DNA。迄今为止，在人类中已鉴定出15种HPyVs，其在普通人群中的血清学流行率约为60%至100%（Moens等人，2019年）。初次感染通常在儿童期无症状发生。之后，HPyVs在肾小管上皮细胞中建立终生潜伏状态或持续亚裂解感染，在其他细胞类型中程度较低。在免疫功能低下者或接受长期免疫抑制治疗的患者中，HPyVs可能开始持续复制并转变为裂解感染，从而导致细胞死亡和不可逆的组织损伤（Barth等人，2017年；Favi等人，2019年；Krumbholz等人，2009年；Moens等人，2017年）。此外，已知HPyVs编码的miRNAs能靶向其相应的早期mRNA转录本，表明这些小RNA片段在病毒生命周期中起着重要作用，并可能与宿主因子相互作用（Lagatie等人，2013年）。 HHVs可以在HIV阳性和HIV阴性个体的唾液中检测到，但这两组之间的流行率和病毒载量存在显著差异（Baez等人，2013年；Ren等人，2020年）。关于Epstein Barr病毒（EBV）、人类疱疹病毒8型（HHV8）和人类巨细胞病毒（HCMV）的研究表明，HHVs在HIV阳性个体的唾液中显著更常见。因此，本研究的目的是调查HIV阳性和健康免疫功能正常个体的唾液样本中HPyVs和HHVs的流行情况，以评估它们与两种免疫状态相关的口腔存在情况。

病例人群和研究设计

在这项横断面研究中，评估了从两组受试者的口咽部收集的唾液样本中6种HPyVs和5种HHVs的基因组流行情况。第一组包括20名确诊为HIV感染并接受高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的个体（HIV阳性组），他们来自美国费城天普大学科恩伯格牙科学院。第二组包括37名HIV阴性个体（HIV阴性组）。

入组受试者中的HPyVs流行情况

在HIV阳性组和HIV阴性组中均检测到HPyVs，流行率分别为12/20（60.0%）和12/37（32.4%）。具体来说，在HIV阳性组中，5/20名受试者（25.0%）对JCPyV呈阳性，9/20名受试者（45.0%）对MCPyV呈阳性。其中，2/12名（16.6%）同时感染了这两种病毒。在HIV阴性组中，2/37名受试者（5.4%）对JCPyV呈阳性，11/37名受试者（29.7%）对MCPyV呈阳性，仅有一例同时感染JCPyV和MCPyV的情况。

讨论

了解唾液中病毒存在的病理生理机制不仅对于预防传染病的传播至关重要，特别是对于密切接触环境，而且对于开发利用唾液作为检测特定病毒感染的有价值载体的无创诊断方法也非常重要。HPyVs的独特特性，如它们在不同身体部位建立潜伏期的能力，以及其中一些病毒在病理过程中的作用，都是值得关注的重点。

研究局限性

本研究存在一些局限性。首先，相对较小的样本量可能限制了检测组间病毒流行率和共感染模式显著差异的统计能力。其次，横断面研究设计仅提供了唾液中病毒存在和载量的快照，无法评估随时间变化的趋势、因果关系或病毒重新激活模式。此外，所有HIV阳性参与者……

结论

总之，我们报告了免疫功能低下者和免疫功能正常者口腔样本中HPyVs基因组和miRNA的阳性存在，证实了口腔可能是特定口腔病毒群的可能储存库。我们的结果为进一步深入研究HPyVs的作用提供了良好基础，无论是作为口腔正常病毒群的一部分，还是作为参与口腔疾病的机会性病原体。在HIV感染的背景下，唾液病毒组分的分析将……

资金来源

本研究部分由意大利卫生部资助，属于IRCCS Italy当前研究项目。 部分工作得到了UNIMI GSA-IDEA项目的支持。

作者贡献声明

所有作者均参与了研究的构思与设计、数据获取、数据分析与解释。所有作者都对文章的起草或关键内容的修订做出了贡献，并最终批准了提交版本。

竞争利益声明

作者声明没有已知的竞争性财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

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利益冲突

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