《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》：Tertiary lymphoid structures in the era of cancer therapy
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本文系统综述了2025年第三届TLS研讨会的核心进展，揭示了TLS作为动态免疫枢纽，在结构、功能及细胞组成上的异质性，强调了其在预测免疫治疗效果中的关键作用。文中讨论了标准化病理检测、空间多组学技术（如Spatial VDJ）的应用，以及在胶质母细胞瘤、卵巢癌等挑战性肿瘤中TLS的形成调控机制，并指出肿瘤内在代谢（如GABA）等因素可抑制TLS功能。总体而言，该文为理解TLS在癌症预后与治疗中的广泛意义提供了前沿视角。
癌症中的“五彩斑斓”三级淋巴结构
在癌症免疫疗法时代，三级淋巴结构（Tertiary Lymphoid Structures, TLS）已成为一个关键的预后和治疗反应预测标志物。2025年第三届TLS研讨会汇集了该领域的顶尖研究成果，揭示了TLS并非千篇一律，而是在结构、细胞组成、功能状态和发育轨迹上呈现出高度的异质性。这种多样性由肿瘤特异性的趋化因子梯度塑造。例如，通过空间多组学分析发现，即使在组织学上看似相似的TLS，其内部的T细胞也可能具有截然不同的功能谱，从而独立于传统的免疫标志物（如PD-L1或CD8+T细胞状态）影响患者的临床结局。
迈向标准化的TLS病理学筛查
为了实现TLS临床应用的标准化，研究者开发了基于苏木精-伊红-藏红（HES）染色结合CD20/CD23免疫组化的病理学筛查算法，以可靠地识别含有CD23+滤泡树突状细胞（FDC）网络的生发中心（GC），从而定义成熟TLS（mTLS）。回顾性泛癌研究和前瞻性临床试验（如PEMBROSARC试验）均证实，mTLS的存在能够独立预测患者对免疫检查点抑制剂（Immune Checkpoint Inhibitors, ICI）的更好反应和生存获益。尽管该技术面临工作强度大、组织消耗多等挑战，但深度学习辅助评估的开发有望推动其大规模的临床应用。
胶质母细胞瘤中TLS形成与调控
在胶质母细胞瘤（Glioblastoma, GBM）中，TLS较为罕见，且其形态受解剖位置（如靠近脑膜或脑室）影响。研究显示，TLS的存在与肿瘤内更高的T细胞浸润和患者更长的生存期相关。实验模型证明，通过腺相关病毒（AAV）靶向血管递送细胞因子LIGHT可以诱导TLS形成，并促进T细胞依赖的抗肿瘤免疫。单细胞RNA测序（scRNA-seq）和空间转录组学分析表明，CCR7+CD4 T细胞的积累是GBM中TLS形成的起始步骤，随后淋巴组织组织者细胞的激活和B细胞的招募共同促进了TLS的发育。TLS在GBM中也具有异质性，包括T细胞富集型（T-TLS）、混合型（M-TLS）、B细胞富集型（B-TLS）和具有清晰分区的结构。
绘制肿瘤内的抗原受体图谱
理解驱动抗肿瘤反应的B细胞和T细胞克隆型及其特异性是TLS生物学的核心问题。新开发的空间转录组学方法“Spatial VDJ”能够捕获人体组织中的B细胞受体（BCR）和T细胞受体（TCR）序列。应用该方法对人类乳腺癌肿瘤的多区域分析显示，B细胞和T细胞克隆多样性存在差异，并可在同一患者的肿瘤内观察到克隆共享和向TLS及肿瘤区域的浸润。早期研究还从乳腺癌患者的B细胞受体序列中生产了重组抗体，发现它们大多与细胞内（自身）抗原结合，这支持了肿瘤浸润B细胞存在自身反应性的观点。这项技术为跨癌种和物种在TLS中进行空间分辨的抗原受体发现提供了可能。
空间转录组学揭示NSCLC免疫治疗应答的关键决定因素
在非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer, NSCLC）中，利用空间转录组学研究发现，经围手术期化疗-免疫检查点抑制剂联合治疗后，肿瘤消退区域内的TLS显著富集。这些TLS内主要包含活化的B细胞、记忆B细胞和浆细胞，它们是维持持续免疫激活的关键驱动因素。此外，研究还发现特定的免疫激活型癌症相关成纤维细胞（Cancer-Associated Fibroblasts, CAFs）亚型（如CAF2）的富集，提示肿瘤基质可能有助于维持免疫激活状态。初步数据显示，不同的CAF亚型（CAF1和CAF2）与TLS的空间邻近性存在差异，这表明CAF/TLS的通讯网络可能影响抗肿瘤免疫反应的强度和质量。
TLS与肿瘤实质中免疫治疗响应的空间组织
结合高维组学分析和离体技术的研究揭示了TLS在免疫治疗中的作用机制。对微分离的TLS和肿瘤区域进行TCRβ测序发现，这两个区域共享大量扩增的TCR克隆，表明TLS中的T细胞活性并非由独特的T细胞库驱动。空间转录组分析显示，TLS区域的T细胞偏向于早期功能障碍状态，而肿瘤床区域则富集终末耗竭和细胞毒性表型的细胞。利用患者来源的肿瘤片段离体培养技术进行抗PD-1治疗实验表明，TLS和肿瘤实质中的肿瘤特异性T细胞均可被重新激活，但TLS在细胞因子和趋化因子分泌方面表现出更高的强度和多样性。这些发现提示，TLS通过作为前体样细胞的储存库以补充抗肿瘤T细胞池，并在PD-1阻断后放大T细胞反应，从而促进治疗响应。
B细胞与TLS受免疫-肿瘤-基质相互作用的调控
在实体瘤中，B细胞是肿瘤微环境（Tumor Microenvironment, TME）和TLS的主要组成部分。研究表明，在卵巢癌患者中，肿瘤部位决定了TLS的形成和活性。研究人员开发了一个原位TLS特征，该特征在疾病的三个部位（卵巢、输卵管和大网膜）共享，并与改善的预后相关。研究还揭示了间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）对TLS形成的重要性：当癌症驯化的MSCs（CA-MSCs）存在于卵巢TME中时，会导致B细胞功能降低并阻碍MSCs向对TLS形成至关重要的FDC分化。此外，研究还定义了TLS的三种状态：淋巴细胞聚集（LA）、无生发中心的TLS和有生发中心的TLS。值得注意的是，即使在转移灶（如脑转移瘤）中，所有患者都会形成LA，但黑色素瘤脑转移患者的LA功能活跃且与更好的预后相关，而肺癌脑转移患者的LA功能活性较低且与预后改善无关。研究还发现，通过滤泡外（Extrafollicular, EF）途径分化的B细胞功能低于经GC教育的B细胞，这些B细胞被称为“耗竭”B细胞，它们在晚期疾病中积累，具有改变的归巢受体和多种抑制B细胞功能的B细胞特异性抑制性受体。
空间决定的TLS特征与肾癌免疫治疗耐药相关
虽然TLS通常与包括透明细胞肾细胞癌（ccRCC）在内的多种癌症对ICI的更好反应相关，但许多TLS阳性肿瘤仍对治疗耐药。整合性分析发现，在ICI无应答者（NR）的TLS阳性肿瘤中，四个GABA受体相关基因（GABBR1, GNAI1, ADCY2, APBA1）上调，定义了“GABA-high”ccRCC亚群，该亚群与更高的NR率和更短的无进展生存期相关。空间转录组和代谢谱分析表明，近曲小管样肿瘤细胞在NR肿瘤的未成熟TLS附近产生GABA，导致免疫激活受损、抗原呈递减少以及三羧酸（TCA）循环活性升高。体外实验证实，GABA能抑制人B细胞的抗体分泌。体内实验则显示，将抗PD-1治疗与GABA合成抑制剂（3-MPA）联用可增强抗肿瘤疗效。这些发现将GABA确定为一种新型的免疫抑制代谢物，驱动了TLS阳性ccRCC的ICI耐药，并突出了靶向GABA能轴以恢复TLS功能的治疗潜力。
结语
自上一次研讨会以来，成熟TLS对患者免疫治疗反应的积极影响已扩展到多种癌症类型。TLS不仅是补充肿瘤微环境的前体样T细胞的储存库，还能产生浆细胞迁移至肿瘤床并分泌与肿瘤细胞抗原结合的抗体。然而，并非所有携带瘤内TLS的患者都对免疫治疗有反应。高分辨率空间技术的爆发加深了我们对TLS状态多样性，以及肿瘤内异质性对TLS形成和功能影响的理解，突显了其邻近微环境对其功能性的重要影响。目前，利用空间VDJ技术正在解决TLS中激活的T细胞和B细胞免疫反应特异性的关键问题。已开发出能自发形成TLS的生理相关小鼠模型，有助于解决癌症中TLS形成的多步骤启动问题。诱导TLS新生的策略正在开发中，其与联合疗法的应用代表了癌症治疗的新途径。
